肝胆胰外科代码式护理记录单的设计与应用效果评价

目的设计代码式的护理记录单，以保证护理记录的及时、准确、客观、真实，提高护理工作效率。方法在原有护理记录单的基础上结合现在肝胆胰外科临床实践需要和经验进行改进，设计代码式护理记录单，并检验其是否能提高护士的工作效率。结果改进后的护理记录单，记录客观简便，明显缩短了各责任班的护理记录时间，得到了护士和其他同行们的肯定，调整后向外科系统其他科室推广使用。结论改进后，护理记录单记录方法更科学，记录更全面、更方便，并客观、真实地反映了患者的动态信息，提高了护士的工作效率。

胆石性胰腺炎的早期手术治疗

目的探讨胆石性胰腺炎(GP)早期手术适应证及相应术式。方法回顾性分析136例采用早期手术治疗GP患者的临床资料。结果(1)梗阻性重型GP患者10例中8例采用早期手术治疗,全部治愈。(2)梗阻性轻型GP患者70例中57例采用早期手术治疗,全部治愈。(3)非梗阻性重型GP患者47例中13例采用单纯早期手术治疗,4例死于早期多脏器衰竭:另3例采用区域动脉灌注联合早期手术治愈。(4)非梗阻性轻型GP患者146例中采用早期手术55例,全部治愈。结论(1)梗阻性GP是早期手术的绝对适应证,胆道解压和胰周引流是其基本术式;(2)非梗阻性重型GP原则上不采用早期手术;(3)非梗阻性轻型GP可采用早期手术治疗。

曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。

脂肪特异性蛋白27对大鼠肝星状细胞活化的影响

目的:探讨脂肪特异性蛋白27(Fsp27)对肝星状细胞(HSCs)增殖和活化的影响及其对纤维化相关蛋白的调节作用。方法:从SD大鼠肝脏提取HSCs并培养,采用实时荧光定量PCR、免疫荧光染色和Western blotting检测原代HSCs和活化HSCs中Fsp27 mRNA和蛋白的表达。构建携带Fsp27基因的慢病毒,转染活化的HSCs并继续培养72 h,通过CCK-8比色法检测Fsp27对HSCs增殖的影响;Western blotting检测HSCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,了解HSCs的活化状态;实时荧光定量PCR检测Fsp27对HSCs中纤维化相关蛋白[包括基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)]mRNA表达的影响。结果:成功分离大鼠原代HSCs。Fsp27在原代HSCs和活化HSCs中的表达差异显著(P<0.01);活化HSCs成功转染携带Fsp27基因的慢病毒后继续培养72 h,与对照组比较,HSCs的活化与增殖被明显抑制(P<0.05);Fsp27促进MMP-2 mRNA的表达(P<0.05),降低TIMP-1和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05)。结论:Fsp27可抑制HSCs的增殖和活化,并调节纤维化相关蛋白的表达。Fsp27的作用可能与其维持HSCs静息状态细胞表型有关。

LXA_4对ANP诱发SIRS过程中NF-κB、ICAM-1表达的影响

目的探讨脂氧素A4抑制急性坏死性胰腺炎诱发SIRS的机制。方法健康雄性SD大鼠72只随机分为假手术组、ANP组和脂氧素A4(LXA4)干预组,分别采用等量生理盐水、LXA4(0.1mg/kg)间隔8h经阴茎背静脉注射,并分别于4、12、24h每组活杀8只大鼠,测定胰腺组织Schmidt病理评分、NF-ΚB、ICAM-1的表达水平。结果 (1)与假手术组比较,胰腺炎组、LXA4干预组的Schmidt胰腺病理评分有显著升高(P<0.01);LXA4干预组Schmidt胰腺病理评分在12、24h较胰腺炎组低(P<0.05)。(2)假手术组ICAM-1表达阴性,胰腺炎组、LXA4干预组随着病变进展,其反映ICAM-1表达相对强度的累积光密度值(IOD)逐渐上升(P<0.01);在4、12、24h等3个时点,LXA4干预组的IOD值较比SAP组均有显著下降(P<0.01)。(3)假手术组NF-κB P65蛋白阴性;ANP组NF-κB胞核阳性表达率为59.1%(13/22),显著高于LXA4干预组的4.3%(1/23),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 (1)LXA4在ANP诱发SIRS过程中确能抑制ICAM-1的表达。(2)LXA4抑制ANP诱发SIRS可能是通过抑制NF-κB的细胞信号传导途径来实现的。

