骨髓间充质干细胞条件膜微粒对心脏成纤维细胞的影响

目的:探讨体外缺氧条件下骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡膜微粒(MSC-MPs)对心脏成纤维细胞(CFs)增殖、迁移和胶原合成的影响。方法:提取SD大鼠MSCs,在缺氧低营养条件下培养,收集上清液并提取MSC-MPs,用MSC-MPs刺激大鼠CFs,用CCK-8和划痕实验分别检测CFs增殖和迁移,qRT-PCR检测CFs中I型胶原、II型胶原、血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白和纤连蛋白的合成情况。结果:CFs被MSC-MPs刺激后,与对照组比较,其增殖能力明显增加(P<0.05),迁移能力无明显变化(P>0.05),I型胶原、I型胶原、波型蛋白和纤连蛋白合成增加(均P<0.05)。结论:体外缺氧条件下MSC-MPs可促进CFs的增殖和胶原合成能力,而对CFs的迁移能力无明显影响。

尾加压素Ⅱ受体拮抗剂对高肺血流性肺动脉高压大鼠肺组织TGF-β1表达的影响

目的:研究尾加压素-Ⅱ(UⅡ)受体拮抗剂在大鼠高肺血流性肺动脉高压(PAH)模型中对转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法:雄性SD大鼠60只随机均分为PAH组(S组)、假手术组(C组)、UⅡ抑制组(M组,给予UⅡ受体拮抗剂帕洛舒仑),每组20只。S组和M组行外科分流术建立PAH模型。造模后4、8、12周,每组取5只大鼠测右心室压力,于第12周留取肺组织标本,Western blot测肺组织中UⅡ和TGF-β1蛋白的表达;RT-PCR检测肺组织中TGF-β1 mRNA表达。多组间比较采用单因素方差分析,相关性采用Pearson相关分析。结果:3组肺动脉压力比较:和C组相比,S组大鼠肺动脉压力显著升高(P<0.05),M组较S组显著降低(P<0.05)。造模后第12周,和C组相比,S组大鼠肺组织中UⅡ蛋白表达量显著升高(P<0.05),M组较S组均显著降低(P<0.05)。造模后第12周,和C组相比,S组大鼠肺组织中TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P<0.05),M组较S组均显著降低(P<0.05)。UⅡ蛋白表达量与肺动脉压力、TGF-β1 mRNA及蛋白表达量均呈正相关(r=0.987、0.979、0.966,P<0.05)。结论:UⅡ受体拮抗剂帕洛舒仑可能通过下调TGF-β1表达而缓解大鼠高肺血流性PAH形成。

lncRNA RP11-86H7.1在川崎病诊断中的临床意义

目的:探讨lncRNA RP11-86H7.1在川崎病(KD)患者血清中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法:筛选KD特异相关的循环lncRNA,分KD治疗前患儿组、KD治疗后患儿组、普通发热患儿组及健康儿童组,采用qPCR检测各组血清lncRNA RP11-86H7.1相对表达。分析血清lncRNA RP11-86H7.1相对表达与KD临床病理特征间关系;绘制ROC曲线,分析血清lncRNA RP11-86H7.1表达水平对KD的诊断效能。结果:KD急性患儿组血清lncRNA RP11-86H7.1相对表达量高于各对照组(P<0.05);年龄和性别比例与低表达组比较差异无统计学意义(P>0.05);qPCR发现lncRNA RP11-86H7.1在KD急性期患儿血清中表达水平明显高于KD恢复期、健康儿童及发热儿童组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血清lncRNA RP11-86H7.1在KD患者中表达上调,其可作为KD早期诊断和评估预后的潜在的生物标志物。

