网络资源在细胞生物学教学和学习中的应用

细胞是生命体结构和功能的基本单位,细胞生物学是现代生物学的交叉、核心学科之一。随着网络信息技术的发展和广泛应用,丰富的网络资源在高等院校细胞生物学课程教与学的各个环节中也发挥着越来越重要的作用。笔者结合自己多年来在细胞生物学学习、教学和科研过程中使用网络资源的经验,主要介绍如何在几个著名的网络搜索引擎站点和生物学相关站点上查询细胞生物学领域的重要知识点。

医院感染革兰阴性杆菌中整合子介导耐药及水平播散机制研究

目的研究整合子在医院感染革兰阴性杆菌中的分布及其与病原菌耐药的相关性，探讨Ⅰ类整合子与临床耐药播散的关系。方法运用K—B法检测临床株的耐药表型，纸片扩散法检测产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），PCR扩增筛选含整合子的临床菌株，接合传递实验、套式PCR、质粒谱分析及DNA测序研究携带耐药基因的Ⅰ类整合子与耐药播散的关系。结果66．4％的医院感染革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子阳性，未检测出Ⅱ、Ⅲ类整合子；Ⅰ类整合子可变区扩增片段大小从0．7～2．3kb，编码对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物和氯霉素耐药的基因；整合子阳性组中ESBLs、多药耐药菌均明显高于阴性组；整合子可通过质粒在不同菌属间水平传播。结论Ⅰ类整合子在医院感染革兰阴性杆菌中广泛分布，可通过质粒在不同菌属间水平传播，在耐药基因传播中起重要作用，应引起临床足够的重视。

克氏综合征睾丸体积大小与性激素的相关性及睾丸组织超微结构的研究

目的探讨克氏综合征睾丸体积大小与性激素的相关性及造成克氏综合征男性不育的发病机理。方法对20例克氏综合征患者和10例正常对照组血清进行性激素测定,同时作睾丸组织活检进行病理切片及电镜超薄切片观察。结果克氏综合征与正常对照组睾丸体积、生精小管直径和管壁厚度及血清FSH、LH、T之间均有极显著的差异(P<0.001),患者睾丸体积大小与FSH和LH值呈负相关性,与T值呈正相关性;睾丸组织超微结构观察结果表明生精小管界膜有不同程度的显著异常变化,主要表现为界膜增厚及纤维化增生,基膜增厚及纤维化增生,肌样细胞的空泡状变性或去分化增生。支持细胞病理变化呈现多样性特征,胞质内有大量内质网呈空泡状变性,部分线粒体扩张。间质内血管壁明显增厚及血管内皮细胞肿胀,基膜及血管腔内大量胶原纤维增生。结论推导出患者睾丸体积大小与FSH、LH、T的多重相关回归方程;同时认为克氏综合征睾丸组织结构发生严重的纤维化增生,促使其生精细胞形成过程发生早期的、程度严重的障碍和病理学变化,这是造成其男性不育的主要原因。

114对反复流产夫妇的染色体分析

目的:分析反复流产夫妇的异常核型发生率、形成原因及其染色体分析的临床价值。方法:对114对反复流产夫妇行外周血染色体分析。结果:检出异常染色体核型13例,占受检夫妇人数的5·7%,异常核型中,平衡易位最多,占异常总数的76·92%,其中相互易位10例,罗伯逊易位3例;其次为倒位,为6号、9号以及Y染色体的臂间倒位。结论:对于不明原因的反复流产夫妇,染色体分析必须作为常规的检测方法。

北草蜥精子形成的超微结构研究

目的研究北草蜥的精子形成过程。方法以2·5%戊二醛和1%锇酸双重固定,常规制作石蜡切片和超薄切片,光镜和透射电镜观察。结果北草蜥精子形成过程主要有核逐渐延长、染色质浓缩、顶体形成、线粒体逐步发达与融合、细胞质消除与鞭毛形成等。可分为4个时期:时期Ⅰ,精子细胞前顶体囊泡移至核膜时,核膜凹陷形成封闭的顶体囊泡,囊泡底部靠近核膜有一电子致密的顶体颗粒,在1个薄层有颗粒的胞质中形成顶体下颗粒,将顶体颗粒和核膜连接起来;时期Ⅱ,精子细胞顶体囊泡扁平,细胞核延长,染色质浓缩成短丝状的染色质纤维;时期Ⅲ,精子细胞核进一步延长,染色质纤维变粗变长,并沿核纵轴方向有序排列,近端中心粒及尾部开始出现;时期Ⅳ,Sertoli细胞质内纵行微管出现,至精子释放前消失,精子细胞顶体发育完全,终环形成,核内染色质纤维浓缩至最大限度,呈高电子致密度的均质状态。结论北草蜥精子形成过程中细胞核及细胞器的超微结构变化在有鳞类蜥蜴分类上具有重要意义。

一例特殊inv(Y)形成机理的研究

应用双色荧光原位杂交的方法,国内首次报道一例特殊inv(Y)异常的性质,探讨Y染色体倒位结构异常的形成机理以及与习惯性流产临床表型的关系。应用Biotin11dUTP标记的Y染色体短臂断裂点Yp11.3探针(编号889)和CY3标记的Y染色体长臂断裂点Yq12远端异染色质区探针(编号PY3.4),对1例G显带核型分析为[46,XY(90%)/46,X,inv(Y)(p11.3;q12)]的平衡易位携带者进行双色荧光原位杂交研究。双色FISH结果显示,该易位携带者异常核型比例为22%,稍高于G显带分析中确定的比例。而且,除G显带检测出的倒位类型外,又有两种类型的倒位,其中涉及到常规显带技术难以检测出的染色单体型倒位。3种倒位类型的存在说明该患者inv(Y)断裂点呈不均一性。FISH技术是一种能准确可靠检测出染色体倒位形成的重要手段。