选择性环氧化酶2抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用

目的观察选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂NS-398对胃癌细胞AGS增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法 NS-398 25,50和100μmol·L-1作用于AGS细胞0～48 h,用CCK-8法检测细胞存活率。NS-398 50μmol·L-1作用于AGS细胞48 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测Notch信号通路相关基因的表达,Western印迹法检测Notch胞内结构域(NICD)及下游靶基因NF-κB和毛蛋白和断裂1增强子(Hes-1)蛋白表达。结果 NS-398 25,50和100μmol·L-1能抑制胃癌细胞AGS增殖,并呈时间(r时间=-1.00,P=0.003,50μmol·L-1)和浓度(r浓度=-0.999,P=0.027,48 h)依赖性。NS-39850μmol·L-1作用48 h,AGS细胞凋亡率为(20.1±3.5)%,比正常对照组(3.5±1.4)%明显增加(P<0.05);Notch信号通路受体Notch1和Notch2及Notch信号通路配体δ样1(DLL1)和锯齿状1(JAG1)mRNA表达无明显变化,Notch下游靶基因Hes-1和NF-κB mRNA表达较正常对照组明显减少(P<0.05);NICD,Hes-1和NF-κB蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论选择性COX-2抑制剂NS-398可能通过抑制Notch信号途径抑制胃癌细胞AGS增殖。

白藜芦醇调节肝星状细胞活性的实验研究

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对活化态肝星状细胞(HSCs)增殖、活化的影响及其机制。方法从肝脏分离纯化培养HSCs,DCFH-DA法检测不同浓度Res对HSCs中活性氧的影响,CCK-8比色法检测Res对HSCs增殖的影响,Western blotting检测HSCsα-肌动蛋白(α-SMA)的表达,PCR检测Res对HSCs活性相关基因表达的影响。结果 Res抑制HSCs中活性氧的产生,明显抑制HSCs的活化与增殖(P<0.05),改变了HSCs活性相关基因(大鼠生肌调节因子MyoD、胶原蛋白Ⅲ及胶原蛋白I)的表达(P<0.05)。结论 Res能够抑制HSCs的活化增殖,Res对HSCs的作用可能与抗氧化及抑制MyoD的表达有关。

脂肪间质干细胞对肝星状细胞活化、增殖、凋亡相关作用的研究

目的探讨脂肪间质干细胞(ADSCs)对活化态肝星状细胞(HSCs)增殖、活化凋亡的影响及其探讨产生作用的原因。方法从肝脏及腹腔脂肪分别分离纯化培养HSCs及ADSCs,通过半透膜(transwell insert)在6孔塑料培养板上建立HSCs与ADSCs的双层培养体系,大鼠正常肝细胞系(BRLs)及HSCs培养分别作为对照。通过CCK-8比色法检测ADSCs对HSCs增殖的影响;Western blotting检测HSCsα-肌动蛋白(α-SMA)的表达,了解HSCs的活化状态;流式细胞仪检测ADSCs对HSCs凋亡的影响。最后通过检测培养液中细胞因子的含量探讨可能的作用机制。结果 HSCs与ADSCs共培养72h,ADSCs明显抑制HSCs的活化与增殖,促进HSCs的凋亡,培养液细胞因子检测显示ADSCs比BRLs分泌更多的HGF,而较少分泌TGF。结论 ADSCs具有分泌细胞因子抑制HSCs活化增殖,促进凋亡的潜能。ADSCs的治疗作用可能与其分泌的细胞因子有关。

脂氧素A4对TNF-α诱导的内皮细胞炎症反应的影响

目的:探讨脂氧素A4(LXA4)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMECs)炎症相关因子的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:实验分为对照组、TNF-α单独刺激组和不同浓度LXA4(5 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL)预处理组。实时荧光定量PCR检测HPMECs单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、E-选择素(E-selectin)、白介素-6(IL-6)mRNA表达水平;细胞免疫化学方法定位检测核因子-κB/p65(NF-κB/p65);蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞核内和细胞总蛋白中NF-κB/p65的水平。结果:LXA4可以抑制TNF-α诱导的HPMECs MCP-1、E-selectin、IL-6 mRNA表达的上调;LXA4可以抑制TNF-α引起的HPMECs p65由细胞质向细胞核的转位。结论:LXA4可能通过抑制NF-κB细胞信号通路而抑制血管内皮细胞炎症相关因子的表达,发挥抗炎作用。

