CXCR4慢病毒表达载体的构建及细胞转染

目的:构建高表达CXCR4慢病毒并转染MCF-7细胞,获得高表达CXCR4的MCF-7细胞。方法:RT-PCR法扩增CXCR4基因,构建重组质粒CXCR4/p Sin-EF2,与ps PAX2、p MD2G质粒共转染HEK293T细胞包装慢病毒,以空载体包装的病毒为对照,将包装慢病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7。RT-PCR和Western blot检测转染前后CXCR4基因和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞表面CXCR4受体表达。结果:双酶切和测序结果证实重组质粒CXCR4/p Sin-EF2构建成功,转染HEK293T细胞获得高滴度慢病毒,RT-q PCR和Western blot证实病毒转染MCF-7细胞中CXCR4表达量显著增高(P<0.05),流式测得CXCR4阳性细胞由26.78%升到99.29%,而MCF-7Vector细胞膜表面CXCR4表达量与未转染病毒MCF-7细胞无明显差异。结论:成功构建CXCR4慢病毒表达载体,获得CXCR4受体稳定高表达的乳腺癌细胞。