念珠菌耐药相关基因研究

目的研究耐氟康唑热带念珠菌临床株Fc 30的基因突变耐药机制。方法对氟康唑靶酶基因erg 11进行PCR扩增,DNA测序,对比分析临床耐药株与敏感株及标准株的靶酶基因DNA序列,确定耐药株基因一级结构上的突变点,并推测分析靶酶蛋白的氨基酸改变及与氟康唑耐药的相关性。结果氟康唑敏感株Fc 17的erg 11基因DNA序列与氟康唑敏感标准菌ATCC750完全一致,耐药株Fc 30出现+225、+264、+395、+461、+513处点突变,导致132、154位氨基酸突变。结论与敏感株相比,耐氟康唑热带念珠菌Fc30 erg11基因出现Y132F耐药相关突变。

应用FISH技术分析一例平衡易位t(1;16)伴反复流产

目的: 应用FISH技术分析报道一例伴有t(1;16)的反复流产(RSA)者。方法: 用Biotin-11 -dUTP标记的1号染色体长臂末端探针(1qter)和16号染色体着丝粒特异性α卫星DNA探针(16cen)以及CY3标记的1号染色体着丝粒特异性α卫星DNA探针(1cen)对1例常规G显带核型分析为46,XY,t(1;16)(q21; q13)的反复流产患者进行双色荧光原位杂交研究。 结果: 双色FISH显示该患者t(1;16)易位所致的衍生染色体着丝粒均含有红绿两个信号融合而成。 结论: 双色FISH证实衍生的染色体着丝粒是由1号和16号染色体着丝粒共同组成,该患者最后的核型确诊为46,XY, t(1;16) (p10; q10)。FISH技术是检测染色体结构异常的一种良好的辅助手段。

两步法快速建立文蛤高重复性RAPD反应体系

针对RAPD技术重复性不理想的问题,以3个文蛤群体为研究材料,确立“两步法”建立高重复性RAPD优化体系。第一步初筛,即以正交分析法对文蛤RAPD反应体系中各关键组分(DNA模板、引物、dNTPs、Mg2+、Taq聚合酶),均设4个水平进行分析,确定两个待选体系;第二步检测,即以本研究中创立的重复性检测方法对待选方案进一步筛选。结果表明:初筛的两个反应条件体系Ⅰ和体系Ⅱ尽管在扩增条带的产量方面无明显差异,但体系Ⅱ各重复性检测指数明显高于体系Ⅰ;体系Ⅱ为更适合文蛤的RAPD高重复性反应体系。“两步法”中采用的多因素联合优化方案和RAPD重复性检测方法对RAPD技术的改善具有一定的指导意义。

鲜食菜用型旱粮生产现状及其发展前景与对策

近年来鲜食菜用型旱粮品种的推广应用,为开拓销售市场起到了积极的作用,受到了消费者的欢迎。发展鲜食菜用型旱粮是调整和优化粮食生产结构的重要途径。对鲜食菜用型旱粮的生产现状、发展前景以及发展对策进行了论述。

Solexa测序法研究肺炎克雷伯菌质粒基因组的耐药基因

目的通过Solexa高通量测序法研究肺炎克雷伯菌的质粒与耐药性的关系。方法菌株为7年临床分离的206株肺炎克雷伯菌。提取所有菌的全部质粒DNA，Solexa高通量测序获得大规模的短序列。SOAP软件对质粒基因进行分析拼接，分析结果与相关数据库进行比对。MAQ软件分析质粒基因组包含的超广谱β-内酰胺酶（ESBL）多样性及单核苷酸多态性（SNP）情况。结果肺炎克雷伯菌质粒基因组中已知的直接与耐药相关的基因就有13种。质粒基因组中存在多个ABC主动外排转运系统。发现4种编码β-内酰胺酶的ORF，其中SHV型ESBLs分布最广。系统分析了206株肺炎克雷伯菌质粒基因组中SHV型ESBLs的SNPs位点，发现存在着大量的非同义替换SNPs位点。结论发现质粒中SHV型ESBLs基因可能受到选择压力，存在着大量的非同义替换SNPs位点。肺炎克雷伯菌质粒存在外排药物耐药方式，从而形成低水平的非特异多重耐药。

Solexa测序法在肺炎克雷伯菌质粒基因组测序中的应用

Solexa测序方法以单分子阵列技术为基础，具有所需样品量少、高通量、高精确性、拥有简单易操作的自动化平台和功能强大等特点。可以同时检测上亿个核苷酸片段，在同一个芯片或几个芯片上花费很少的成本（只需常规方法的1％）就可测试全基因组。与传统的Sanger测序技术相比，无需建库与克隆挑取的工作，且每次反应只要7．5h，即可得到1亿个核苷酸序列，测序速度是传统Sanger方式的100倍。Solexa测序技术为目前遗传分析和功能基因组等研究领域提供了全新的应用方案。