慢性牙周炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌胶原酶水平与牙周病变程度的关系

目的检测慢性牙周炎(chronicperiodontitis,CP)患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)胶原酶基因prtC及其产物PrtC,了解PrtC水平与牙周病变程度的关系,确定PrtC诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用。方法采用SDSPAGE检测原核表达系统重组PrtC(rPrtC)表达和NiNTA亲和层析法提取的rPrtC纯度。rPrtC免疫家兔获得抗血清。建立多重PCR检测56例CP患者209牙位的龈下菌斑标本中Pg16SrDNA和prtC基因。建立ELISA检测上述标本中的PrtC,并分析PrtC水平与牙周病变程度的关系。采用ELISA检测rPrtC诱导人脐静脉内皮细胞EVC304分泌IL1α、IL8和TNFα的作用。结果rPrtC表达产量约占细菌总蛋白的50%。提纯的rPrtCSDSPAGE后仅见单一的蛋白条带。96.1%(201209)和92.3%(193209)的龈下菌斑标本分别Pg16SrDNA和prtC基因PCR阳性,91.4%的龈下菌斑标本(191209)PrtCELISA阳性。重度CP龈下菌斑标本中PrtC含量明显高于轻度和中度CP标本(P<0.05),但轻度和中度、中度和重度CP标本之间PrtC含量差异无统计学意义(P>0.05)。1μg的rPrtC作用EVC304细胞24h后,5和10μg的rPrtC作用EVC304细胞12h后均可使EVC304细胞分泌的IL1α、IL8和TNFα水平明显增高(P<0.05)。结论Pg有很高的prtC基因携带率和表达率。CP牙周病变程度与龈下PrtC水平密切相关。rPrtC有直接诱导细胞合成并分泌IL1α、IL8和TNFα的活性。