丁酸钠对自身免疫性肝炎辅助性T淋巴细胞17及肝脏Toll样受体4信号通路的影响

目的了解丁酸钠对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）Th17的调节作用及对肝脏Toll样受体（Toll-like receptors, TLR）4炎症通路的影响。 方法将50只6周龄雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为对照组、AIH组、丁酸钠组和高纤维组，每组10只，余10只小鼠用于提取肝脏特异性抗原S-100。诱导AIH模型建立后，丁酸钠组予500 mg/（kg·d）丁酸钠灌胃治疗，高纤维组予订制高纤维饲料喂养，持续3周后处死。观察各组小鼠肝脏病理变化，血清ALT、AST、IL-17A和TNF-α水平，脾脏Th17比例、肝脏TLR4、髓样分化因子（myeloid differentiation factor, MyD）88表达情况。对各样本均数进行正态性检验和方差齐性分析，各样本均数比较采用单因素方差分析。结果丁酸钠组及高纤维组小鼠肝脏炎症细胞浸润及细胞坏死明显比AIH组减轻。对照组、AIH组、丁酸钠组及高纤维组ALT分别为（24.833±2.229）、（88.333±9.543）、（27.167±3.189）和（29.833±6.113） U/L，AST分别为（97.000±14.953）、（285.000±35.434）、（139.500±38.976）和（127.167±28.687） U/L，各组间差异均有统计学意义（F值分别为156.491、44.118，均P〈0.01）。丁酸钠组和高纤维组小鼠脾脏Th17比例及其转录因子维甲酸相关孤儿受体γt明显低于AIH组，差异均有统计学意义（F值分别为21.780和68.283，均P〈0.05）；AIH组小鼠肝脏TLR4和MyD88蛋白表达明显高于对照组，丁酸钠组及高纤维组表达则被抑制，差异均有统计学意义（F值分别为26.235、28.293，均P〈0.01）；与AIH组相比，丁酸钠组及高纤维组肝脏和外周血中IL-17和TNF-α表达均降低。结论丁酸钠对自身免疫性肝炎进行免疫调节，改善肝脏炎性反应。

高脂饮食对自身免疫性肝炎肝损伤与焦亡的研究

目的探讨高脂饮食（high-fat diet, HFD）对小鼠自身免疫性肝炎（autoimmune hepatits, AIH）肝脏损伤的影响。方法50只C57BL/6雄性小鼠选取6只为S-100制备组，剩余小鼠用随机数字法随机分成标准饮食组（standard chow, SC）、HFD组、AIH＋SC组及AIH＋HFD组，喂饲1周后进行AIH造模，4周后处死小鼠，收集小鼠肝脏、脾脏、血清，进行HE染色观察肝组织病理学改变；检测小鼠血清中ALT和AST变化；蛋白质印迹法和实时PCR法检检测肝组织中Nod样受体蛋白3（NLR pyrin domain containing 3, NLRP3）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1（cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase-1）的表达；ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌量；流式细胞仪分析脾脏中Th17细胞的数量。各组间均数比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），每两组间比较方差齐性采用SNK-q检验，方差不齐采用非参数检验。结果HFD组肝组织可见少许脂肪空泡形成，AIH＋SC组可见血管周围炎性反应，AIH＋HFD组可见炎性反应加重，出现少许空泡样脂肪变性。与SC组小鼠相比，AIH＋SC组和HFD组小鼠的血清ALT和AST水平有所增加，AIH＋HFD组上升最为明显，各组均数相比差异均具有统计学意义（F值分别为57.12和37.58，P均〈0.05）。SC组外周血中Th17占CD4＋T细胞的比例为（2.98±0.90）%，HFD组为（6.89±0.99）%，AIH＋SC组为（6.47±1.08）%，AIH＋HFD组为（9.96±0.83）%，各组之间比较及两两比较差异有统计学意义（F＝54.05，P〈0.05）。SC组各血清细胞因子浓度分别为IL-1β [（7.62±2.81） ng/L]、IL-6 [（106.54±53.08） ng/L]、TNF-α [（107.26±36.20） ng/L]；HFD组分别为IL-1β [（25.06±7.09） ng/L]、IL-6 [（220.11±47.41） ng/L]、TNF-α [（273.77±33.62） ng/L]；AIH＋SC组分别为IL-1β [（17.49±5.68） ng/L]、IL-6[（260.73±50.29） ng/L]、TNF-α [（250.49±81.63） ng/L]；AIH＋HFD分别为IL-1β [（52.04±10.22） ng/L]、IL-6 [ （785.93±70.91） ng/L]、TNF-α [（913.97±64.57） ng/L]，各组之间差异均有统计学意义（F值分别为44.66、242.15、233.49，均P〈0.05）。HFD组和SC组相比、AIH＋HFD组与AIH＋SC组相比，NLRP3、Caspase-1表达明显上升，差异均有统计学意义（均P〈0.05）。结论HFD促进AIH，可能是通过促炎因子分泌、促进Th17细胞活化和促进炎症小体NLRP3激活进而促进细胞焦亡。