重型非胆道梗阻性急性胆石性胰腺炎的外科处理

目的探讨重型非胆道梗阻性急性胆石性胰腺炎的外科处理要点。方法分析47例重型非胆道梗阻性急性胆石性胰腺炎病人的临床资料。结果(1)1999年8月以前,13例采用早期手术,4例死于早期多脏器功能衰竭,病死率为30.8%;存活者平均住院时间为51.5d、平均医疗费用为9.53万元。(2)1999年8月以后,22例采用早期区域动脉灌注治疗,1例死于后期感染并发症,病死率为4.5%;存活者平均住院时间为31.3d,平均医疗费用为4.64万元。(3)12例采用传统保守治疗,4例病情较重者3例死于早期多脏器功能障碍;其余8例病情较轻者无并发症治愈。结论(1)在急性反应期内,作好复苏治疗的同时,推荐应用区域动脉灌注治疗重型非梗阻性胆石性胰腺炎;(2)重视临床类型的鉴别和转化,发现胆道梗阻及时手术治疗;(3)病变后期出现胰腺局部并发症需要适时的择期手术;(4)非手术治疗成功者应适时手术解除胆石病变以防止胰腺炎复发。

牛磺胆酸钠混合大肠杆菌逆行胰管注射法建立感染性坏死性胰腺炎大鼠模型

目的建立一个稳定可靠的感染性坏死性胰腺炎大鼠模型,为深入研究感染性坏死性胰腺炎的病理生理、病变转归以及探索新的治疗方法提供动物模型载体.方法46只SD大鼠随机分成5组：牛磺胆酸钠逆行胰管注射组、大肠杆菌逆行胰管注射组,牛磺胆酸钠混合不同浓度大肠杆菌（浓度分别为103个/ml、104个/ml和105个/ml,混合液为实验即时配制）逆行胰管注射组,注射量为0.1 ml/100 g体重,注射速度为0.2 ml/min.观察8 h,记录生存率;存活者8 h后活杀,抽血测定血清淀粉酶,并取胰腺组织行病理学检查和细菌培养.结果单纯牛磺胆酸钠逆行胰管注射能建立坏死性胰腺炎模型,其中胰腺组织细菌培养阳性率为12.5%（1/8）;单纯大肠杆菌逆行胰管注射不仅不能建立坏死性胰腺炎模型,而且胰腺组织细菌培养阳性率为0（0/8）;牛磺胆酸钠混合大肠杆菌逆行胰管注射能够建立感染性坏死性胰腺炎模型,大肠杆菌浓度为103个/ml组、104个/ml组、105个/ml组胰腺组织细菌培养率分别为60%、100%、100%,而8 h存活率分别为100%、100%、70%.结论（1）大肠杆菌浓度为104个/ml和牛磺胆酸钠浓度为5%的混合液,按0.1 ml/100 g体重的量经胰管逆行注射（注射速度为0.2 ml/min）可建立稳定可靠的感染性坏死性胰腺炎大鼠模型.（2）该方法导致感染性坏死性胰腺炎发生的可能机制为：牛磺胆酸钠导致胰腺组织发生出血、坏死,并引起胰腺组织抵抗细菌定植能力下降;同时,坏死的胰腺组织给细菌提供了良好的生长环境;此外,胰腺组织发生细菌感染与入侵的细菌量有正相关关系.

胆石性胰腺炎的临床治疗

目的探讨胆石性胰腺炎的临床处理要点。方法依据是否存在胆道梗阻和胰腺炎病变严重度将273例胆石性胰腺炎分为四个临床类型,分别对各类型的临床资料进行分析。结果（1）梗阻性重型10例,早期手术8例,全部治愈;传统保守治疗2例,其中1例死于早期多脏器功能衰竭。（2）梗阻性轻型70例,早期手术57例,ERCP＋EST 4例,传统保守治疗9例,全组无死亡。（3）非梗阻性重型共47例,13例采用早期手术,4例死于早期多脏器功能衰竭;22例采用早期区域动脉灌注治疗,1例死于后期感染并发症,12例保守治疗,其中4例病情较重,3例死于早期多脏器功能衰竭。（4）非梗阻性轻型146例,早期手术55例,后期手术8例,ERCP＋EST 3例,内科保守80例,全组无病死。结论（1）梗阻性重型患者应采用早期手术治疗。（2）梗阻性轻型患者可采用早期手术或EST解除胆道梗阻以防止胰腺炎加重。（3）推荐应用早期区域动脉灌注治疗非梗阻性重型患者,适当地联合手术有助于疗效的提高。（4）保守治疗成功者应适时地手术解决胆石症以防止胰腺炎复发。（5）治疗过程中应注意各临床类型之间的转变,及时调整治疗方案。

