原代人脐静脉内皮细胞分离培养模型的建立

目的建立一套稳定的原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的体外培养模型。方法新鲜人脐带标本经三通管装置胶原酶灌注法消化获取HUVECs,分别进行细胞形态学观察、Ⅷ因子相关抗原鉴定及细胞生长曲线的测定。结果从人脐静脉获取的HUVECs纯度较高,4h细胞即开始贴壁,24h基本贴壁完全,3～6天细胞生长迅速,7～8天开始融合生长,倒置相差显微镜下呈特征性的"铺路石样"镶嵌排列;传代细胞接种第1天细胞数量无明显变化,3～6天生长比较迅速,7天后进入平台期,细胞数量无明显增加;Ⅷ因子相关抗原鉴定阳性。结论采用三通管装置胶原酶灌注法可获取高纯度的HUVEC,是一种简单、实用、可推广的原代培养模型。

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及其机制

目的:观察平阳霉素(PYM)对人脐静脉内皮细胞株EA.hy926的作用及可能机制。方法:采用甲基三氯硅烷(MTS)比色法检测PYM对EA.hy926细胞体外生长的作用;流式细胞术测定PYM作用细胞24h后细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达、线粒体膜电位的变化;免疫印迹(Western-blot)法检测PYM对EA.hy926细胞中Caspase-8、Caspase-9蛋白表达水平的影响。结果:PYM可明显抑制EA.hy926细胞的增殖,且生长抑制率具有浓度时间依赖性;流式细胞术检测结果显示PYM各浓度作用24h后,细胞凋亡百分率随药物浓度增加而增高,活化Caspase-3表达在PYM各浓度组均增强,线粒体膜电位在各浓度组均下降;Western-blot法检测结果显示PYM作用EA.hy926细胞后,Caspase-8、Caspase-9蛋白均可出现明显的剪切带。结论:PYM能抑制EA.hy926细胞的增殖,这种抑制作用是可通过诱导细胞凋亡实现的,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9参与了PYM诱导EA.hy926细胞凋亡的过程。

肝内胆管结石与ApoAⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ位点多态性的关系研究

目的探讨载脂蛋白AⅠ-CⅢ-AⅣ(apolipoprotein AⅠ-CⅢ-AⅣ,Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ)基因PstⅠ位点多态性与肝内胆管结石易感性(the happening of hepatolithiasis)的关系。方法应用PCR和限制性内切酶技术对64例肝内胆管结石患者和120例正常人Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ位点进行限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms,RFLP)分析。结果肝内胆管结石组中A1A1、A1A2、A2A2基因型频率分别为0、4.7%、95.3%,正常对照组中A1A1、A1A2、A2A2基因型频率分别为0、10.0%、90.0%。肝内胆管结石组和正常对照组各基因型频率的比较(χ2=1.599,P=0.206)和等位基因频率的比较(χ2=1.531,P=0.216)差异均无统计学意义。结论 Apo AⅠ-CⅢ-AⅣ基因PstⅠ位点多态性可能不是肝内胆管结石的危险因素。