抗冻蛋白作为高效冷冻保护剂对易冷变性的LDH保护效果观察

目的探讨抗冻蛋白(AFP)对易冷变性的乳酸脱氢酶(LDH)保护效果。方法在LDH样本加入AFP、BSA、PVP设置成分别含0.001 mg/L、0.01 mg/L、0.1 mg/L、1 mg/L AFP,0.1 mg/L、1.0 mg/L、10 mg/L BSA以及0.1 mg/L、1.0 mg/L、10 mg/L PVP为添加剂的试验样本,依次记为AFP1、AFP2、AFP3、AFP4、BSA1、BSA2、BSA3、PVP1、PVP2、PVP3组。样本中加入等量0.02 mol/L p H 7.4 Tris-HCl缓冲液作为对照。各组设5个平行管。采用程序降温仪进行冻融试验,从25℃开始以20℃/min降温速度降温至-60℃,然后进行解冻融化升温至25℃。观察5个冻融循环后各试样LDH活性改变。结果与冻融前比较,对照组LDH活性恢复率为69.6%±4.1%,BSA1、PVP1、AFP1组LDH活性恢复率分别为75.2%±4.5%、73.3%±3.8%、71.8%±3.5%,差异有统计学意义(均P<0.01)。其他各组在冷融后酶活性恢复较好,仅出现轻度下降,差异无统计学意义(P>0.05)。添加0.01 mg/L AFP、1.0 mg/L BSA、1.0 mg/L PVP即有保护作用。结论 AFP对防止LDH冷变性有更好的保护效果。