创伤弧菌脓毒症病理组织学及血清细胞因子动态变化研究

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症时病理组织学及血清细胞因子的动态变化情况。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组),光镜下观察染菌大鼠主要脏器病理改变,ELISA法测定染菌后各时间点大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)含量。结果染菌后16h光镜可见肺充血、出血明显,间质弥漫性炎细胞浸润,肺泡间隔形态改变,有局灶性坏死,肺纤维组织增生;肌肉呈严重蜂窝织炎,可见肌纤维断裂,有灶性坏死。染菌后2h起血清TNF-α含量明显升高(P<0.05);染菌后9h起血清IL-10含量升高(P<0.05)。结论VV脓毒症可致肺、肌肉等多组织脏器损害,VV脓毒症早期血清中以促炎因子TNF-α升高为主,脓毒症中后期时抗炎因子IL-10逐渐增多。

抗菌药物对创伤弧菌脓毒症大鼠血清抗炎／促炎细胞因子的影响

创伤弧菌（vibrio vulnificus，VV）是一种嗜盐性革兰阴性（G^-）弧菌，广泛存在于海水及海产品中，适应于热带、亚热带环境，可引起人体严重感染、脓毒症等。以往临床观察发现，脓毒症及其引发的多器官功能障碍综合征（MODS）是VV脓毒症患者死亡的主要原因。大量激活的炎性细胞所释放的多种内源性介质参与了脓毒症炎症反应过程，包括促炎细胞因子和抗炎细胞因子。

头孢哌酮钠联合左氧氟沙星治疗对大鼠创伤弧菌脓毒症血中mCD14的影响

目的探讨头孢哌酮钠与乳酸左氧氟沙星联用对大鼠创伤弧菌(V ibrio vu ln ificus,VV)脓毒症外周血中膜性脂多糖(LPS)受体mCD14的影响。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素(FITC)标记的羊抗兔抗体对外周血细胞进行免疫染色,流式细胞仪测定各组FITC-CD14阳性细胞数及其荧光强度,同时观察各组染菌大鼠行为学改变情况。结果VV组FITC-CD14细胞阳性数在染菌6 h后明显升高(P<0.01),荧光强度增强;AA组在染菌6 h时,FITC-CD14细胞阳性数明显升高(P<0.01),但药物干预后FITC-CD14细胞阳性数开始减低,至染菌后12 h FITC-CD14细胞阳性细胞数为(10.967±3.135)%(P>0.05);与VV组相比,AA组在染菌后12 h和16 h的FITC-CD14细胞阳性细胞数明显减低(P<0.01)。VV组染菌4 h,大鼠出现呼吸急促,皮温升高,下肢肿胀,且症状进行性加重,染菌12 h后大鼠出现紫绀、间断抽搐等;AA组在药物干预后上述症状逐渐减轻至消失,未见抽搐,大鼠均存活。结论创伤弧菌脓毒症血中mCD14的表达水平随脓毒症的进展而升高,头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星时血中mCD14的表达水平明显减低且改善临床症状,有明显的治疗作用。

酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症各脏器的超微结构观察

目的观察酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症重要脏器的超微结构变化,探讨研究创伤弧菌的致病性。方法采用酒精灌胃联合自由饮酒法制做大鼠酒精性肝病模型,取成模大鼠12只,分成2组,实验组6×108cfu/mL浓度创伤弧菌右下肢皮下注射感染肝病大鼠;对照组等量生理盐水右下肢皮下注射。48 h后颈动脉取血液及患肢病变组织进行细菌培养,留取肝脏、心脏、肺脏、肾脏、脾脏、右下肢肌肉、大脑等脏器组织0.1 cm×0.1 cm×0.1 cm置电镜固定液,超薄切片观察超微结构。结果实验组大鼠12 h后,皮温升高,右下肢明显肿胀、皮肤发紫,精神萎靡,活动减少,呼吸急促,均在48 h内濒临死亡,血液及患肢病变组织培养出创伤弧菌,电镜下见心肌、肺、肝、肾等组织的部分实质细胞内和间质中有创伤弧菌生长,肝脏、心脏、肺脏、肾脏、脾脏、右下肢肌肉、大脑存在不同程度超微结构改变,部分血管内皮细胞损伤及基膜断裂溶解,线粒体、内质网等细胞器损伤明显,其中以下肢骨骼肌、肺、肝脏的超微结构改变尤为明显,脾脏的改变相对较轻。结论创伤弧菌感染酒精性肝病大鼠后导致多个脏器的实质细胞及间质超微结构损伤,致使多器官功能障碍甚或衰竭,是导致机体快速死亡的重要原因。

大鼠酒精性肝病模型的建立

趴的探讨白酒灌胃联合自由饮酒法建立大鼠早期酒精性肝病模型的意义,以便找到一种发病机制、病理改变均与临床接近且周期较短的方法来制作大鼠酒精性肝病模型。方法模型组采用52%二锅头白酒配置成40%、45%、50%浓度,分别灌胃4、4、2周,第11周起改用自由饮酒(浓度50%);对照组前10周用等容生理盐水灌胃,第11周起自由饮水。12周后测定大鼠血清ALT、AST、弊蛋白、白球比例,观察大鼠肝脏的组织学和超微结构改变。结果12周后,模型组大鼠血清AST较正常对照组明显增高,白蛋白水平、白球蛋白比例明显下降,肝脏组织有炎症、坏死和轻微脂肪变性、纤维化。结论白酒灌胃联合自由饮酒法是建立大鼠慢性酒精性肝病模型的一种可靠稳定方法,将为酒精性肝病的相关研究打下良好的实验室基础。