褪黑素在病毒性心肌炎中的保护作用

目的探讨褪黑素在柯萨奇病毒B3(Coxsackie virus B3,CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠中的保护作用,为病毒性心肌炎的治疗提供新的手段。方法将64只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、实验对照组、褪黑素组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型,接种当天记为第0天,24h后正常对照组、实验对照组每日分别经腹腔注射等量生理盐水,褪黑素组每日经腹腔注射溶于乙醇及生理盐水的褪黑素。分别于接种后第7天和第14天从各组随机抽取8只处死,留取心肌组织标本。用苏木素-伊红染色法观察心肌炎症病理改变,蛋白印迹法定量检测Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase 9的蛋白水平表达,用免疫组织化学法检测心肌组织中Cleaved-caspase 3的表达量。结果与正常对照组比较,实验对照组心肌炎症病理评分较高,Bax、Cleaved-caspase 9凋亡蛋白表达水平和Cleaved-caspase 3表达量上调,Bcl-2蛋白水平表达下调,给予褪黑素干预后心肌炎症病理评分降低,并可明显下调Bax、Cleaved-caspase 9凋亡蛋白表达水平和Cleaved-caspase 3表达量,上调Bcl-2蛋白表达水平。结论褪黑素能够减轻心肌损伤,下调病毒性心肌炎小鼠心肌组织中Bax、Cleaved-caspase 3、Cleavedcaspase 9的表达和上调Bcl-2的表达,从而对病毒性心肌炎小鼠起到保护作用。

人巨细胞病毒感染与川崎病的相关性

目的:分析川崎病(KD)儿童血清中人巨细胞病毒(HCMV)抗体水平与KD发生及临床特征的相关性。方法:收集2005年3月至2013年12月温州医科大学附属第二医院育英儿童医院收治的233例KD儿童、113例健康体检儿童及143例发热儿童临床数据进行回顾性分析,同时收集58例KD儿童、40例健康体检儿童及40例发热儿童血清标本行HCMV抗体检测,验证回顾性分析的结果。综合分析KD儿童临床特征、血液指标与HCMV感染之间的关系。结果:回顾性分析结果显示,KD儿童与正常儿童血清HCMVIgM阳性率差异无统计学意义(P>0.05),但均低于发热儿童(P<0.05)。另外,KD儿童、发热儿童及正常儿童血清HCMV IgG阳性率以及滴度水平差异无统计学意义(P>0.05)。验证分析结果显示,3组儿童血清HCMV IgM、IgG阳性率以及IgM滴度水平差异无统计学意义(P>0.05),但KD儿童血清HCMV IgG滴度水平高于发热儿童与正常儿童(P<0.05)。KD儿童临床指标和HCMV感染的相关分析显示,HCMV IgM阳性KD儿童冠状动脉损害的发生比例高于阴性儿童(P<0.05);HCMVIgG阳性和阴性KD儿童冠状动脉损害差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HCMV感染与KD的发生可能无相关性,但在KD儿童中,HCMV的急性感染可能与冠状动脉损害相关。

miR-21在川崎病急性期患者血清中的表达及其临床意义

目的：探讨micrRNA-21（miR-21）在川崎病（KD）患者血清中的表达及其临床意义。方法：收集温州医科大学附属第二医院育英儿童医院2014年1月-2015年6月收治的33例KD患者以及15例健康体检者的血清标本,以cel-miR-39为外参基因,通过实时定量PCR（RT-q PCR）检测血清miR-21的表达,并通过受试者工作特征（ROC）曲线评估其作为KD疾病标记物的诊断价值。结果：miR-21在KD急性期患儿血清中表达水平明显高于健康儿童血清（P〈0.05）,恢复期则降低至正常水平。ROC曲线显示,以miR-21诊断KD的曲线下面积（AUC）为0.736（95%CI：0.531~0.941）,当临界值（诊断阈值）取1.09时,其诊断灵敏度和特异度分别为0.846和0.714。血清miR-21表达与KD临床特征相关分析显示,高血小板水平血清中miR-21表达更高。结论：KD患者血清miR-21水平显著升高,可能是KD诊断的潜在血清标志物之一。

