多重耐药MRSA耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因检测

目的明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphy-lococcusaureus,MRSA)耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因存在状况。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测20株多重耐药MRSA中耐消毒剂基因(qacA)、β-内酰胺类耐药相关基因(mecA、blaTEM)、氨基糖苷类耐药相关基因(氨基糖苷类修饰酶基因)[aac(6′)/aph(2")、aph(3′)-、ant(3")-、ant(4′,4")、ant(6)-]、四环素耐药相关基因(tetM)、红霉素耐药相关基因(erm)和万古霉素耐药相关基因(vanA、vanB)。结果20株MRSA中,qacA、mecA、blaTEM、aac(6′)/aph(2")、aph(3′)-、tetM和erm基因PCR扩增均阳性,1株ant(4′,4")基因阳性,而ant(3")-、ant(6)-、vanA和vanB4种基因均阴性。结论临床分离的多重耐药MRSA中qacA、mecA、blaTEM、aac(6′)/aph(2")、aph(3′)-、tetM和erm基因携带率均很高;在MRSA中发现qacA基因为我国首次报道,应引起医院感染监控部门高度重视。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌和嗜麦芽寡养单胞菌抗菌药物耐药基因研究

目的分析浙江省湖州解放军第98医院自临床分离的耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPa)和嗜麦芽寡养单胞菌(Sm)中抗菌药物相关耐药基因存在状况。方法2003年9月至2004年10月间从临床分离28株IRPa和19株Sm,采用聚合酶链反应及序列分析的方法分析8种β-内酰胺酶基因(blaIM P、blaV IM、blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaPER、blaVEB和blaGES)、9种氨基糖苷类修饰酶基因(AM E s基因)[aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ和aph(3′)-Ⅵ]、外膜孔蛋白D 2基因(op rD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-su l1)、氯霉素乙酰转移酶基因(ca tB)、氯霉素外排蛋白基因(cm l1)。结果28株IRPa中blaTEM、blaOXA、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ和qacE△1-su l1基因的阳性株数(%)分别为20株(71.4%)、1株(3.6%)、23株(82.1%)、10株(35.7%)、15株(53.6%)、8株(28.6%)和24株(85.7%),AM E s基因总阳性率为89.3%,blaOXA基因经序列分析确认为blaOXA-10型超广谱β-内酰胺酶,25株(89.3%)发生op rD基因缺失突变。19株Sm中aac(6′)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ及qacE△1-su l1基因的阳性株数(%)均为2株(10.5%);其余基因均阴性。结论临床分离的IRPa中存在blaTEM、blaOXA-10、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ和qacE△1-su l1基因,op rD基因缺失突变率很高。Sm中存在aac(6′)-Ⅱ、ant(2")-Ⅰ及qacE△1-su l1基因。

多重耐药铜绿假单胞菌耐药基因及亲缘性分析

目的了解解放军第98医院临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌(MRPA)中抗菌药物相关耐药基因存在状况及菌株亲缘性。方法在2003年9月-2004年10月间从临床分离30株MRPA,采用PCR及序列分析的方法分析24种基因blaTEM、blaSHV、blaOXA-10群、blaPER、blaVEB、blaIMP、blaVIM、blaGES、blaCARB、blaDHA、blaMIR、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅲ、aac(3)-Ⅳ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、aph(3′)-Ⅵ、oprD、qacE△1-sul1、catB、cml1,采用Average法进行耐药基因聚类分析以确定菌株亲缘性。结果30株MRPA中blaTEM、blaOXA-10群、blaCARB、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ、qacE△1-sul1和cml1基因的阳性率分别为66.7%、3.3%、3.3%、76.7%、3.3%、33.3%、53.3%、26.7%、83.3%和3.3%,blaOXA-10群基因经序列分析确认为blaOXA-10型ESBLs,27株(90.0%)发生oprD基因缺失突变;其他基因均阴性;根据耐药基因聚类分析该30株MRPA可分4群,为医院感染所致。结论临床分离的MRPA中至少存在10种耐药基因,oprD基因缺失突变率很高,MRPA可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行。

羊栖菜多糖诱导MCF-7细胞凋亡机制的研究

目的研究羊栖菜多糖对MCF7细胞凋亡的诱导作用及对凋亡相关基因表达的影响,探讨藻类多糖的抗肿瘤机理。方法流式细胞仪观察SFPS对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响;RTPCR法检测凋亡相关基因Fas,FasLmRNA的表达。结果羊栖菜多糖可阻滞MCF7细胞由G0/G1期进入S期,升高细胞凋亡指数(APO);同时上调Fas,FasLmRNA的表达。结论羊栖菜多糖可能通过上调凋亡相关蛋白Fas,FasL的表达,促进肿瘤细胞凋亡达到治疗肿瘤的目的。

