CEA阳性细胞系的鉴定及其荷瘤小鼠模型建立

目的鉴定HT-29、MKN-45及Hela细胞系中CEA的阳性表达率,并分别建立3个细胞系对应的荷瘤小鼠肿瘤模型,分析其成瘤特性。方法采用RT-PCR、western blot检测HT-29、MKN-45及Hela细胞中的CEA表达情况,采用免疫荧光实验检测3株细胞系的CEA蛋白表达情况。以2×10^(7)/ml细胞浓度接种小鼠建立动物模型,观察荷瘤小鼠生长情况并记录肿瘤大小,对其成瘤特性进行分析。结果CEA蛋白在HT-29、MKN-45细胞中表达,而在Hela细胞中不表达,CEA蛋白主要存在于细胞的胞质中。MKN-45荷瘤小鼠的成瘤潜伏期为(6.3±1.5)d,HT-29成瘤潜伏期为(6.0±2.2)d,而Hela细胞的成瘤潜伏期为(10.0±1.6)d。MKN-45、HT-29细胞的成瘤时间明显短于Hela细胞。结论CEA在HT-29、MKN-45细胞中表达,而在Hela细胞中不表达。成功建立了3株细胞对应的荷瘤小鼠模型,为CEA阳性肿瘤的发病基础以及治疗提供了动物模型基础。

系统性红斑狼疮患者外周血人巨细胞病毒感染状态分析及意义

目的检测SLE患者外周血人巨细胞病毒（HCMV）的感染状况，探讨HCMV感染在SLE发病中的作用。方法采集并抽提60例已确诊的SLE患者和111名健康人外周血白细胞DNA，利用巢式PCR技术检测HCMV糖蛋白gB（UL55）基因以确定HCMV感染情况。应用2个独立样本t检验、非参数检验、χ2检验及Fisher确切概率法统计分析。结果琼脂糖凝胶电泳及测序显示建立的巢式PCR能特异地检测HCMV．UL55基因，SLE患者外周血中HCMV检出率明显高于对照组[分别为41．7％（25／60）和1．8％（2／111），χ2=46．551，P〈0．01]。与外周血HCMV阴性组SLE患者相比，HCMV阳性组SLE患者抗核糖体P蛋白抗体（Rib．P）阳性率[分别为26％（9／35），56％（14／25），χ2=5．659，P=0．017]、直接Coomb’s试验阳性率[分别为37％（13／35），72％（18／25），χ2=7．096，P=-0．008]及抗β2糖蛋白1（GP1）抗体水平[分别为21．3（9．9，51．8）U/ml，13．6（5．9，23．1）U／ml；U=2．017，P=0．044]明显升高，血液系统相关指标中的红细胞[分别为（3．65±0．10）×10^12／L，（3．17±0．17）×10^12／L；t=2．574，P=0．013]、淋巴细胞[分别为（1．37±0．14）×10^12／L，（0．90±0．13）×10^12；t=2．456，P=0．017]、血红蛋白[分别为（110±19）g／L，（98±5）g／L；t=2．034，P=0．048]明显减少；肾损害相关指标中的血尿阳性率[分别为40％（14／35），72％（18／25）；χ2=6．000，P=0．014]、尿蛋白定量（24h）水平[分别为0．80（0．53，2．37）g，0．48（0．13，1．21）g；U=2．140，P=0．032]明显上升。结论外周血细胞HCMV感染可能参与SLE发生、发展过程。

细胞周期蛋白依赖性激酶4重组蛋白兔血清抗体的制备及鉴定

目的制备细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)重组蛋白兔血清抗体并鉴定其特性。方法将设计合成的CDK4基因克隆至载体pET21a(+)中,构建重组质粒pET21a(+)/CDK4,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经镍螯合亲和层析纯化,将纯化的重组蛋白CDK4与等量弗式佐剂混合,经背部皮下多点免疫日本大耳白兔,隔周1次,共免疫3次。于末次免疫后0(当天)、2、4、6、8周采血,分离血清。间接ELISA法检测效价,免疫荧光及免疫组化法检测特异性。结果经酶切及测序鉴定,重组质粒pET21a(+)/CDK4构建正确。重组蛋白CDK4相对分子质量约为19 100。第8周CDK4兔血清抗体效价达1∶163 840,能特异性识别宫颈癌Siha细胞及宫颈癌组织中表达的CDK4蛋白。结论成功制备了高效价、特异性强的CDK4兔血清抗体,为进一步研究CDK4生物学特性奠定了基础。