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同时检测六种人类冠状病毒的单管多重RT-PCR方法的建立
被引量:
9
1
作者
牛培华
张晨
+4 位作者
陆柔剑
王佶
楼永良
谭文杰
马学军
《中华预防医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期416-419,共4页
目的 建立一种单管多重RT-PCR检测方法,同时检测6种人类冠状病毒.方法 由GenBank获取6种人类冠状病毒(HCoV-NL63、HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-OC43、HCoV-HKU1和MERS-CoV)的核苷酸序列作为参比,分别设计6种冠状病毒保守区靶序列特异...
目的 建立一种单管多重RT-PCR检测方法,同时检测6种人类冠状病毒.方法 由GenBank获取6种人类冠状病毒(HCoV-NL63、HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-OC43、HCoV-HKU1和MERS-CoV)的核苷酸序列作为参比,分别设计6种冠状病毒保守区靶序列特异性引物,用本实验室所保存的病毒株及核酸样本为模板建立基于全自动电泳仪分析的单管多重RT-PCR检测技术,进行了检测限和重复性评价,并用本实验室所保存的其他呼吸道病毒阳性样品对该方法的特异性进行了再验证.用140份临床样本结合荧光定量RT-PCR法平行验证了该检测方法的可行性.结果 基于全自动电泳仪分析的多重RT-PCR检测技术可同时检测6种人类冠状病毒,阳性标本均显示至少一条相应特异性产物预期大小片段(分别为195、304、332、378、415、442 bp),阴性对照无特异性条带显示,具有较高的特异性.在检测单个病毒时检测限能达到1.0×10^1~ 1.0×10^2拷贝/μl.其他呼吸道病毒验证未发现交叉反应.140份临床样本平行验证结果与常用的单一HCoV检测的荧光定量RT-PCR法一致,阳性样本均为28份(20%).结论 建立的基于全自动电泳分析的单管多重PCR方法能够同时检测6种人类冠状病毒感染,有较高的灵敏度和特异性.
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关键词
人
冠状病毒属
聚合酶链反应
全自动电泳
原文传递
题名
同时检测六种人类冠状病毒的单管多重RT-PCR方法的建立
被引量:
9
1
作者
牛培华
张晨
陆柔剑
王佶
楼永良
谭文杰
马学军
机构
温州医科大学医学病毒学研
中国疾病预防控制中心
病毒
病预防控制所卫生计生委
医学
病毒学
重点实验室
出处
《中华预防医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期416-419,共4页
文摘
目的 建立一种单管多重RT-PCR检测方法,同时检测6种人类冠状病毒.方法 由GenBank获取6种人类冠状病毒(HCoV-NL63、HCoV-229E、SARS-CoV、HCoV-OC43、HCoV-HKU1和MERS-CoV)的核苷酸序列作为参比,分别设计6种冠状病毒保守区靶序列特异性引物,用本实验室所保存的病毒株及核酸样本为模板建立基于全自动电泳仪分析的单管多重RT-PCR检测技术,进行了检测限和重复性评价,并用本实验室所保存的其他呼吸道病毒阳性样品对该方法的特异性进行了再验证.用140份临床样本结合荧光定量RT-PCR法平行验证了该检测方法的可行性.结果 基于全自动电泳仪分析的多重RT-PCR检测技术可同时检测6种人类冠状病毒,阳性标本均显示至少一条相应特异性产物预期大小片段(分别为195、304、332、378、415、442 bp),阴性对照无特异性条带显示,具有较高的特异性.在检测单个病毒时检测限能达到1.0×10^1~ 1.0×10^2拷贝/μl.其他呼吸道病毒验证未发现交叉反应.140份临床样本平行验证结果与常用的单一HCoV检测的荧光定量RT-PCR法一致,阳性样本均为28份(20%).结论 建立的基于全自动电泳分析的单管多重PCR方法能够同时检测6种人类冠状病毒感染,有较高的灵敏度和特异性.
关键词
人
冠状病毒属
聚合酶链反应
全自动电泳
Keywords
Persons
Coronavirus
Polymerase chain reaction
Automatic electrophoresis
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
同时检测六种人类冠状病毒的单管多重RT-PCR方法的建立
牛培华
张晨
陆柔剑
王佶
楼永良
谭文杰
马学军
《中华预防医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
9
原文传递
已选择
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参考文献
引证文献
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