癌基因及其在口腔肿瘤中的表达

癌基因是目前癌症研究中的活跃领域,深人研究可望揭示癌变的分子机制,对肿瘤的早期诊断,治疗和监测有重要意义。口腔肿瘤中癌基因的研究正在引起人们的兴趣和重视,本文对癌基因的研究概况及癌基因在口腔肿瘤中的表达情况作一简要介绍。

超氧化物歧化酶的临床意义

一、前言超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)是一类清除含氧自由基的金属酶。它广泛存在于各种生物体内。自二十多年前Mc Cord和Fridovich首次从牛血中提纯出CuZn-SOD并首次在医学中应用,至目前为止,SOD除用作抗炎药物外,还具有抗衰老、抗肿瘤和抗辐射作用。广大医学科学工作者越来越重视其结构、功能及其在医学中应用的研究。二、生物体内的抗氧化防御体系在需氧生物中,机体所摄取的氧基本是作为呼吸链的终末受体,被细胞色素C氧化酶催化还原成水。

白细胞介素2(Interleu kin2简称IL-2)——肿瘤治疗的新希望

自1982年以来.IL-2基因工程已成为国内外热衷的课题。人们不仅从大肠杆菌中生产出纯化的重组白细胞介素2 (rIL—2),即将Jurkat细胞的一个基因与质粒重组,重组体再转染到大肠杆菌中,而且从分子生物学、免疫学等角度来探索其抗肿瘤机制,期待着IL-2成为肿瘤的克星。本文就其在肿瘤治疗中的研究近况作一概述。

克隆化探针中载体与临床样品同源性的研究

当前,克隆化探针(由病毒核酸片段和细菌质粒一载体组成)在临床样品的实验诊断和研究中得到了应用。它具有简便、快速、灵敏等优点,并有助于检测那些难于或不能培养的病毒。但是克隆化探针中载体与临床样品的同源性问题应引起重视。我们用常见的克隆载体pBR322作探针,用核酸点杂交和Southern吸印方法,检测了来自173人的213例样品。结果表明,在常用的临床样品:人宫颈脱落细胞、宫颈活检组织、血液中都含有pBR322 DNA的同源序列,这就意味着如果用克隆化探针检测这些临床样品时,可能出现样品与载体发生非特异性反应,而不是与病毒基因片段的特异性反应。实验还表明,经一次电泳纯化的病毒基因片段与pBR322探针杂交,阳性信号明显减弱,但没有完全消失,说明仍有少量pBR322污染。因此,在运用克隆化探针检测临床各类样品时,各系统要按常规设载体探针对照,或者用多次纯化的分离病毒基因片段作探针,以排除载体与临床样品的同源性问题。

C-MYC癌基因与宫颈癌发生发展相关性的初步研究

应用细胞转化和核酸杂交技术研究 c-myc 癌基因与宫颈癌的关系,可见宫颈癌DNA 转染 NIH/3T3细胞,在 G_(418)-DMEM 选择性培养液中形成能持久增殖、呈重叠生长的转化灶,转化灶细胞基因组中 c-myc 癌基因有扩增现象;经斑点杂交检测正常宫颈、慢性宫颈炎和宫颈癌组织DNA 中 c-mye 癌基因,揭示宫颈癌组织中其拷贝数明显增加;宫颈腺癌 DNA 经 Hind Ⅲ单酶切进行Southern Blot 杂交出现两条阳性杂交带,而宫颈鳞癌 DNA 经 EcoRⅠ或 HindⅢ/EcoRⅠ或 EeoRⅠ酶切,均只出现一条阳性杂交带。

人乳头瘤病毒在宫颈癌组织中存在状况的初探

采用Southern吸印杂交技术,对人乳头瘤病毒16型(HPV-16)在人宫颈癌活检组织中存在的状况进行了研究。结果提示:①存人宫颈癌组织中存在着HPV-16 DNA序列,并且HPV-16 DNA是整合在肿瘤细胞的基因组中(有的也带有游离的片段)整合的位点是随机的;②不同的人宫颈癌组织HPV-16DNA的含量不同,酶切片段的大小也不同;③HPV-16具有诱导NIH/3T3细胞发生转化的功能,病毒基因亦是整合在细胞染色体DNA中。

利用G_(418)转染选择系统检测宫颈癌DNA的转化活性

从人宫颈癌组织中制得高分子DNA,选用NIH/3T3细胞作受体,以含抗新霉素基因的表达载体(PSV-neo)作为抗性选择标记和人宫颈癌DNA进行共转染。转染后的细胞采用G_(418)和低血清进行筛选。其结果获得了形态恶变的转化细胞灶,它能在0.3%软琼脂培养基中生长,在裸鼠体内成瘤,并证实为纤维肉瘤。而对照NIH/3T3细胞却没有这种能力和性能。转化灶DNA能与标记探针Blu-R8起杂交反应。提示人Alu重复序列片段也整合到转染体基因组中。

肿瘤患者红细胞中超氧物歧化酶活性的动态观察

从108名非肿瘤患者和56名肿瘤患者红细胞中得到;SOD 粗提液,利用邻苯三酚自氧化法测量其活性。观察到肿瘤患者 SOD 活性(1439±456u/gHb)明显低于非肿瘤患者(1840±400u/gHb).癌症分类统计表明妇科肿瘤,肺癌和消化道肿瘤患者 RBC SOD 活性均低于非肿瘤患者.通过 RBC SOD 活性动态观察发现初诊肿瘤患者 RBC SOD 活性明显低于放射治疗、化疗及综合治疗等的肿瘤病人,表明有效的治疗可使肿瘤患者 RBC SOD 活性不同程度地升高。以上结果提示RBC SOD 活性与肿瘤发生、发展、预后及治疗措施的有效选择有关。

[α-^(35)S]dATP标记DNA探针在临床样品检验中的应用

用国产[α-^(35)S]dATP,经体外缺口翻译(nick translation)方法,制备 pBR322 DNA 探针,用于检测临床样品中 pBR322 DNA 的同源性物质。结果提示,^(35)SdATP 标记 DNA 探针,具有特异性强,敏感性高,方法简便,而且对人体辐射危害小,价格便宜等特点,可用于临床检验、诊断及基因分析。

聚合酶链反应法扩增宫颈癌c-Ha-ras癌基因100bp片段

富颈癌 DNA 在两种特异引物和 DNA 聚合酶的存在下,经35轮循环的变性、退火和链的延伸反应,c-Ha-ras 癌基因100bp 片段被放大约10~6倍。反应产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳可见清晰的扩增带。

LAK细胞对Hela细胞杀伤作用的初步探讨

IL-2诱导正常人 PBL 后,所产生的 LAK 细胞在体外对 Hcla 细胞的杀伤作用,以90u/ml 的 IL-2诱导 PBL 产生的 LAK 细胞对 Hela 细胞杀伤作用较明显。实验揭示出 LAK 细胞的作用比单独使用 IL-2效果好,而 IL-2与 LAK 细胞的联合作用,其效果更佳。

人宫颈癌DNA中c-Ha-ras转化基因的检测和分析

以同位素标记的 PT_(24)Ha-ras 癌基因为探针,采用斑点杂交方法检测20例宫颈癌、12例宫颈炎、1例恶性葡萄胎 DNA 中 c-Ha-ras 基因的同源序列,杂交结果为:20例宫颈癌均为阳性。3 例宫颈炎和1例恶性葡萄胎出现阳性信号。以基因转染技术证实了宫颈癌 DNA 的转化活性,并证明转化细胞株中 c-Ha-ras 的存在。本研究结果提示,c-Ha-ras 癌基因是人富颈癌的转化基因之一。