脂氧素A4对急性坏死性胰腺炎诱发全身炎症反应综合征的调节

自Rinderknecht报告白细胞过度激活是导致急性坏死性胰腺炎（ANP）病死的主要因素以来，全身炎症反应综合征（SIRS）在ANP发病机制中的作用受到重视。有人通过抑制SIRS来治疗ANP，短时血液滤过即为一例。

重症急性胰腺炎区域动脉灌注药物序贯组合方案的研究

目的：探讨重症急性胰腺炎（SAP）区域动脉灌注（RAI）序贯治疗的可行性及药物组合方案。方法：回顾性分析45例采用早期RAI治疗SAP患者的临床资料。结果：全组均使用的药物包括：⑴肝素生理盐水（25 U/mL,并以其作为作溶剂）;⑵5-FU（第1周,250 mg/12 h,共7 d）;⑶生长抑素或其类似物（0.4 mg/24 h善宁或6 mg生长抑素,共2周左右）;⑷抗生素（12例继发感染者持续使用;23例无继发感染者预防性使用2周）。选择使用的药物包括：⑴乌司他丁灌注（5例合并MODS者,10~20万U/12 h,共7 d）;⑵前列腺素E1（4例微循环障碍者,10μg/12 h）。全组2例死亡,其余43例治愈。结论：RAI治疗SAP有效可行,灌注中应注意药物的选择及配伍。

区域动脉灌注治疗重症急性胰腺炎45例临床研究

目的探讨早期区域动脉灌注(RAI)治疗重症急性胰腺炎(SAP)的临床疗效。方法分析1999年8月至2007年6月期间温州医学院附属第一医院外科收治的45例采用早期RAI治疗的SAP病人的病情、灌注药物、联合手术治疗以及临床疗效。结果(1)病死率为4.4%;(2)并发症发生率为35.6%;(3)全组平均住院时间29.4d,其中单纯RAI的33例为23.1d,联合手术的12例为39.0d;(4)全组平均医疗费用6.01万元,其中单纯RAI的33例为4.43万元,联合手术的12例为10.34万元;(5)全组坏死继发感染发生率为28.9%。结论早期RAI能降低SAP病死率、减少并发症、缩短住院时间、降低医疗费用,是治疗SAP的一项增效的非手术方法。

脂肪间充质干细胞促进胰腺癌细胞增殖与侵袭的实验研究

目的探讨脂肪间充质千细胞（ADSCs）对胰腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法从腹腔脂肪分离纯化培养ADSCs，建立胰腺癌细胞（SW1990细胞株与PANC-1细胞株）与ADSCs的双层培养体系。CCK一8比色法检测ADSCs对胰腺癌细胞增殖的影响，ELISA法测定培养液中基质细胞衍生性因子1（SDF-1）的浓度；评估SDF-1对胰腺癌细胞增殖的影响、AMD3100对ADSCs与胰腺癌细胞共培养的影响；体内实验观察ADSCs对胰腺癌细胞移植瘤生长的影响。结果ADSCs可促进胰腺癌细胞的增殖与侵袭（增殖：SW1990：1．535±0．153；PANC．1：1．370±0．100；对照组设为1；侵袭：SW1990：47．0±2．6比28．3±1．3；PANC—1：40．3±1．8比24．3±1．3；t=4．332～9．558，P〈0．05）。SDF一1在ADSCs中高表达而在胰腺癌细胞几乎不表达。SDF-1对胰腺癌的促增殖作用呈浓度依赖性。AMD3100能降低ADSCs对胰腺癌活性的影响。ADSCs促进了裸鼠SW1990细胞株种植瘤的生长[种植后第5周体积（1295±102）mm^3比（967±81）mm^3，t=5．614，P〈0．05]，但对PANC-1细胞株种植瘤的生长无促进作用。结论ADSCs具有促进胰腺癌细胞增殖、侵袭的潜能，其机制可能与SDF-1／CXCR4轴有关。

