医学寄生虫学“医-教-研-评-育”教学模式的探讨

针对医学寄生虫学课程中存在的知识内容更新滞后、医学院校对寄生虫学教学重视程度不够、教学手段相对落后、专业品质教育薄弱等问题,文章提出以学生为中心,融合现代信息技术手段,培养学生岗位胜任力,塑造学生医者仁心品质为课程建设思路,并在此基础上,构建了包括转变教学理念、培养医者仁心,整合多方资源、重构“三维”教学,兴趣驱动探究、积极推进第二课堂,多元评价、塑造复合创新型人才,合理设计课程思政、隐形育人的“医-教-研-评-育”五位一体教学模式。这一模式促进了学生自主性学习和过程性学习,提高了学生的医学知识运用能力、人际沟通能力和团队合作能力,同时也塑造了道德情怀,拓展了学生学习的深度和广度,显著提高了教学质量。

PBL案例教学在留学生医学寄生虫学课程中的探索

留学生教育已经成为中国医学高等教育的重要组成部分。如何在保持我国医学教育特色的基础上,根据留学生的特点进行教学改革是目前留学生教育面临的挑战。医学寄生虫学是临床医学的一门基础课程,也是医学留学生的必修课程。PBL(Problem-Based Learning)教学法以问题为导向,注重培养学生自主分析问题和解决问题的能力。在医学寄生虫学课程中采用PBL案例教学来培养留学生的临床思维以及分析和解决问题的能力,有助于培养临床实用性人才和实现我国医学教育国际化的目标。

PBL教学法在医学寄生虫学教学中的应用和问题

PBL是基于情境建构问题并以学生为中心的教育模式。本文结合PBL应用于医学寄生虫学教学实践的体会,从教师、学生及其他因素等方面,探讨了开展PBL教学过程中存在的理论和实践问题,并提出解决问题的一些方法。

《医学寄生虫学》线上线下混合式课程建设及应用

医学寄生虫学线上线下混合式课程融合"以学为中心"的现代教学理念和信息技术手段,采用随时随地的个性化线上学习,达到掌握医学寄生虫学核心知识的学习目标;再辅以案例引导的线下小班讨论课和虚实结合的实验课,达到核心知识内化、知识的应用和深度学习的学习目标;课程融入思政教育元素,形成性评价贯穿课程学习全过程。课程以医学生岗位胜任力为导向,有效培养医学生的医学知识运用与终生学习能力、人际沟通能力和团队合作能力。

《Medical Parasitology》线上线下混合式课程临床案例库建设及其应用

《Medical Parasitology》线下讨论课程案例库覆盖课程各章节,并动态更新;案例教学通过导向性问题融入虚拟仿真,加深MBBS留学生对知识的理解与掌握,锻炼学生设计疾病诊治和预防方案,激发学生临床思维与科研思维的融合渗透;科学的形成性评价贯穿线下课堂。案例库建设以MBBS留学生岗位胜任力为导向,有效培养学生医学知识运用和终身学习能力、人际沟通能力和团队合作能力。

弓形虫表面抗原SAG1基因自杀性DNA疫苗的构建及免疫原性检测

目的构建表达弓形虫表面抗原SAG1的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1并检测其免疫原性。方法以弓形虫RH株基因组DNA为模板,PCR扩增SAG1基因(GenBank No.HM776940.1),克隆至甲病毒复制子载体pDREP-eGFP中替换原有的eGFP基因,菌液PCR、双酶切及测序鉴定重组质粒。重组的自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1经股四头肌注射并联合瞬时电穿孔免疫BALB/c小鼠,同时以原质粒pDREP-eGFP作为对照组,间隔3周后以相同条件再免疫1次,收集小鼠血清,以弓形虫裂解抗原Western blotting检测其诱导产生的特异性抗体。结果从弓形虫基因组中PCR扩增得到1 011bp长度的SAG1基因,成功构建重组质粒pDREP-SAG1。Western blotting结果显示,重组质粒免疫的小鼠血清能特异性地识别虫体抗原中的SAG1抗原。结论成功构建了弓形虫自杀性DNA疫苗pDREP-SAG1,能诱导小鼠产生特异性的抗体,具有免疫原性。

