EPAS1基因SNPrs13419896多态性与HiHiLo低氧训练适应效果关联性研究

目的:选取EPAS1基因序列第1内含子序列上rs13419896 G/A单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,研究其与Hi Hi Lo低氧训练后生理表型指标关联性,探寻预测低氧训练效果的遗传学标记。方法:选取35名北方汉族健康受试者(平均年龄19.54±2.55岁,平均身高177.94±4.27 cm,平均体重68.07±5.579 kg)在模拟海拔2 500 m高度(低氧环境O2浓度为15.4%)进行4周高住-高练-低训(living high-exercise high-training low,Hi Hi Lo)。采用关联研究方法(Association-Study),运用聚合酶链反应和基因测序实验技术分析EPAS1基因SNP rs13419896位点,研究该位点与4周Hi Hi Lo低氧训练后最大摄氧量(maximal oxygen uptake,VO2max)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞数(red blood cell,RBC)等生理表型指标变化的关联性。结果:1)EPAS1基因SNP rs13419896位点中GG、GA、AA基因型频率分别为40%、51.43%和8.57%,符合Hardy-weinberg遗传平衡定律(x2=0.70,P=0.40)。2)4周低氧训练后,EPAS1基因SNPrs13419896基因型组间ΔVO2max、Δr VO2max、ΔRBC及ΔHb均无显著性差异。合并AA(AA基因型只有3例)与GA基因型统计发现,GA基因型受试者经4周低氧训练后,VO2max绝对值、相对值增长幅度有好于GG基因型趋势(76.17±245.31 ml/min vs-5.29±276.42 ml/min,P=0.09;1.22±3.37 ml/min·kg vs 0.13±4.18 ml/min·kg,P=0.09)。结论:平原人群4周Hi Hi Lo低氧训练后,EPAS1基因第1内含子序列上SNP rs13419896多态位点与VO2max指标变化可能存在着一定关联性。

iNOS基因rs10459953/rs1060822多态性与低氧训练效果的关联性研究

目的:选取低氧反应基因——诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因序列上rs10459953、rs1060822单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,研究其与低氧训练后生理表型指标关联性。方法:采用关联研究方法(AssociationStudy),聚合酶链反应-限制片段长度多态性(PCR-RFLP)实验解析技术,选取35名健康受试者在模拟海拔2500 m高度进行4周高住-高练-低训(living high-exercise high-training low,Hi-Hi-Lo)。研究iNOS基因SNP rs10459953和SNPrs1060822与低氧训练后最大摄氧量(maximal oxygen uptake,VO2max)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞数(red blood cell,RBC)等生理表型指标关联性。结果:1)4周低氧训练后,SNP rs10459953不同基因型之间VO2max、Hb、RBC变化量均无显著性差异。2)4周低氧训练后,SNP rs1060822不同基因型间Hb、RBC变化量有统计学意义(P<0.05),其中CT基因型受试者Hb、RBC显著增加(P<0.05),且在低氧环境下定量负荷实验中,SNP rs1060822的CT基因型受试者低氧训练后期SpO2动态曲线显著高于初期(P<0.05)。结论:iNOS基因SNP rs1060822与低氧训练后血象指标存在一定关联性,CT基因型表现出一定优势。

血管紧张素转化酶基因I/D多态性与HiHiLo低氧训练效果的关联性研究

目的:选取位于血管紧张素转化酶(Angiotensin-converting Enzyme,ACE)基因序列16号内含子上一段287 bp片段的插入(Insertion,I)/缺失(Deletion,D)多态,研究该多态位点的基因型(genotype)与高住-高练-低训(living high-exercise high-training low,Hi Hi Lo)后生理表型指标变化的关联性。方法:选取35名健康受试者在模拟海拔2 500m高度进行4周Hi Hi Lo低氧训练。采用关联研究方法(Association-Study),运用聚合酶链反应(PCR)实验技术,研究ACE基因I/D多态性与Hi Hi Lo低氧训练后最大摄氧量(maximal oxygen uptake,V·O2max)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞数(red blood cell,RBC)等生理表型指标关联性。结果:1)ACE基因I/D多态解析结果显示,II基因型的频率占40%,ID基因型频率占51%,DD基因型频率占9%,符合Hardy-weinberg遗传平衡定律(x2=0.699,P=0.403>0.05)。2)4周Hi Hi Lo低氧训练后,ACE基因I/D多态性不同基因型间的生理表型指标Hb、RBC变化量均无显著性差异(P>0.05);但不同基因型受试者之间V·O2max绝对值的变化量呈现出统计学意义(P<0.05),其中DD基因型受试者的V·O2max较ID基因型受试者相比显著增加(P<0.05),同时,DD基因型受试者V·O2max相对值与II、ID基因型受试者相比有增高的趋势(P<0.10)。结论:ACE基因I/D多态性与4周Hi Hi Lo低氧训练后V·O2max变化可能存在关联,与血象等生理表型指标变化无明显关联性。

