浙江温州地区腹泻患儿腺病毒的检测及分型

目的:了解浙江温州地区婴幼儿腹泻患者不同型别腺病毒的感染情况。方法:根据Gene Bank中腺病毒六邻体基因序列设计一对通用引物,建立PCR方法检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA,并对阳性标本进行PCR产物测序分析。结果:建立了快速、特异地检测婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA的PCR技术;127份婴幼儿腹泻标本中腺病毒DNA阳性4份,阳性率为3.15%(4/127);经PCR产物直接测序分析,3份为Ad3型,阳性率为2.36%(3/127),1份为Ad7型,阳性率为0.79%(1/127)。结论:PCR技术结合PCR产物直接测序的方法,使分析具有敏感、特异等优点,适用于腹泻标本中腺病毒的检测及分型;引起浙江温州地区婴幼儿腹泻的腺病毒主要为Ad3型和Ad7型。

LBP对LPS刺激巨噬细胞分泌细胞因子的调节作用

目的采用脂多糖结合蛋白(LBP)和脂多糖(LPS)以不同比例、不同方式刺激THP-1细胞分泌细胞因子,探讨LBP在LPS转运和活化过程中的调节作用,以及单核巨噬细胞受LPS活化后其炎性和负炎性因子分泌的平衡情况。方法将THP-1细胞进行增殖和传代后,经PMA刺激,转化为巨噬细胞。实验分为4个组:LPS组(用不同浓度LPS单独刺激)、LBP组(用不同浓度LBP单独刺激)、LBP/LPS预孵育组(LBP和LPS以不同浓度比例混合,37℃孵育15min)、LBP/LPS不孵育组(先加一定浓度LPS,再以不同浓度比例加入LBP)。分别培养4、12、24h后,吸出上清液,发光法检测TNF-α,IL-10和IL-6水平,并进行统计学分析。结果 THP-1细胞为悬浮生长,用PMA诱导转化后变为巨噬细胞,变为贴壁生长。分别用1、10、100、1000ng/mlLPS单独刺激巨噬细胞分泌TNF-α,1ng/ml和其他组间均有统计学差异(P<0.05),其余3组间无统计学差异(P>0.05)。用LBP刺激巨噬细胞,LBP浓度为1000ng/ml时,TNF-α和IL-6分泌达到最高。LBP/LPS不孵育组中,TNF-α和IL-6分泌曲线在LBP/LPS为10出现最高峰。LBP/LPS预孵育组的TNF-α和IL-6分泌曲线较平缓,无明显分泌高峰。LPS浓度为1000ng/ml时IL-10为8±0pg/ml,其余组IL-10均小于5pg/ml。经析因分析,LPS和LBP之间有交互关系(F=3.425,P<0.01),两者是否预孵育和培养时间有交互作用(F=4.240,P=0.026),LBP浓度和是否预孵育之间有交互作用(F=4.896,P<0.01)。LPS浓度和是否预孵育,LPS浓度和培养时间,LBP浓度和培养时间均无明显交互作用(P>0.05)。结论 LPS是活化单核巨噬细胞的重要物质,LPS在高浓度时刺激巨噬细胞分泌细胞因子具有饱和现象。LBP本身在高浓度时具有刺激巨噬细胞的活性,低浓度的LBP能增强LPS对巨噬细胞的活化,高浓度LBP则起到负性调节作用。体外单核细胞经PMA分化成巨噬细胞后,再用LPS刺激,IL-10无明显分泌,引起炎性和负炎性因子的严重失衡。

BNP在甲亢性心脏病患者早期诊断及左心功能评估的价值

目的:探讨血浆脑钠肽(BNP)在早期诊断甲亢性心脏病及评估左心功能中的应用价值。方法:测定并比较49例甲亢性心脏病患者、28例甲亢患者及30例健康对照者血浆BNP水平及血清FT3、FT4、T3、T4、TSH水平,结合彩色多普勒超声心动图中的左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)等指标,研究BNP在甲亢的心脏病患者左心功能评估中的应用价值。结果:甲亢性心脏病患者血浆BNP水平较甲亢组和正常组显著升高(P<0.01),并随心功能的恶化而逐级增高。通过测定超声心动图指标也同时说明甲亢性心脏病病人的左心功能受损。结论:血浆BNP水平可结合超声心动图用于甲亢性心脏病患者的早期诊断及左心功能评估。

2型猪链球菌Sao-M蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的制备并鉴定2型猪链球菌重组Sao-M蛋白的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb),为建立免疫学快速检测方法及Sao蛋白的功能研究奠定基础。方法用重组Sao-M蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术建立稳定分泌抗Sao-M蛋白的杂交瘤细胞株,制备抗Sao单克隆抗体,采用IgG亚类鉴定试剂盒鉴定单克隆抗体的IgG亚型,采用间接ELISA法测定抗体效价。将05ZYH33与单抗共孵育,检测单克隆抗体与细菌表面具有天然构象Sao蛋白的结合能力。结果筛选到4株能持久、稳定分泌抗Sao蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(分别命名为1G5、1B10、2A10、3A6),均为IgG1型,ELISA测定腹水抗体效价>1︰102 400;4株单克隆抗体均能与05ZYH33表面天然构象的Sao蛋白结合,对细菌形态产生显著影响。结论成功制备高效价的抗Sao-M单克隆抗体,为建立快速检测猪链球菌感染的免疫学方法及Sao蛋白的功能研究奠定了基础。