姜黄素衍生物C66对转化生长因子-β刺激的大鼠肝星状细胞增殖和活化的研究

目的观察姜黄素衍生物C66对TGF-β刺激的大鼠肝星状细胞（HSC）增殖及α-平滑肌动蛋白（R-SMA）、Ⅰ型胶原表达的影响及其与大麻素受体（CB）1的关系。方法体外培养HSC-T6细胞，分为对照组、C66不同浓度组（1、2、5、10和20／,tool／L），细胞计数试剂盒一8检测其吸光度（A）值。选取最佳C66作用浓度及时间，分为对照组、TGF-β干预组、TGF＋β＋CB1拮抗剂组、TGF-β＋C66干预组、TGF-β＋CB1拮抗剂＋C66联合干预组，分别培养48h，以蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR检测CB1、α—SMA、I型胶原蛋白及mRNA的表达，以蛋白质印迹法检测磷酸化c—jun氨基末端激酶（p-JNK）、C—jun氨基末端激酶（JNK）表达水平。多样本均数方差齐性者采用LSD法进行两两比较，方差不齐者采用DunnettT3检验，组间比较采用单因素方差分析。结果C66能有效抑制HSCT6增殖，呈现浓度和时间依赖性，其中10μmol／LC66作用48h对HSC—T6的抑制效果最明显，抑制率为54％。与对照组相比，单独TGF-β1干预组CB1、Ⅰ型胶原、α-SMA蛋白表达明显升高，差异均有统计学意义（￡值分别为6．188、3．48和20．64，均P〈0．05）。与对照组相比，单独TGF-β1干预组CB1、I型胶原、Ⅰ-SMAmRNA相对表达显著升高，差异均有统计学意义（￡值分别为4．705、9．492和38．27，均P〈0．05）。与对照相组比，TGF—B1干预组p-JNK水平显著升高，差异有统计学意义（t=9．567，P〈0．05）。结论C66能有效抑制HSC—T6细胞的增殖及胶原合成，且联合使用CB1拮抗剂效果更明显，该过程可能涉及JNK磷酸化水平的调节，有助于理解肝纤维化发生、发展的机制及为治疗肝纤维化寻找新的靶点。

鼠李唐乳杆菌对酒精性肝损伤的免疫调节作用

目的研究鼠李唐乳杆菌（LGG）对酒精性肝损伤Treg／Th17免疫调节作用及TLR通路的表达变化，为酒精性肝损伤早期治疗提供依据。方法10周龄雄性C57／BL6小鼠根据随机数字表均分为对照组、乙醇组和LGG＋乙醇组，每组6只。乙醇组小鼠用含有5％乙醇的Lieber-DeCarli液体饲料喂养10d，第11天清晨按小鼠体质量5g／kg予40％乙醇灌胃9h后处死；对照组小鼠用不含乙醇的Lieber-DeCarli液体饲料喂养相同时间后予5％麦芽糖灌胃9h后处死；LGG＋乙醇组小鼠用LGG菌液（LGG〉1mL／d）加含5％乙醇的Lieber-DeCarli液体饲料喂养相同时间后，予40％乙醇灌胃9h后处死。收集各组小鼠肝组织行HE和油红O染色，观察组织病理改变。检测各组小鼠血清ALT、AST含量。RT—PCR检测各组小鼠肠道紧密连接蛋白ZO-1、occludin和claudin-1 mRNA表达。Western免疫印迹法检测各组小鼠肝脏TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、IL-1受体相关激酶（IRAK-1）、核因子-κB和TNF-α蛋白表达。流式细胞仪分析LGG对小鼠脾脏Treg／Th17平衡的影响。各组间的统计分析用单因素方差分析和多重比较分析。结果HE染色和油红0染色示，经LGG干预后小鼠肝脏内脂滴数量和大小明显改善。乙醇组ALT为（147．0±42．1）U／L，AST为（373．5±169．7）U／L，对照组分别为（56．8±15．3）U／L和（211．5±57．8）U／L，LGG＋乙醇组分别为（75．3±150．2）U／L和（211．7±36．3）U／L，各组间相比差异均有统计学意义（F值分别为19．474和4．702，P值分别为0．000和0．026）。乙醇组肠道紧密连接蛋白ZO-1、occludin和claudin-1mRNA表达明显低于对照组，LGG＋乙醇组紧密连接蛋白表达增加（F值分别为149．219、145．561和154．237，均P=0．000）。乙醇组小鼠肝脏内大肠埃希菌蛋白表达高于对照组，LGG＋乙醇组其表达减少（F=130．317，P=0．000）。乙醇组小鼠肝脏内TLR4、MyD88、IRAK-1、核因子-κB和TNF-α蛋白表达明显高于对照组，LGG＋乙醇组TLR4通路中各蛋白表达明显抑制。乙醇组小鼠脾脏中Treg所占比例明显低于对照组，LGG＋乙醇组小鼠Treg所占比例升高。乙醇组小鼠脾脏中Th17所占比例明显高于对照组，LGG＋乙醇组小鼠Th17所占比例降低。结论LGG对酒精性肝损伤有保护作用，能够调节Treg／Th17平衡，抑制TLR4通路激活，为酒精性肝损伤早期治疗提供依据。