肠道细菌生物智能成像系统时空监测的研究进展

利用活体成像技术可视化研究肠道菌群在细胞和蛋白质水平的结构和功能变化规律,将进一步明确菌群与宿主间的制约平衡关系,以及靶向定位细菌感染情况。基于生物智能光学成像的肠道菌群示踪技术包括生物发光、传统荧光(荧光蛋白和荧光染料)、新型代谢标记法、纳米材料和智能激活的成像剂、光声成像等。现就以上技术的特点和存在的问题进行阐述。

骨髓间充质干细胞源性外泌体对酒精性肝损伤的保护作用

目的探讨骨髓间充质干细胞源性外泌体(mesenchymal stem cells derived exosomes,MSC-exosomes)对酒精性肝损伤的保护作用。方法将18只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠分成对照组、模型组和外泌体组,每组6只。模型组和外泌体组小鼠Lieber-DeCarli饲料饲养4周并在第26、27和28天分别进行乙醇灌胃构建酒精性肝损伤模型,而对照组小鼠给予等热量的葡聚糖麦芽糖。外泌体组小鼠分别在实验第14和26天尾静脉注射MSC-exosomes进行治疗。实验后,检测各组小鼠ALT和AST水平,观察肝组织病理改变,蛋白质印迹法检测核因子相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf-2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、CD63、CD81、TSG101和细胞色素C蛋白质表达情况,实时定量PCR分别检测Nrf-2、HO-1、IL-10和IL-17的mRNA变化,试剂盒分别检测血清IL-10、IL-17水平和肝组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)氧化应激指标,流式细胞仪分析肝脏Treg和Th17数量。各组之间比较采用单因素方差分析。结果MSC-exosomes表达阳性标志物CD63、CD81和TSG101,但不表达阴性标志物细胞色素C。模型组小鼠血清ALT和AST分别为(87.3±25.1)U/L和(223.2±43.5)U/L,外泌体组小鼠血清ALT和AST分别为(47.7±12.0)U/L和(128.2±33.6)U/L ,两组比较差异均有统计学意义(F值分别为12.818和12.226,均P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝脏SOD活性和GSH水平明显降低,MDA水平明显升高;而外泌体组的SOD活性和GSH水平明显高于模型组,MDA水平明显低于模型组,比较差异均有统计学意义(F值分别为4.245、24.074和36.675,均P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠肝内Nrf-2和HO-1蛋白表达显著降低,而经MSC-exosomes治疗后表达明显升高,比较差异均有统计学意义(F值分别为33.623和14.960,均P<0.05);各组间Nrf-2及HO-1 mRNA表达趋势与蛋白质表达趋势相同(F值分别为20.784和276.336,均P<0.05)。正常组Treg/Th17比值为4.3±0.9、模型组为0.4±0.2、外泌体组为3.4±0.5,各组间比较差异有统计学意义(F=64.227,P<0.05)。与对照组相比,模型组小鼠血清IL-17蛋白水平和肝内IL-17基因表达明显升高,而MSC-exosomes治疗后血清IL-17蛋白水平和肝内IL-17基因表达显著降低,比较差异均有统计学意义(F值分别为15.581和40.095,均P<0.05)。模型组小鼠血清IL-10蛋白水平和肝内IL-10基因表达明显降低,而MSC-exosomes治疗后血清IL-10蛋白水平和肝内IL-10基因表达显著升高,比较差异均有统计学意义(F值分别为98.268和153.743,均P<0.05)。结论MSC-exosomes可能通过激活Nrf-2/HO-1抗氧化通路及调节肝脏Treg/Th17比例,从而改善酒精诱导的肝脏损伤。