Apelin对改善小鼠低氧性肺动脉高压的作用及与调节脂质代谢的关系

目的:探讨外源性apelin对小鼠慢性低氧性肺动脉高压的作用及其机制。方法:SPF级雄性apo E基因敲除(apo E-KO)小鼠30只,随机均分为3组(n=10),即常氧组、低氧组和低氧+apelin组,apelin组小鼠每天于低氧前经腹腔注射apelin-13(10 nmol/(kg·d)),其他组腹腔注射相同体积的生理盐水。采用常压连续低氧方法(9%~11%O_)2,23 h/d)复制慢性低氧性肺动脉高压模型。低氧3周后,采用右心导管法测定小鼠右心室压(RVSP)和右心室与左心室加室间隔重量比[RV/(LV+S)],Elisa法检测血浆中高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和总胆固醇(TC)的含量;real-time PCR法检测肝组织中三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)、清道夫受体B1(SR-B1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)和3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)等基因的表达。Western blot法检测小鼠肺组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白的表达。结果:(1)低氧组小鼠RVSP、RV/(LV+S)较常氧组分别高87%、85%(P均<0.05),apelin组小鼠RVSP、RV/(LV+S)较低氧组分别低39%、33%(P均<0.05)。(2)apelin组小鼠血浆中HDL-C含量、HDL/LDL比值分别较hypoxia组高21%、20%(P均<0.05),而血浆中TC、LDL-C含量两组间无显著差异(P均>0.05)。(3)apelin组小鼠肝组织中LDLR、SR-B1、ABCA1基因表达分别较低氧组上调241%、112%、69%(P均<0.05),而HMGCR基因表达下调45%(P<0.05)。(4)apelin组小鼠肺组织中PPARγ蛋白表达较低氧组上调47%。结论:Apelin可降低小鼠低氧性肺动脉高压,其机制与调节脂质代谢有关。

低氧性肺动脉高压小鼠体内脂质水平的变化

目的:观察低氧性肺动脉高压小鼠体内脂质代谢的变化,探讨脂质代谢异常在低氧性肺动脉高压发生发展中的意义。方法:SPF级雄性C57BL/6小鼠20只,随机分为2组(n=10):常氧组和低氧组。常压连续低氧3周(9%~11%O2,23 h/d)复制慢性低氧性肺动脉高压模型,测定小鼠右心室压(RVSP)和右心室与左心室加室间隔重量比[RV/(LV+S)],Elisa法检测血浆中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的含量;real-time PCR法检测肝组织中3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、清道夫受体B1(SR-B1)、固醇调节元件结合因子2(SREBF2)等基因的表达。结果:低氧组小鼠RVSP、RV/(LV+S)显著高于常氧组(P<0.05),血浆中HDL含量及HDL/LDL比值较常氧组显著降低(P<0.05),肝组织中LDLR、SR-B1基因表达较常氧组显著下调(P<0.05);RVSP与HDL/LDL比值及LDLR、SR-B1基因表达呈显著负相关(P<0.05)。结论:脂质代谢异常参与小鼠低氧性肺动脉高压的形成。