氰化钠急性染毒对大鼠大脑皮层损伤的作用机制

目的研究氰化钠(NaCN)急性染毒对大鼠大脑皮层及皮层线粒体损伤作用及其机制。方法腹腔注射NaCN亚致死剂量(3.2 mg/kg)染毒5、15、30、60、90 min后采用比色法测定大鼠大脑皮层和皮层线粒体相关氧化和抗氧化酶系活性;用透射电镜观察各时相点染毒大鼠脑组织超微结构变化;按Veitch和Dunkley等方法测定不同浓度氰化钠体外孵育大鼠大脑皮层线粒体呼吸链复合酶的活性。结果(1)NaCN染毒5 min后大脑皮层和皮层线粒体过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、钠钾腺苷三磷酸酶(Na+-K+-ATPase)、钙镁腺苷三磷酸酶(Ca2+-Mg2+-ATPase)的活性明显下降,黄嘌呤氧化酶(XOD)活性明显增高,以皮层线粒体各指标改变最为显著(均P<0.001)。(2)染毒大鼠神经细胞严重受损,神经元、神经胶质细胞、线粒体等出现严重水肿、空泡化伴有溶解现象。(3)经NaCN损伤后,离体皮层线粒体呼吸链复合酶Ⅳ的活性显著下降(P<0.001),同时引发复合酶Ⅰ活性的剧增(P<0.001)和复合酶Ⅱ活性的下降(P<0.01)。结论NaCN急性中毒可导致大脑皮层及皮层线粒体氧化-抗氧化系统平衡失调,抗氧化能力下降,自由基生成增多,ATPase活性下降,并增加了线粒体呼吸链的电子漏,提示皮层线粒体损伤在氰化物中枢毒作用中可能起重要作用。

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合酶基因及质粒AmpC酶基因检测

目的明确我院临床分离的阴沟肠杆菌中Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1)、qacE△1-sulⅠ基因和质粒Am鄄pC酶基因(AmpCMIR、AmpCDHA)存在状况。方法采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药基因。结果该20株菌呈现多重耐药,对亚胺培南和美罗培南均敏感,对阿莫西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢噻吩和头孢西丁完全耐药,头孢吡肟和复方新诺明的耐药率分别为25.0%和85.0%,对氨基糖苷类抗生素的耐药率在60.0%～90.0%之间,其余的耐药率在80.0%～95.0%之间。intⅠ1、qacE△1-sulⅠ、MIR和DHA基因的阳性株数(%)分别为19株(95.0%)、17株(85.0%)、17株(85.0%)、1株(5.0%)。结论我院临床分离的阴沟肠杆菌多重耐药严重,intⅠ1、qacE△1-sulⅠ和MIR基因携带率很高。在阴沟肠杆菌中检出intⅠ1、qacE△1-sulⅠ以及质粒型AmpCMIR基因在我国大陆均属首次报道。

铜绿假单胞菌亚胺培南及消毒剂耐药相关基因研究

目的了解临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中金属β内酰胺酶基因(blaIMP和blaVIM)、外膜孔蛋白D2(OprD2)基因(oprD)、消毒剂-磺胺耐药相关基因(qacE△1-sulⅠ)存在状况。方法采用ATBPSE5药敏试验条板微量肉汤法测定28株铜绿假单胞菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)技术及序列分析的方法检测耐药基因。结果该28株铜绿假单胞菌对亚胺培南、氨苄西林/舒巴坦、庆大霉素、妥布霉素和复方新诺明均完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦的敏感率最高为64.3%,其余的耐药率在57.1%～92.9%之间。28株Pa中blaIMP和blaVIM基因均阴性,25株(89.3%)oprD基因缺失,24株(85.7%)qacE△1-sulI基因阳性。结论浙江湖州解放军第98医院临床分离的对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌多重耐药严重,oprD基因缺失是其对亚胺培南耐药的重要原因,qacE△1-sulⅠ基因携带率很高。

颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌gyrA基因突变与环丙沙星耐药关系研究

目的了解分离自颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌gyrA基因突变与环丙沙星耐药性的关系。方法用ATB药敏试验条板微量肉汤法测定27株鲍曼不动杆菌对14种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析gyrA基因序列。结果27株菌中除HZ16号菌株对环丙沙星敏感外,其余26株均耐药。序列分析表明HZ16号菌株gyrA基因无突变,其序列已登录GenBank(accessionAY642140),其余26株耐药菌均存在gryA基因突变,导致耐喹诺酮决定区(QRDR)第83位的丝氨酸被亮氨酸取代。其中HZ28号菌株gyrA基因序列也已登录(GenBankAY642141)。结论gyrA基因突变是导致分离自颅脑外伤病人痰液中鲍曼不动杆菌对环丙沙星耐药的主要原因。

鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因分布研究

目的明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的耐β内酰胺类抗生素鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合酶基因(int Ⅰ 1)及氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifying enzymes,AMEs)基因分布状况。方法采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析 int Ⅰ 1及6种 AMEs 基因 aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅲ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和 aph(3′)-Ⅵ。结果鲍曼不动杆菌对头孢噻吩完全耐药,亚胺培南、美洛培南及氨基糖苷类耐药率分别为1.7%、1.7%和86.7%。60株菌中,int Ⅰ 1、aac(3)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ和 aph(3′)-Ⅵ基因 PCR 扩增阳性株数(%)分别为35(58.3%)、31(51.7%)、33(55.0%)、36(60.0%)、12(20.0%)和2(3.3%),aac(3)-Ⅲ均阴性。结论解放军第98医院临床分离的耐β内酰胺类鲍曼不动杆菌多重耐药严重,int Ⅰ 1及 AMEs 基因携带率均较高。

N-乙酰-L-半胱氨酸对氰化钠致大鼠线粒体损伤的酶系保护作用

[目的]研究N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对氰化钠(sodium cyanide,NaCN)所致大鼠大脑皮质线粒体损伤的保护作用。[方法]①取SD大鼠66只,按每组6只随机分成11组:第1组,生理盐水(Normal saline,NS)组,腹腔注射NS 10ml/kg;第2～6组,系按染毒后5个不同时相节点先后处死的NaCN染毒组,均于左侧腹腔注射NS 10ml/kg,20min后于右侧腹腔注射NaCN 3.2mg/kg(亚致死剂量)染毒;第7～11组,系5个也按与上述相同时相节点先后处死的NAC保护组,相同染毒,只是在染毒前20min先于左侧腹腔注射NAC 250mg/kg。分别于染毒后5、15、30、60、90min 5个不同时相节点处死各组,并分离大脑皮质,用比色法测定皮质线粒体内过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、钠钾腺苷三磷酸酶(Na^+-K^+-ATPase)、钙镁腺苷三磷酸酶(Ca^(2+)-Mg^(2+)- ATPase)5种酶活性。②再另制备16只大鼠的离体大脑皮质线粒体,分别悬浸于PBS缓冲液(PBS对照组)、0.1mmol/L NAC(NAC对照组)、0.1mmol/L NaCN(NaCN甲组)、1mmol/L NaCN(NaCN乙组)、0.1mmol/L NAC+0.1mmol/L NaCN(NAC甲组)、0.1 mmol/L NAC+1 mmol/L NaCN(NAC乙组)6种液体15min并离心后,按Veitch和Dunkley等方法分别测定其线粒体复合酶Ⅰ～Ⅳ的活性。[结果]①与NaCN染毒组比较,NAC保护组大鼠大脑皮质线粒体内GSH-Px,SOD,Na^+-K^+- ATPase、Ca^(2+)-Mg^(2+)-ATPase活性明显增高,XOD活性显著下降(P<0.01)。②NAC组无明显逆转NaCN对线粒体呼吸链复合酶Ⅳ活性的抑制,但可部分逆转呼吸链复合酶Ⅰ活性的剧增(P<0.01)和复合酶Ⅱ活性的下降(P<0.05)。[结论] NAC可通过其抗氧化作用,促进氧化抗氧化平衡,保护线粒体功能,从而对抗氰化物中毒所致大脑皮质线粒体损伤,发挥其对氰化物中毒的保护作用。

药物史知识在大学药理学教学中的运用

药理学是一门重要医学基础课程，也是教学难度大的课程。要达到教学效果，能否激发学生的兴趣就成为学好这门课程关键。文章介绍结合药理学实际教学情况，将药物史知识引入理论及实验教学内容中的教学方法，目的在于激发学生学习药理学知识的兴趣，以达到良好的教学效果。

足内在肌的解剖学研究

目的研究足内在肌的解剖结构特点,为足部生物力学模型、假肢设计、临床肌皮瓣移植和足部功能分析等外科手术设计提供解剖学基础和依据。方法对12只成人足标本进行系统的解剖,其中左足5只,右足7只,记录各足内在肌的起止点,用游标卡尺和排水量技术分别测量肌肉的长度、周径和容量。结果足内在肌的解剖学特点与足标本的大小存在一定的关系。平均肌肉长度从(3.39±0.75)cm(拇收肌横头)到(13.15±0.84)cm(拇展肌),平均肌肉周径从(1.45±0.14)cm(第四蚓状肌)到(6.20±0.62)cm(拇短屈肌),平均肌肉容量从(0.58±0.13)ml(第四蚓状肌)到(14.00±1.20)ml(拇展肌)。结论拇展肌、趾短屈肌以及拇短屈肌具有解剖学代表性,三者各自肌肉长度、周径、容量均较大。