人胎肝细胞体外感染丙型肝炎病毒的定位研究

为了证实人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒 (HCV)阳性血清共培养 2 4h是否能感染 HCV病毒而作定位研究。采用透射电镜、免疫电镜的手段对于 HCV阳性血清共培养的人胎肝细胞中病毒样颗粒进行定位研究 ,以测定细胞内是否有 HCV。结果发现在透视电镜下人胎肝细胞胞浆中有很多病毒样颗粒 ,直径约 45 nm。通过免疫电镜进一步证实在人胎肝细胞中这些病毒样颗粒含有 HCV基因表达产物 NS3及 NS5。此外 ,人胎肝细胞在体外与 HCV阳性血清共培养 2 4h并经多次洗涤后的培养上清加入到新鲜分离的正常人胎肝细胞培养基中继续培养 ,可以得出上述相同的结果。这些结果表明人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染 HCV,并且感染了

人胎肝细胞分离与培养技术的研究

目的 探讨分离及培养人胎肝细胞的最佳方法。方法 比较两种灌流消化法对分离人胎肝细胞的效果 ,观察不同条件对体外培养人胎细胞生长及生存时间的影响。结果 经腹主动脉及脐静脉双灌流消化法分离人胎肝细胞效果明显优于单纯经脐静脉灌流消化法 ,前者肝细胞获得率为 (5.97± 1 .81 )× 1 0 8/kg体重 ,后者肝细胞获得率为 (4 .1 2± 2 .3 1 )× 1 0 8/kg体重 (P <0 .0 5)。促肝细胞生长素对体外培养的人胎肝细胞生长和生存时间无明显影响 ,均在培养第 1 0～ 1 4天开始变性、坏死。鼠尾胶可延长体外培养人胎肝细胞的生存时间达 2 0～ 2 8d。与球体细胞培养方法相结合 ,人胎肝细胞在体外生存时间延长至 3 0～ 3 8d。结论 人胎肝细胞的分离应首选经腹主动脉及脐静脉双灌流消化法。人胎肝细胞在体外生存时间受培养条件的影响。