低氧性肺动脉高压小鼠肺组织apoE蛋白表达的变化及其意义

目的:观察低氧性肺动脉高压小鼠肺组织中载脂蛋白E(apoE)蛋白表达的变化,以探讨低氧性肺动脉高压形成过程中apo E蛋白表达的变化及可能的意义。方法:SPF级雄性野生型(WT) C57BL/6小鼠和雄性apo E基因敲除(apo E-KO)小鼠各20只,各随机再分为2组(n=10):常氧组和低氧组,共4组。常压连续低氧3周(9%～11%O2,23 h/d)复制慢性低氧性肺动脉高压模型,采用右心导管法测定小鼠右心室压(RVSP),计算右心室与左心室加室间隔重量比RV/(LV+S),ELISA法检测血浆中高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和总胆固醇(TC)的含量; Western blot法检测肺组织中apoE和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)蛋白的表达。结果:①低氧组WT小鼠RVSP、RV/(LV+S)分别较常氧组高68%和59%(P均<0.05),血浆中HDL含量及HDL/LDL比值分别较常氧组低17%和40%(P均<0.05),同时肺、肝组织中apoE及肺组织中PPARγ的蛋白表达分别较常氧组下调48%、52%和37%(P均<0.05),RVSP与apoE及PPARγ蛋白表达均呈显著负相关(P均<0.01);②低氧组apo E-KO小鼠RVSP、RV/(LV+S)较常氧组分别高96%和86%(P均<0.05),低氧组apo E-KO小鼠RVSP和RV/(LV+S)较低氧组WT小鼠分别高29%和24%(P均<0.05)。结论:小鼠低氧性肺动脉高压的形成与肺组织中apo E蛋白表达下调有关。

载脂蛋白E对低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨外源性载脂蛋白E(apoE)对低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。方法:采用组织块贴壁法原代培养小鼠PASMCs,取对数生长期PASMCs,分常氧组、常氧+apoE组、低氧组和低氧+apoE组,常氧组培养条件为:21%O 2、5%CO 2,低氧组培养条件为:1%O 2、5%CO 2,外源性加apoE使终浓度为10μg/ml,培养时间为48 h,重复三次。EdU掺入法检测细胞增殖情况,Western blot法检测apoE、增殖细胞核抗原(PCNA)、蛋白激酶C(PKC)和磷酸化蛋白激酶C(p-PKC)蛋白的表达。结果:与常氧组比较,低氧组PASMCs增殖率提高64.7%,PCNA蛋白和p-PKC蛋白表达分别上调69.0%和120.0%,而apoE蛋白表达下调51.0%(P均<0.05);与低氧组比较,低氧+apoE组PASMCs增殖率降低19.6%,PCNA蛋白和p-PKC蛋白表达分别下调19.8%和103.2%(P均<0.05);各组间PKC蛋白表达无显著性差异,常氧组p-PKC蛋白表达与常氧+apoE组的相比也无显著性差异(P均>0.05)。结论:apoE能抑制低氧诱导小鼠PASMCs增殖,其机制可能与阻碍PKC途径有关。

Pifithrin-α改善异丙肾上腺素诱导心肌纤维化的作用及机制

目的探讨Pifithrin-α改善异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌纤维化的作用及机制。方法将24只SD雄性大鼠采用信封法随机分为观察组、ISO组和对照组3组,每组8只:观察组和ISO组采用5 mg·kg^(-1)·d^(-1)ISO连续皮下注射1周,观察组再采用2 mg·kg^(-1)·d^(-1)Pifithrin-α腹腔注射1次;对照组连续皮下注射0.9%氯化钠注射液1周。在第4周末时,行超声心动图、血流动力学、心脏重量指数、心肌组织病理学、胶原表达水平和内皮间质转化(EndMT)指标检测。将人微血管内皮细胞分为观察组、转化生长因子-β(TGF-β)组和对照组3组,前两组细胞采用TGF-β刺激,对照组细胞正常培养78 h,检测3组细胞EndMT指标。结果观察组大鼠左心室舒张末期内径、左心室舒张末期压、左心室重量指数及右心室重量指数低于ISO组,左心室后壁厚度、左心室平均收缩压、左心室压力最大上升速率及左心室压力最大下降速率高于ISO组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组大鼠胶原体积分数、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达水平低于ISO组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组大鼠心肌组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白和p53表达水平低于ISO组,分化簇31(CD31)表达水平高于ISO组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。观察组细胞α-SMA、波形蛋白和p53表达水平低于TGF-β组,CD31表达水平高于TGF-β组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Pifithrin-α可有效减轻ISO诱导的大鼠心肌纤维化和改善心功能,其机制可能与抑制p53介导的EndMT有关。