重组登革病毒1-4型包膜蛋白EDⅢ的融合表达和免疫学特性研究

目的:构建含登革病毒(DENV)1-4型包膜蛋白(E蛋白)EDⅢ区的融合蛋白,并通过动物实验分析该融合蛋白的免疫机制。方法:通过生物信息学分析获得具有广泛代表性的DENV 1-4型EDⅢ区的氨基酸序列;将编码DENV 1-4型EDⅢ区的基因序列通过GS linker进行串联后插入原核表达载体p Cold Ⅱ的多克隆位点,并将构建的重组质粒p Cold Ⅲ-EDⅡ转化至大肠杆菌BL21(DE3);通过SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BABL/c小鼠,初次免疫之后再加强免疫2次。通过ELⅢSA法检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果:重组蛋白EDⅢ免疫小鼠后可以诱导产生高滴度的特异性抗体,抗体效价为1:40 000。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以诱导Th1和Th2细胞免疫应答。结论:成功表达了含DENV 1-4型E蛋白EDⅢ的融合蛋白,并通过动物实验证实该融合蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,为DENV四价重组疫苗的研制奠定了基础。

恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域的表达及活性鉴定

目的:构建杆状病毒昆虫表达质粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd和无细胞麦胚表达载体pEUHis-set7cd,表达恶性疟原虫组蛋白甲基转移酶SET7催化结构域(Pf SET7cd),并鉴定PfSET7cd的组蛋白甲基转移酶活性。方法:通过分子克隆技术构建获得pFast-N/C-set7cd以及pEU-His-set7cd表达质粒,尝试通过杆状病毒传代方式与无细胞麦胚表达方式获得重组Pf SET7cd蛋白,以SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并进一步检测重组蛋白的酶活性。结果:用于昆虫表达的重组质粒pFast-N-set7cd、pFast-C-set7cd双酶切结果大小与测序结果均正确,但是Western blot并未检测到其在昆虫细胞中的可溶性表达产物;pEU-His-set7cd通过无细胞麦胚表达系统表达获得的蛋白与预测大小一致,经Western blot鉴定正确,并用NTA-Ni2+亲和层析纯化。体外酶活实验显示PfSET7cd具有催化H3第36位赖氨酸上三甲基化(H3K36me3)活性。结论:通过无细胞表达系统获得可溶性的PfSET7cd重组蛋白,PfSET7cd重组蛋白具有介导H3K36me3的活性,但不影响H3K4me3和H3K9me3水平。

基于OBE理念指导下日本血吸虫病教学说课设计

医学寄生虫学是临床医学的专业基础课程之一,在教学实践过程中应以岗位胜任为导向,突出学生的主体地位。说课设计可以很好地展现教师的教学思路和评价教学效果,是提升教师教学水平的重要途径。文章以日本血吸虫病线下讨论课内容为例,从教学分析、教学设计、教学过程、教学反思四个方面叙述了在以成果导向教育(OBE)理念指导下的医学寄生虫学的说课设计。

《Human Parasitology》课程在线考试平台的建立及其应用

《Human Parasitology》在线考试平台支持多题型、多格式试题,能够体现该课程形态学为主的特点。该考试平台的建立及应用使该课程考核更加标准化和科学化,提高了授课教师的工作效率和MBBS留学生的学习效率,实现了无纸质化办公要求。通过该考试平台对MBBS留学生进行形成性评价,有利于对学生考试成绩进行综合分析。《Human Parasitology》在线考试平台无论是在教师减负方面还是在帮助学生自主学习方面均体现了较大的优势。

微小隐孢子虫GP900^(829~1099)蛋白的表达及其对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

目的 初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900) 829~1 099aa片段(GP^(900^(829~1099)))通过核因子-κB (NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用。方法 从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP^(900^(829~1099))氨基酸序列进行生物信息学分析。以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900^(829~1099)基因片段,构建pET-32a-gp900^(829~1099)重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达。纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素。采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用。以0.16、0.80、4.00μg/ml的GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平。采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平。结果 GP^(900^(829~1099))蛋白二级结构中β转角占比9.23%,无规则卷曲占比64.58%,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位。表达的GP^(900^(829~1099))重组蛋白的相对分子质量约为49 000。CCK-8结果显示,GP^(900^(829~1099))对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00μ/g/ml作为作用浓度。流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)%、(18.670±0.657)%、(20.470±1.271)%,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)%(t=3.818、3.872,P <0.05)。qPCR结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞的IL-6 mRNA相对转录水平分别为1.409±0.050、2.052±0.098和3.284±0.097,均高于对照组的1.010±0.096 (t=3.700、7.595、16.700,均P<0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021和2.378±0.037,后两者均高于对照组1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P<0.05)。ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400±17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940) mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630) mg/L (t=3.193、5.809、3.339,P<0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800±10.540) mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070) mg/L (t=4.125、10.830,P<0.05)。蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714±0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的1.0±0.0 (t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P<0.05)。结论 不同浓度GP^(900^(829~1099))重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节。