硫化氢对柯萨奇病毒B3心肌炎小鼠血红素加氧酶-1/一氧化碳通路的影响

目的 探讨硫化氢（H2S）对柯萨奇病毒B3（CVB3）心肌炎小鼠血红素加氧酶-1（HO-1）/一氧化碳通路的影响.方法 清洁级近交系雄性Balb/c小鼠70只,分为正常组（n=10）、心肌炎组（n=20）、炔丙基甘氨酸组（PAG组,n=20）和硫氢化钠组（NaHS组,n=20）.心肌炎组、PAG组和NaHS组分别在第0天每只小鼠腹腔注射0.1 ml10-5 69TCID50m·ml-1的CVB3建立心肌炎模型,从第0天起PAG组予以炔丙基甘氨酸（PAG）40 mg·kg-1·d-1腹腔注射,NaHS组予以硫氢化钠（NaHS） 50 μmol·kg-1·d-1腹腔注射,心肌炎组予以等量磷酸盐缓冲液（PBS）腹腔注射.对照组从第0天起每只小鼠每日腹腔注射不含病毒的等量灭菌PBS液.观察至接种后第10天各组取10只小鼠,记录小鼠体重,采血后处死留取心脏标本并记录其质量.采用心脏质量/体重比值衡量心肌水肿程度,以反应心肌炎症程度.苏木素伊红染色观察小鼠心肌病理改变并计算炎症积分.检测各组小鼠血清碳氧血红蛋白（COHb）表达水平.逆转录聚合酶链反应检测心肌细胞中HO-1 mRNA的表达水平.结果 （1）各组小鼠心肌病理学特征：正常组小鼠心肌细胞结构正常,心肌纤维排列整齐,胞浆丰富均匀,横纹清晰,间质无水肿.心肌炎组、PAG组和NaHS组小鼠心肌内均可见心肌细胞坏死崩解,周围伴有大量炎症细胞浸润,以单核细胞和淋巴细胞为主,PAG组心肌细胞坏死及炎症浸润更为明显,坏死灶内可见蓝色钙化颗粒,胞核和细胞轮廓消失,NaHS组炎症较轻,心肌炎症细胞浸润范围较心肌炎组和PAG组小.（2）各组小鼠心脏质量/体重比值和心肌炎症积分：心肌炎组、PAG组和NaHS组小鼠心脏质量/体重比值均明显高于正常组（P均＜0.05）,其中PAG组又明显高于心肌炎组（P＜0.05）,而NaHS组则明显低于心肌炎组（P=0.001）.心肌炎组、PAG组和NaHS组小鼠心肌炎症积分均明显高于正常组（P均＜0.05）,但NaHS组明显低于心肌炎组（P =0.006）,PAG组则明显高于心肌炎组（P =0.038）.（3）各组小鼠血清COHb的表达水平：心肌炎组、PAG组和NaHS组小鼠血清COHb表达水平均明显高于正常组（P均＜0.05）,其中PAG组又明显低于心肌炎组（P=0.000）,NaHS组则明显高于心肌炎组（P =0.000）.（4）各组小鼠心肌HO-1 mRNA的表达水平：心肌炎组、PAG组和NaHS组小鼠心肌HO-1 mRNA的表达水平均明显高于正常组（P均＜0.05）,但PAG组明显低于心肌炎组（P＜0.05）,NaHS组则明显高于心肌炎组（P＜0.05）.（5）小鼠全血COHb表达水平、心肌细胞HO-1 mRNA表达水平及心肌炎症积分三者间的相关性：小鼠全血COHb表达水平与心肌细胞HO-1 mRNA表达水平呈正相关（r=0.927,P=0.000）,心肌炎症积分与全血COHb表达水平呈负相关（r=-0.753,P=0.000）,心肌炎症积分与心肌细胞HO-1 mRNA表达水平呈负相关（r=-0.754,P=0.000）.结论 H2S可诱导CVB3心肌炎小鼠心肌组织HO-1的表达从而上调HO-1/一氧化碳通路,进而发挥心肌保护作用.