CSE/H2S通过KLF6拮抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应

目的 氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞炎症反应,促进单核巨噬细胞黏附是动脉粥样硬化发生的重要病理生理机制。硫化氢（H2S）是新型气体信号分子,可拮抗动脉粥样硬化并抑制内皮细胞炎症反应。本研究以Krüppel样因子（KLF）家族为切入点,探究KLF6在H2S拮抗ox-LDL诱导内皮细胞炎症反应中的调节机制。方法 以人主动脉内皮细胞（HAEC）为研究对象,观察ox-LDL对HAEC内源性胱硫醚γ裂解酶（CSE）/H2S系统及内皮细胞炎症反应的影响。实时定量PCR检测外源性给予H2S供体或过表达CSE对KLF家族及炎症因子表达的改变,进一步采用siRNA干扰KLF6观察其对内皮细胞炎症反应、单核细胞黏附的影响。同时采用染色质免疫共沉淀（Ch IP）技术观察H2S供体对KLF6转录活性的影响。结果 Western blot检测及H2S荧光探针细胞内染色发现,ox-LDL可以呈时间及剂量依赖性下调CSE表达以及内皮细胞H2S的产生。实时定量PCR检测发现,ox-LDL抑制KLF6表达而上调KLF10表达,H2S处理后则上调KLF6表达,抑制KLF10表达。Western blot证实Na HS或过表达CSE均可显著上调KLF6蛋白表达。Na HS处理显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞炎症因子ICAM-1、VCAM-1的表达水平和单核细胞对内皮细胞的黏附,敲低KLF6则阻断Na HS的抑炎效应。Ch IP结果也显示,oxLDL促进KLF6与CXCL2、IL-8以及自噬基因ATG7启动子区的结合,Na HS处理或过表达CSE均可显著抑制KLF6的DNA结合活性。结论 ox-LDL下调内皮细胞CSE/H2S系统,H2S供体或增加内源性CSE可通过KLF6这一转录因子拮抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应。

左旋卡尼汀对脂多糖诱导小鼠肺微血管内皮细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨左旋卡尼汀(LC)对脂多糖(LPS)损伤的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)的保护作用及自噬、凋亡的影响。方法:采用体外培养的小鼠PMVECs,分为对照组(Control组)、LPS组(10μg/ml,3、6、12、24 h)、LPS(10μg/ml,24 h)+LC(终浓度为2.5、5、10μg/ml)(LC组)。Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,细胞免疫荧光染色法检测自噬小体,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3及凋亡蛋白Caspase-3的含量,CCK-8法检测细胞活力。结果:①与Control组比较,LPS 6 h、12 h、24 h组PMVECs细胞活力显著受到抑制,细胞凋亡率、自噬蛋白LC3Ⅱ表达显著增高(P均<0.01),LC3蛋白阳性表达。②与LPS 24 h组比较,各浓度LC组PMVECs细胞活力显著提高、自噬蛋白LC3II表达水平显著升高(P均<0.01),而PMVECs凋亡率和凋亡蛋白Caspase-3表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:LC具有提高LPS刺激的小鼠PMVECs活性、促进PMVECs自噬、抑制凋亡的作用。

精胺上调大鼠心肌缺血再灌注时beclin-1的表达

目的:探讨精胺(SP)对大鼠心肌缺血再灌注(IR)无复流现象的影响及机制。方法:SD大鼠(220~250 g)随机分为IR组(缺血30 min/再灌注60 min)、IR+SP组(再灌注前15 min静脉注射0.5 mmol/L SP)和假手术对照组(实施开胸手术并穿线,但不结扎)。再灌注60 min后以Evans蓝和thilflavin S染色测定心肌无复流面积,HE染色观察心肌形态学改变,同时检测血浆中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(c Tn I)的含量及心肌组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性。再灌注结束时,取左心室肌组织,Western blot法检测心肌组织中beclin-1的蛋白水平。结果:光镜下显示IR+SP组心肌的损伤与炎性浸润减轻;心肌无复流面积、血浆CK-MB和c Tn I的含量及心肌组织MPO的活性与IR组相比均减少(P<0.05);Western blot结果显示IR+SP组的beclin-1表达较IR组增加(P<0.05)。结论:外源性精胺能减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制可能与上调beclin-1有关。

