VEGF-C在宫颈癌抗凋亡分子机制中的研究

目的:探讨脂质体介导VEGF-C基因转染人宫颈癌HeLa细胞及其对宫颈癌抗凋亡分子机制的研究。方法:前期构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/VEGF-C,用脂质体介导转染人宫颈癌HeLa细胞,并加压筛选获得转染成功的细胞株,经半定量RT-PCR检测转染后VEGF-C表达水平,ELISA检测培养上清中VEGF-C的表达。对转染成功的细胞检测NF-κB、bcl-2基因的表达。结果:在mRNA水平,转染组VEGF-C明显高于空载体组和未转染组;ELISA检测转染组(678.73±38.92ng/mL),也明显高于空载体组(129.52±50.73ng/ml),和未转染组(123.05±55.83ng/mL),成功构建了高表达VEGF-C的宫颈癌细胞株HeLa/S1;在HeLa/S1组NF-κR的表达(2.06±0.09 vs 1.35±0.02 vs 1.38±0.02 P<0.05),bcl-2的表达(2.02±0.67 vs 0.41±0.06 vs 0.37±0.06 P<0.05)明显高于空载体组和未转染组。结论:脂质体介导VEGF-C基因转染人宫颈癌HeLa可显著增加VEGF-C表达,推测高表达的VEGF-C可激活NF-κB,使抗凋亡基因bcl-2高表达,从而促进肿瘤细胞的生长。

siRNA沉默VEGF-C基因对宫颈癌HeLa细胞的生物学特性影响

目的通过RNA干扰技术抑制宫颈癌细胞VEGF-C表达,探讨干扰后VEGF-C、NF-κB、bcl-2基因的表达。方法根据人VEGF-C mRNA编码序列,设计RNA干扰的靶点,并用脂质体转染人宫颈癌HeLa细胞,通过RT-PCR法观察转染后肿瘤细胞VEGF-C、NF-κB、bcl-2基因的变化。结果转染siRNA 24h、48h可以使HeLa细胞VEGF-C mRNA含量降低,在24h降低80.63%±0.24%(P<0.001);在48h降低38.9%±0.85%(P<0.01);NF-κB mRNA含量也分别降低,在24h降低37.55±2.76%(P<0.05);在48h降低30.5%±3.82%(P=0.056);bcl-2mRNA含量同时分别降低,在24h降低76.95%±1.91%,(P<0.01);在48h降低64.11%±2.96%,(P<0.05))。结论脂质体介导的VEGF-C siRNA转染HeLa细胞后,可以有效抑制VEGF-C的表达;可能通过下调转录因子NF-κB,抑制抗凋亡基因bcl-2的表达。

76对不孕症夫妻生育困难应激来源及应对方式调查

目的对不孕症夫妻生育困难应激的有关因素进行研究,为健康指导提供依据。方法2011年1—6月,对76对不孕症夫妻进行问卷调查,不孕应激测量采用生育困难问卷,应激来源采用开放式问答记录,患者对应激的应对方式评估采用医学应对问卷。分析妻子组与丈夫组2种问卷的得分情况,采用Logistic回归分析生育困难的影响因素。结果(1)生育困难问卷总分:妻子组(132.3±35.4)分,明显高于丈夫组(115.6±29.8)分(P<0.05);(2)双方父母、亲戚是不孕症夫妻生育困难应激的主要社会来源;(3)本组女患者较多采取积极方式,其面对因子的评分高于常模(P<0.05),而男患者采取屈服的应对方式较多(P<0.05);(4)女性、高中以下学历和治疗时间超过1年未妊娠,是增加应激的主要影响因素。结论不孕症患者存在较大的心理应激,以高中以下学历、治疗时间超过1年未妊娠的女性为主;双方父母、亲戚是应激的主要社会来源,应给予针对性心理护理,提高其应对能力。