人乳头瘤病毒(地方株)16型E7蛋白的抗原性和免疫原性研究

以融合蛋白包含体形式在大肠杆菌中高效表达了人乳头瘤病毒１６型（湖北株）Ｅ７基因（ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ）。用蛋白质印迹技术（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）对该基因表达产物ＨＢＥ７融合蛋白的性质进行了鉴定。发现ＨＢＥ７融合蛋白能与ＨＰＶ１６Ｅ７单克隆抗体结合，表明该融合蛋白至少部分保留了Ｅ７蛋白的抗原特性。因此，将该融合蛋白免疫小鼠。３ｗｋ后，在小鼠血清中既检测到了抗载体蛋白的抗体，又检测到了特异性抗ＨＢＥ７抗体。实验表明：ＨＢＥ７不仅能与Ｅ７抗体产生反应，具有反应原性，而且在动物免疫中产生特异性抗体。

人乳头瘤病毒16型(湖北株)E7基因在体内和体外的表达

目的 构建人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 ) E7湖北株(HB)基因真核表达质粒 ,探讨其在哺乳动物体外、体内表达状况 ,为本地区 HPV相关肿瘤的基因治疗提供依据 .方法 采用分子克隆技术 ,构建 HPV16 E7- HB(已作测序 )重组表达质粒 ;磷酸钙 - DNA沉淀技术及基因免疫技术将外源目的基因 (HPV16 E7- HB)导入 NIH3T3细胞及大、小鼠体内 ;PCR,RT- PCR,免疫荧光染色技术对外源目的基因及其产物 (m R-NA,蛋白质 )进行检测 ;EL ISA法用于检测免疫动物抗血清 .结果 重组后外源目的基因及载体 DNA大小、方向、插入位点均正确 ;转染细胞 2 d后 RT- PCR出现特异扩增带 ;细胞涂片可见特异性 E7蛋白荧光颗粒分布于胞质中 ,少数在胞核 ;基因免疫后肌组织 E7- HBDNA持续阳性 ;RT- PCR阳性率大鼠 3/3、小鼠 1/10 ;虽然组织切片未能检出 E7蛋白 ,但基因免疫后第 2周小鼠血清检出了特异性抗 E7抗体 .结论 HPV16 E7- HB真核表达质粒构建成功 ,并能够在哺乳动物体外、体内有效表达 ;

宫颈癌多基因检测及其临床意义

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，其死亡率居女性恶性肿瘤第二位。尽管近些年来对宫颈癌进行综合防治取得一定进展，但由于病因和发病机制尚未根本弄清，Ⅱ、Ⅲ级预防未能全面展开；Ⅰ级预防也缺乏充分的理论依据和实验基础，故发病率和死亡率仍未能得到有效控制。...

人乳头瘤病毒16型E7核酸疫苗的构建及鉴定

人乳头瘤病毒16 型在引起宫颈上皮转化过程中, 持续表达E7 蛋白, 有可能成为肿瘤特异性移植抗原。本文将E7蛋白的编码基因定向克隆于真核表达载体构建了HPV16E7HB核酸疫苗, 将该疫苗直接注射BALB/c 小鼠和Wistar 大鼠股四头肌, 动态观察, 28d 后仍能测出E7DNA 的扩增。提取肌组织RNA, RTPCR检测老鼠特异性E7 的转录情况, 3/3 大鼠,1/10 小鼠为阳性; 用ELISA法在免疫小鼠血清中检出了特异性抗E7 抗体。证明, HPV16E7HB

多重聚合酶链反应在人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

采用多重聚合酶链反应技术，在一个反应中同时加入３对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）型特异性引物，１次可完成３个型别ＨＰＶＤＮＡ扩增。其结果显示，在有ＨＰＶ感染的样品中，ＨＰＶ１６占７２．７％，ＨＰＶ１８占１６．４％，其他型占１０．９％，从正常宫颈上皮细胞到宫颈癌变细胞，ＨＰＶ１６ＤＮＡ检出率随病变程度的加重而增加（８．８％－２２．２％－６０％），反映了宫颈癌与ＨＰＶ１６感染关系密切；在正常宫颈和良性病变宫颈上皮细胞中未检出ＨＰＶ１８，而在恶性细胞中占１６．４％；宫颈癌患者经钻放疗后，细胞内ＨＰＶ１６检出率降低（６０％－２５％，Ｐ＜０．０１）而ＨＰＶ１８Ｓ仍维持同一水平（１６．４％－１８．８％，Ｐ＞Ｏ．０５）。提示ＨＰＶ１８感染不仅与宫颈癌发生有关，而且与部分癌复发和不良预后有关。

用通用引物聚合酶链反应对宫颈刮片中人乳头瘤病毒感染的快速筛检

用通用引物聚合酶链反应（ＧＰ－ＰＣＲ）可同时对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６、１８、３１、３３等型进行检测。该方法成功地用于临床宫颈刮片样品广谱ＨＰＶ感染的筛检。结果，宫颈癌组ＨＰＶ检出率（８５．５％）明显高于非癌组（１３．９％）（Ｐ＜０．０１）；对宫颈癌放疗前后ＨＰＶ阳性率比较，二者亦有明显差异（８５．５％，４３．７％，Ｐ＜０．０１）。证明ＧＰ－ＰＣＲ是一种在大规模人群中快速筛检多型ＨＰＶ感染的有效方法。