儿茶酚抑素在大鼠肾性高血压中的作用及可能机制

目的:观察儿茶酚抑素(CST)在两肾一夹(2K1C)肾性高血压大鼠中的表达改变,并初步探讨其对肾性高血压的影响及作用机制。方法:36只SD大鼠随机分为假手术组(Sham)(n=15)和肾性高血压模型组(Model组)(n=21)。Model组采用两肾一夹(2K1C)手术法建立肾性高血压模型,Sham组手术操作同Model组,但不结扎左肾动脉,每周动态监测大鼠尾动脉血压。6周后各组大鼠行颈总动脉插管测定动脉压,Model组再随机分为2K1C组(n=15)与2K1C+CST组(n=6)。2K1C+CST组经颈外静脉一次性给予CST(80μg/100 g·BW),Sham组与2K1C组给予等容积的生理盐水。各组动物经测血压、采集血标本后被处死,称取左心室加室间隔(LV+S)重量,计算(左心室+室间隔)/体重【(LV+S)/BW】;高效液相色谱-电化学方法测定血浆中去甲肾上腺素(NE)含量,ELISA法测定血浆CST含量,硝酸还原酶法测定血浆及心室肌一氧化氮(NO)浓度;Western blot法检测延髓、肾上腺髓质、左心室和肾脏的嗜铬蛋白A(Chga)及左心室内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)蛋白表达量。结果:1与Sham组相比,2K1C组大鼠尾动脉压显著升高,左心室明显肥厚(P<0.01);血浆NE含量增高246%(P<0.01),CST水平降低56%(P<0.05);延髓Chga含量增高108%,左心室和肾脏分别降低60%和30%(P<0.05);左心室NO含量增高46%,血浆NO含量增高24%(P<0.05);左心室eNOS、iNOS蛋白表达分别增高66%和40%(P<0.05);2外源性CST显著降低2K1C大鼠颈总动脉压(P<0.05);3与2K1C组相比,2K1C+CST组左心室和血浆NO含量分别增高35%和19%(P<0.05);左心室eNOS蛋白表达高50%(P<0.05),而i NOS表达无显著统计学差异。结论:两肾肾性高血压时大鼠CST表达下调,外源性CST可能通过NO/NOS系统降低肾性高血压的作用,推测CST可能与肾性高血压的发生发展有关。

Yes激酶相关蛋白活化对急性肺损伤修复的影响及其机制

目的:探讨Yes激酶相关蛋白(YAP)活化对感染性急性肺损伤修复的影响及可能机制。方法:SPF级雄性ICR小鼠90只,随机分为2组,LPS组和LPS+XMU组。LPS组腹腔注射脂多糖(LPS)(7.5 mg/kg),LPS+XMU组在给予LPS的同时腹腔注射XMU-MP-1(YAP激动剂)(1 mg·kg-1·d-1,连续3 d)。在给予LPS 0 h、24 h、48 h、72 h后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织形态。制备小鼠肺泡灌洗液,BCA法检测总蛋白含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α和IL-6含量,比色法检测髓过氧化物酶(MPO)活性。Western blot法检测小鼠肺细胞核内YAP及胞浆磷酸化YAP(P-YAP)、肺组织YAP靶基因-结缔组织生长因子(CTGF)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。结果:与LPS组比较,LPS+XMU组核内YAP蛋白表达在24 h、48 h、72 h表达分别上调39.2%、148.1%和42.9%(P均<0.05),同时YAP下游靶蛋白CTGF蛋白表达分别上调186.6%、10.1%、146.1%(P均<0.05),而胞浆中P-YAP显著下调。与LPS组比较,LPS+XMU 24 h组肺泡灌洗液中IL-6和TNF-α含量分别降低28.4%和23.7%,48 h组肺泡灌洗液MPO活性和TNF-α含量分别降低13.5%和39.5%,72 h组肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量分别降低42.8%和16.7%(P均<0.05)。与LPS组比较,LPS+XMU 24 h组肺组织PCNA蛋白表达无统计学差异,而48 h、72 h PCNA表达分别上调44.2%、14.9%(P均<0.05)。与LPS组比较,LPS+XMU 24 h组、48 h组和72 h组肺泡灌洗液蛋白含量分别降低32.4%、46.0%和26.3%(P均<0.05)。HE染色结果显示,与LPS组比较,LPS+XMU组肺组织炎症细胞渗出减少,肺泡壁重构增加,肺组织修复明显加快。结论:YAP活化通过多种机制来改善肺损伤,促进肺损伤修复,损伤期抑制炎症,修复期促进炎症消减和诱导细胞增殖。

