新城疫病毒HN基因的克隆及原核表达

为了获得新城疫病毒(NDV)HN基因和重组表达蛋白,试验采用基因克隆和原核表达的方法,以NDV La Sota毒株为参考毒株设计特异性引物,利用RT-PCR技术从NDV La Sota毒株中扩增出去信号肽和跨膜区的HN基因(大小为1 593 bp),将其克隆至p BluscriptⅡKS(+/-)多克隆位点,再将HN基因亚克隆到原核表达载体p ET-28a中,构建重组表达质粒p ET-28a-NDV-HN,并用IPTG诱导表达,最后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明:重组蛋白获得高效表达,且具有良好的免疫反应性。

猪流行性腹泻浙江流行毒株（ZJ-WZ）N基因的克隆及蛋白的原核表达

为了深入研究猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白的免疫学特性、结构与功能，本试验以PEDV标准株CV777为参考毒株设计特异性引物，利用反转录聚合酶链式反应RT—PCRZXPEDV浙江流行毒株（ZI—WZ）中扩增出核衣壳蛋白N基因。将其克隆至克隆载体质粒pBluscriptⅡKs（＋／一）多克隆位点区，经过PCR检测、EcoRI单酶切以及测序鉴定，结果表明成功克隆获得N基因。再将N基因亚克隆到原核表达栽43gpET-30a（＋）中，构建重组表达质粒pET-30a—PEDV—N，并在37qC的条件下经IPTG诱导表达，通过SDS—PAGE分析结果表明，获得了该蛋白的高效表达。免疫印迹反应Westem—blot分析结果表明重组蛋白具有良好的免疫反应性。

猪流行性腹泻病毒浙江分离株(ZJ-WZ)的N蛋白原核表达

以猪流行性腹泻病毒(PEDV)标准株CV777为参考毒株设计特异性引物,利用RT-PCR从PEDV浙江流行毒株ZJ-WZ中扩增出核衣壳蛋白(N)基因。将其克隆至p BluscriptⅡKS(+/-)多克隆位点区,经过PCR检测、EcoR I单酶切以及测序鉴定,结果表明成功克隆获得N基因。将N基因亚克隆到原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒p ET-30a-PEDV-N,经IPTG诱导、SDS-PAGE和Western blot分析表明,N蛋白获得高效表达。本试验为深入研究PEDV的N蛋白免疫学特性及功能奠定了基础。