重症急性胰腺炎区域灌注治疗供药动脉的选择

目的 探讨重症急性胰腺炎区域灌注治疗供药动脉的理想选择.方法 对45例重症急性胰腺炎患者采用区域动脉灌注治疗.依据动脉造影显示血供能覆盖整条胰腺及最大限度提高胰腺组织药物浓度作为原则选择供药动脉,最终以胰腺动脉造影作为客观依据.结果 （1）全组除l例因动脉变异而选择肠系膜上动脉作为供药动脉外,其余44例均选择胃十二指肠动脉.（2）脾动脉造影显示,流经脾动脉的血流主要供应脾脏,胰腺获得灌注的区域仅限于部分胰尾.（3）腹腔干动脉造影显示,胰腺组织虽能获得全部灌注,但有相当部分的血流经脾动脉流向脾脏、经肝固有动脉流向肝脏,致使药物利用度不高.（4）胃十二指肠动脉造影显示,胰腺组织获得全部灌注,而且含有药物的血流几乎全部流向胰腺组织,未流向非靶向器官,药物利用完全.结论 胃十二指肠动脉是供药动脉的理想选择.区域动脉灌注仍应先行常规的胰腺动脉造影.

脂肪间质干细胞抑制肝星状细胞增殖活化及肝脏纤维化

目的 探讨脂肪间质干细胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADSCs）对活化态肝星状细胞（hepatic stellate cells,HSCs）增殖、活化的影响及其对活体肝硬化模型的治疗作用.方法 分别分离纯化培养HSCs及ADSCs,通过半透膜（transwell insert）建立HSCs与ADSCs的双层培养体系,大鼠正常肝细胞系（（buffalo rat liver cells,BRLs）培养作为对照.通过CCK-8比色法检测ADSCs对HSCs增殖的影响；Western blot检测HSCs的α-肌动蛋白（α-SMA）表达；建立鼠肝硬化模型,经门静脉输注ADSCs或BRLs,检测肝组织肝硬化；通过检测培养液中细胞因子的含量探讨可能的作用机制.结果 成功分离获得原代HSCs与ADSCs,活化的HSCs与ADSCs共培养72 h,与对照组相比,ADSCs明显抑制HSCs的活化（各组灰度值分别为1.4±0.2,152±14,258±18,F=283.348,P＜0.05）与增殖（各组吸光度A值分别为2.172±0.107,1.424±0.013,1.209±0.117,F=90.605,P ＜0.05）,活体移植显示ADSCs对肝硬化具有明显抑制作用（分别F=77.234、65.164、58.309,均P ＜0.05）.培养液细胞因子检测显示ADSCs比BRLs分泌更多的肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）（F=0.005,P＜0.05）,分泌较少的转化生长因子（transforming growth factor-β,TGF-β1）（F=1.767,P＜0.01）及神经生长因子（nerve growth factor,NGF）（F=2.301,P＜0.05）. 结论 ADSCs具有分泌细胞因子抑制HSCs活化增殖的潜能,对活体肝硬化进程具有一定的抑制作用.

脂肪特异性蛋白27基因抑制大鼠肝星状细胞增殖活化

目的探讨脂肪特异性蛋白27（Fsp27）基因对活化态肝星状细胞（HSCs）增殖、活化的影响及其对纤维化相关基因的调节作用。方法提取HSCs并培养。用实时定量PCR技术检测原代HSCs及活化HSCs中的Fsp27基因表达。构建携带Fsp27目的基因的慢病毒，转染活化的HSCs并继续培养72h。通过CCK-8比色法检测Fsp27基因对HSCs增殖的影响。Western blot检测HSCs α-肌动蛋白（α—SMA）的表达，了解HSCs的活化状态。实时定量PCR技术研究Fsp27基因对HSCs纤维化相关基因表达的影响。结果成功分离原代HSCs，Fsp27基因在原代HSCs及活化HSCs中表达差异显著（P〈0．01）。活化HSCs成功转染携带Fsp27目的基因的慢病毒后继续培养72h，与对照组比较，HSCs的活化与增殖受到明显抑制（P〈0．05）；Fsp27基因促进MMP-2的表达（P〈0．05），降低了TIMP-1及TGF-β1的表达（P〈0．05）。结论Fsp27基因具有抑制HSCs活化增殖的潜能，Fsp27基因可调节纤维化相关基因的表达。Fsp27基因的作用可能与维持HSCs静息状态细胞表型有关。