大鼠创伤弧菌脓毒症时外周血脂多糖受体mCD14的表达及其动态变化

目的 探讨大鼠创伤弧菌(Vibrio vulnificus,VV)脓毒症外周血中膜性脂多糖(LPS)受体mCD14的表达及其动态变化.方法 Sprague-Dawley (SD) 雄性大鼠下肢皮下注射VV,造成VV脓毒症模型,用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素(FTTC)标记的羊抗兔抗体对外周血细胞进行免疫染色,流式细胞仪测定FITC-CD14阳性细胞数及其荧光强度,同时观察染菌大鼠行为学改变情况.结果 染菌后4h,大鼠开始出现活动减少,呼吸急促,皮温升高,下肢肿胀,后症状进行性加重,12 h后染毒大鼠出现紫绀、间断抽搐等.注射VV后6 h,9 h、12 h、16 h mCD14表达均升高,FITC-CD14细胞阳性数达(39.849±3.792)%、(39.0474±3.146)%、(39.360±5.280)%、(44.864 4±4.374)%(均P＜0.01),荧光强度增强.FITC-CD14细胞阳性数在0～6h升高迅速,6-12 h保持在较高水平的平台期,而12～16 h及其以后其又继续升高.结论 创伤弧菌脓毒症血中mCD14的表达水平随脓毒症的病情进展而升高,其与脓毒症的发生、发展密切相关,动态监测其改变对创伤弧菌脓毒症发病过程具有一定的预警意义.

抗菌药物联合乌司他丁对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症的作用

目的探讨抗菌药物联合乌司他丁对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症的实验治疗作用。方法采用酒精灌胃联合自由饮酒制作大鼠酒精性肝病模型,右下肢皮下注射创伤弧菌感染肝病大鼠,制作酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型15只,随机分1～3组,分别于染菌后12h经腹腔注射药物,1次12h,治疗10d。第1组用等量生理盐水作为对照,第2组应用头孢哌酮和左氧氟沙星,第3组应用头孢哌酮和左氧氟沙星联合乌司他丁。观察大鼠的活动、皮肤黏膜颜色、右下肢感染创口、存活数等。第1组大鼠死亡后,第2组和第3组治疗10d后颈动脉取血液及患肢病变组织进行细菌培养,取大鼠右大腿肌肉、肝脏、肺脏的电镜标本,观察治疗前后细胞超微结构改变。结果各组大鼠12h后,皮温升高,右下肢明显肿胀,皮肤发紫,精神萎靡,活动减少,呼吸急促。第1组大鼠均在24～48h内死亡,血液及患肢病变组织培养出创伤弧菌。2、3组大鼠药物治疗后,精神萎靡状态及呼吸急促等明显改善,3～5d后患侧大腿病变处溃破糜烂,10d后两组大鼠均存活,血液及患肢病变组织培养均为阴性。第3组与第2组比较,前者状态恢复好。抗菌药物治疗前后主要脏器细胞的超微结构改变明显减轻,抗菌药物联合乌司他丁对细胞超微结构改变减轻更为显著。结论应用足量头孢哌酮和左氧氟沙星对酒精性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症具有显著的疗效,头孢哌酮和左氧氟沙星联合乌司他丁的疗效更佳,为临床治疗创伤弧菌脓毒症提供了可靠依据。

创伤弧菌脓毒症血浆组织因子和组织因子途径抑制物的改变及抗菌药物的影响

目的探讨大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症血浆中组织因子(TF)和组织因子途径抑制物(TFPI)的改变以及头孢哌酮钠与乳酸左氧氟沙星联用对其的影响。方法制作大鼠VV脓毒症模型(VV组)和VV脓毒症药物干预模型(AA组),使用ELISA法测定各组大鼠血浆中TF和TFPI的含量。结果与正常对照组(NC组)相比,VV组在染菌后9 h、12 h血浆TF显著升高(P＜0．05),各时间点血浆TFPI含量无显著改变(P＞0．05)；9 h、12 h的TFPI/TF比值有显著性下降(P＜0．05)。AA组染菌后9 h、12 h血浆TF明显高于NC组(P＜0．05),TFPI/TF比值在抗菌药物干预后逐渐上升,16 h时点该比值明显高于NC组(P＜0．05)。与相同时间点的VV组比较,AA组染菌后12 h血浆TF明显减低(P＜0．05),12 h、16 h血浆TFPI明显升高(P＜0．05),9 h、12 h、16 h的TFPI/TF比值亦明显升高(P＜0．05)。结论创伤弧菌脓毒症时血浆TF含量显著升高,但同期TFPI并无明显减低或升高,TFPI/TF比值减低；头孢哌酮钠联用乳酸左氧氟沙星可减低血浆TF含量,提高TFPI/TF比值。创伤弧菌脓毒症时存在明显的促凝和抗凝作用的失衡,抗菌药物干预后可使促凝和抗凝平衡被逐渐恢复。

创伤弧菌脓毒症大鼠肌肉超微结构和血清肌酸激酶动态改变及抗菌药物的影响

创伤弧菌（Vibrio vulnificus ，VV）是一种嗜盐弧菌，可引起严重的伤口感染、脓毒症等。临床发现多数患者有下肢肿胀、坏死性筋膜炎等肌肉损害表现，继而出现急性肾功能不全、弥漫性血管凝血病等。本实验通过观察VV脓毒症血清肌酸激酶（Creatinkinase，CK）及其肌肉超微结构动态改变及抗菌药物对其的影响，为进一步研究VV脓毒症致病机制及治疗提供依据。