SA/hI-TAC双功能融合蛋白的制备及其生物学功能鉴定

目的制备链亲和素连接的人干扰素诱导T细胞α趋化因子融合蛋白(SA/h I-TAC),并对其生物学功能进行鉴定。方法构建p ET24a-SA-h I-TAC/p ET21a-h I-TAC-SA表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达两种融合蛋白,用镍金属螯合层析纯化、透析复性及蛋白质印迹法(Western blot)鉴定,融合蛋白中I-TAC部分的生物学活性由淋巴细胞趋化实验检测;融合蛋白中SA的生物学活性由流式细胞仪测定。结果两种融合蛋白可在大肠杆菌BL21中被诱导表达,分别占细菌表达总蛋白量的12%和25%,经镍柱纯化后融合蛋白纯度达85%、90%,经丙烯葡聚糖凝胶S-100过滤层析后,纯度均可达到98%,融合蛋白在生物素化的MB49细胞(小鼠膀胱癌细胞)表面的修饰效率分别为91.3%、98.8%,并对淋巴细胞的趋化作用呈剂量依赖性,且h I-TAC-SA的趋化作用明显强于SA-h I-TAC。结论 SA/h I-TAC双功能融合蛋白可能应用于肿瘤局部治疗以及肿瘤疫苗。