螺内酯通过上调沉默信息调节因子1减轻异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化

目的 探讨螺内酯减轻大鼠心肌纤维化是否与沉默信息调节因子1（SIRT1）的表达变化有关。方法雄性SD大鼠40只,随机均分为对照组、模型组、低剂量螺内酯组、高剂量螺内酯组。后3组皮下注射异丙肾上腺素[5 mg/（kg·d）,连续7天]建立大鼠心肌纤维化模型,低剂量螺内酯组、高剂量螺内酯组大鼠在给予异丙肾上腺素的同时分别给予30、60 mg/（kg·d）螺内酯灌胃,对照组给予相同体积的生理盐水,共21天。Powerlab生理记录仪检测左心功能变化,HE染色和Masson染色检测心肌病理改变,Western blot和实时荧光定量PCR检测大鼠心肌组织SIRT1的表达变化。结果 模型组大鼠的左心室质量指数（LVWI）、右心室质量指数和左心室舒张末期压（LVEDP）显著高于对照组（P<0.05）;模型组左心室收缩压（LVSP）、左心室压力上升的最大变化速率(+dp/dtmax)和左心室压力下降的最大变化速率(-dp/dtmax)显著低于对照组（P<0.05）;与对照组比较,模型组大鼠心肌排列紊乱,胶原纤维增生明显,SIRT1的mRNA及蛋白表达下调（P<0.05）。给予螺内酯后,大鼠的LVWI和LVEDP明显低于模型组（P<0.05）,LVSP、+d P/dtmax和-dp/dtmax明显高于模型组（P<0.05）;与模型组相比,螺内酯组大鼠心肌排列紊乱程度减弱,胶原含量减少,SIRT1的mRNA及蛋白表达上调（P<0.05）。结论 螺内酯减轻异丙肾上腺素诱导大鼠的心肌纤维化,其抗纤维化作用可能与上调SIRT1表达有关。

Apelin-13通过PI3K/Akt信号通路抑制尼古丁诱导的H9c2细胞凋亡

目的:研究小分子活性肽apelin-13对尼古丁诱导的心肌细胞凋亡的作用,探讨其可能的调节机制。方法:建立尼古丁诱导的大鼠H9c2细胞凋亡模型,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡相关蛋白的表达。结果:(1)与正常对照组相比,尼古丁组细胞凋亡率明显增加(P<0.01),凋亡相关蛋白Bax和cleaved caspase-3的表达显著上调, Bcl-2、p-Akt、p-PI3K和APJ蛋白的表达显著下调(P<0.01);(2)与尼古丁组相比,apelin-13+尼古丁组细胞的凋亡率明显降低(P<0.01),Bax和cleaved caspase-3的表达显著降低(P<0.01), Bcl-2、p-Akt、p-PI3K和APJ蛋白的表达显著升高(P<0.01);(3)与apelin-13+尼古丁组相比,apelin-13+尼古丁+PI3K/Akt抑制剂LY294002组细胞凋亡率明显增加(P<0.01),Bax和cleaved caspase-3的表达显著增加(P<0.01), Bcl-2、p-Akt和p-PI3K蛋白的表达显著下调(P<0.01)。结论:Apelin-13通过PI3K/Akt信号通路抑制尼古丁诱导的H9c2细胞凋亡。

