伊曲康唑促进AMPK磷酸化诱发结直肠癌细胞铁死亡的抗癌机制研究

目的探讨伊曲康唑(Itra)促进腺苷酸蛋白激酶(AMPK)磷酸化诱发结直肠癌(CRC)细胞铁死亡的抗癌机制。方法体外培养结肠癌HCT116细胞,并将细胞分为对照组、Itra组、Itra+AMPK抑制剂组(抑制剂组)和Itra+AMPK siRNA干扰组(干扰组);采用MTT法检测细胞存活率,活死细胞染色法检测死亡细胞比例,Western blot法检测AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、xCT蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,Hoechst染色法检测细胞凋亡率。结果与0μmol/L组比较,0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0μmol/L的Itra处理48 h后,HCT116细胞存活率均明显下降(均P<0.05),IC_(50)为(4.86±1.23)μmol/L。活死细胞染色显示,2.5、5.0、10.0μmol/L的Itra处理48 h后,死亡细胞比例较0μmol/L组均明显增加(均P<0.05)。与0μmol/L组比较,2.5、5.0、10.0μmol/L的Itra处理48 h后,HCT116细胞p-AMPK蛋白表达水平均明显增加(均P<0.05);以5.0μmol/L为Itra的终浓度处理HCT116细胞12、24、48 h后,p-AMPK蛋白表达水平亦明显增加(均P<0.05)。与对照组比较,5.0μmol/L的Itra处理48 h后HCT116细胞内ROS含量及细胞凋亡率均明显增加(均P<0.05),GPX4、xCT蛋白表达水平均明显下降(均P<0.05);与Itra组比较,抑制剂组、干扰组细胞内ROS含量及细胞凋亡率均明显下降(均P<0.05),GPX4、xCT蛋白表达水平均明显增加(均P<0.05)。结论体外研究证实Itra通过激活AMPK信号通路来增加CRC细胞内ROS含量,进而抑制GPX4、xCT蛋白表达,促使铁死亡的发生,最终抑制CRC细胞的增殖。

血清胃蛋白酶原对持续幽门螺杆菌感染无症状患者的诊断价值

目的探讨胃蛋白酶原(PG)用于检测幽门螺杆菌(H.pylori)持续感染的无症状患者的价值,以期将血清胃蛋白酶原检测用于胃癌高危患者的筛查。方法选取2021年1月—2022年12月于温州医科大学附属第五医院行胃镜检查的患者(n=583)为研究对象,入组在胃镜检查当天同时接受13C尿素呼吸测试(13C-UBT)和血清胃蛋白酶原检测进行胃癌筛查的无症状受试者。结果在583名受试者中,UBT检测阳性患者206人(35.33%),血清PGⅠ和PGⅡ水平高于未感染人群,PGⅠ/Ⅱ比率低于未感染人群(P<0.05)。Logistic回归分析显示,在单因素分析中H.pylori感染和PGⅠ、PGⅡ及PGⅠ/Ⅱ比率相关(P<0.05),还与年龄、糖尿病相关(P<0.001);多因素分析显示,血清PGⅡ(OR=1.293,95%CI:0.932~2.085,P<0.001)和PGⅠ/Ⅱ比率(OR=0.594,95%CI:0.343~0.978,P<0.001)是H.pylori持续感染的影响因素。血清PGⅡ水平>13.59μg/L(AUC=0.934,灵敏度为87.5%,特异性为91.7%)和PGⅠ/Ⅱ比率<4.85(AUC=0.890,灵敏度为86.8%,特异性为81.6%)与H.pylori感染有关。PGⅠ/Ⅱ比率与年龄呈负相关关系(r=-0.167,P=0.041)。≥50岁的老年受试者(<4.27;AUC=0.865,灵敏度为80.7%,特异性为88.2%)的PGⅠ/Ⅱ比率的cut-off值低于50岁以下年轻受试者(<4.85;AUC=0.903,灵敏度为87.4%,特异性为82.9%)。结论血清PGⅡ水平>13.59μg/L,PGⅠ/Ⅱ比率<4.85表明无症状受试者持续感染,应考虑进行幽门螺杆菌13C-UBT确认测试。与年轻受试者相比,年龄≥50岁的老年受试者需要更严格的标准(PGⅠ/Ⅱ比率<4.27)来检测持续感染。