广州管圆线虫Ⅴ期幼虫具抗原表位功能肽段的筛选及鉴定

目的 寻找广州管圆线虫Ⅴ期幼虫可溶性蛋白中具免疫反应性的抗原.方法 采用双向电泳结合免疫印迹技术,并将得到的蛋白点进行质谱分析,获得具免疫原性的肽段信息,合成肽段免疫小鼠并进一步观察其体外免疫结合性能.结果 Ⅴ期雌雄虫可见的印迹反应点数目分别为8个和4个,此12个点相对应的凝胶点pH值集中于5～7,相对分子质量范围为24 000～40 000.质谱鉴定分析肌动蛋白和半乳糖凝集素为Ⅴ期雌雄虫的共同抗原.进一步对半乳糖凝集素进行抗原表位预测,获得16肽（NH2-KNGDIALHFNPRFDEK）表位,Western印迹验证16肽的小鼠免疫血清能识别广州管圆线虫Ⅴ期幼虫32 000的抗原表位.结论 半乳糖凝集素和肌动蛋白为Ⅴ期雌雄虫具有免疫反应性的共同抗原,半乳糖凝集素16肽抗原表位可作为靶标用于免疫诊断技术的开发和免疫调节机制的研究.

弓形虫微线体蛋白MIC2和M2AP真核表达载体的构建

目的构建弓形虫RH株微线体蛋白M2AP和MIC2的真核表达载pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为建立同时表达MIC2和M2AP蛋白的重组毕赤酵母表达系统,制备重组粘附蛋白复合体MIC2-M2AP奠定基础。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆转录合成cDNA。根据已知的弓形虫mic2和m2ap基因序列,采用引物设计软件Primer premier5.0自行设计并合成引物,以cDNA为模板,PCR扩增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T载体,经酶切和测序鉴定后回收目的片段,分别插入至pGAPZαA内,构建重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,转化入E.coli DH5α。提取转化菌质粒,进行酶切和测序鉴定。结果 PCR扩增得到的mic2和m2ap基因分别为2 200bp和1 000bp,与预期大小一致。T-A克隆重组质粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重组酵母表达质粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap经测序鉴定,与GenBank收录的弓形虫mic2基因和m2ap基因序列同源性为100%,重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap构建成功。结论成功构建弓形虫重组毕赤酵母表达载体pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,为进一步研究MIC2和M2AP相互作用机制及其免疫保护效应奠定了基础。

广州管圆线虫蛋白酶体α5基因的克隆、表达及重组蛋白对人THP-1巨噬细胞凋亡的影响

目的获得广州管圆线虫蛋白酶体α5基因(pas-5),构建其重组质粒,探讨PAS-5重组蛋白对人THP-1巨噬细胞凋亡的影响。方法以广州管圆线虫逆转录DNA为模板,PCR扩增pas-5基因,构建pcoldⅢ-pas-5重组质粒,转化至大肠埃希菌DH5α感受态细胞,取菌液进行PCR、双酶切和测序鉴定。阳性质粒经0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析重组蛋白表达情况,采用镍离子亲和层析法纯化重组蛋白。将用佛波酯诱导的人THP-1巨噬细胞经PAS-5(实验组)孵育18 h后,采用流式细胞术观察细胞凋亡情况,采用ELISA检测细胞培养上清中细胞因子白细胞介素-10(IL-10)水平,另设阴性对照组(牛血清白蛋白)和空白对照组(RPMI1640)。结果Pas-5基因PCR扩增产物约为800 bp,与预期大小相符。经菌液PCR、双酶切和测序鉴定获得pcoldⅢ-pas-5重组质粒。SDS-PAGE分析结果显示,PAS-5重组蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约28 000。Western blotting分析结果显示,重组蛋白能与兔抗鼠His单克隆抗体特异性结合。镍离子亲和层析纯化重组蛋白后获得单一条带。流式细胞术分析结果显示,阴性对照组和实验组人THP-1巨噬细胞凋亡率分别为(0.380±0.194)%和(0.052±0.036)%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,实验组细胞培养上清中IL-10水平为(77.606±1.766)pg/ml,高于阴性对照组的(45.652±5.975)pg/ml(P<0.05)。结论获得了pas-5基因和重组质粒pcoldⅢ-pas-5,重组蛋白PAS-5可抑制人THP-1巨噬细胞凋亡,与IL-10水平提高有一定关系。