脂多糖致急性肺血管内皮屏障功能失调小鼠FLI-1蛋白表达的变化及其意义

目的:观察感染性急性肺损伤(ALI)肺血管内皮屏障功能失调小鼠肺组织中弗里德白血病病毒插入位点1(FLI-1)蛋白表达的变化,以探讨FLI-1在感染性ALI肺血管内皮屏障功能失调发生发展中的意义。方法:SPF级雄性ICR小鼠60只,腹腔注射脂多糖(LPS,7.5 mg/kg)复制ALI模型,在给予LPS 0 h、12 h、24 h、48 h后,检测小鼠肺血管内皮屏障通透性和肺湿干重比,ELISA法检测肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6含量,Western blot法检测肺组织FLI-1和Src酪氨酸激酶(SRC)蛋白的表达。结果:与0 h组比较,12 h组、24 h组肺血管内皮屏障通透性分别升高74.3%和162.4%,而48 h组较24 h组降低27.0%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺湿干重比分别升高50.1%和122.9%,而48 h组较24 h组降低10.7%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h、24 h肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量均显著升高,而48 h肺泡灌洗液IL-6和TNF-α含量较24 h分别下降28.3%和21.6%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺组织FLI-1蛋白表达水平分别下调20.4%和56.9%,而48 h组较24 h组上调18.2%(P均<0.05);与0 h组比较,12 h组、24 h组肺组织SRC蛋白表达水平分别上调76.8%和176.7%,而48 h组较24 h组下调33.4%(P均<0.05);肺血管内皮屏障通透性与FLI-1蛋白表达水平呈显著负相关(r=-0.8992,P<0.01),而与SRC蛋白表达水平呈显著正相关(r=0.8918,P<0.01),肺组织FLI-1与SRC蛋白表达呈显著负相关(r=-0.8087,P=0.0014)。结论:FLI-1可能参与LPS诱导的急性肺损伤肺血管内皮屏障功能失常过程。

槲皮素通过上调SIRT1降低心肌缺血/再灌注微血管通透性

目的:观察槲皮素(Que)是否具有通过上调沉默信息调控因子1(SIRT1)的表达发挥降低心肌缺血/再灌注(I/R)后微血管通透性的作用,并初步探讨其机制。方法:SD大鼠(220~250 g)随机分为假手术(sham)组(只穿线不结扎)、I/R组(缺血30 min/再灌注60 min)、I/R+Que组(再灌注前15 min静脉注射10 mg/kg Que)和I/R+Que+EX527(SIRT1的抑制剂)组(静脉注射Que前15 min静脉注射1 mg/kg EX527)。HE染色法观察Que对I/R心肌微血管形态的影响。ELISA检测各组大鼠外周血清中内皮损伤标志物和炎症因子的表达。Transwell小室中培养H5V细胞,观察Que对单层内皮细胞通透性的影响,Western blot及免疫荧光检测SIRT1、肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)和紧密连接蛋白ZO-1的表达以及细胞骨架的排列情况。结果:心肌组织发生I/R时,SIRT1的表达明显降低,外源性Que干预后,SIRT1的表达上调,Que的上调作用可被EX527阻断。I/R+Que组与I/R组相比,心率失常的发生率明显降低,微血管完整性更好,炎症细胞浸润显著减少,内皮损伤标志物E-选择素和VCAM-1明显减少,促炎因子PAF、IL-1α和IL-6的表达也明显降低,但以EX527抑制SIRT1的表达后,Que的上述作用明显减弱。细胞实验结果显示,缺氧/复氧可引起内皮细胞的通透性增加,ZO-1和MLCP的表达减少,细胞骨架重构,细胞收缩,Que上调SIRT1后,内皮细胞的通透性显著降低,ZO-1和MLCP的表达升高,细胞骨架排列基本恢复,以EX527抑制SIRT1表达后,Que的上述作用大幅度减弱。结论:Que具有降低心肌I/R时微血管通透性的作用,作用机制可能与SIRT1的上调有关。

高原肺水肿发生机制与临床转化的现状与展望

高原肺水肿(HighAltitudePulmonaryEdema,HAPE)是一种高原特发性非心源性肺水肿,病情重,病死率高。目前认为HAPE的发生机制主要为低氧性肺动脉压力过度增高、肺血管通透性增高、肺水清除障碍、液体贮留及体液转运失调。本文综述了HAPE发生机制的研究进展,以及针对其关键环节防治HAPE的临床转化现状与前景,为寻找HAPE防治新措施提供参考。

apelin-APJ系统与肺动脉高压

肺动脉高压是一种严重的疾病,伴有肺血管重塑和右心功能损坏的改变。尽管现代医学有了很大的发展,但尚未有防治肺动脉高压的有效措施。新发现的小分子活性肽apelin及其G蛋白偶联受体APJ在心肺组织中高度表达,近来认为apelin是肺动脉高压一种新的标记物。 apelin-APJ系统有望成为治疗心肺血管疾病的一个重要靶点。