钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白诱导的免疫应答作用

目的:探究钙结合蛋白S100A4对鸡卵清白蛋白(OVA)诱导的免疫应答作用。方法:10只C57BL/6雌性野生型(WT)小鼠随机均分OVA组(右踝关节注射OVA 20μg)与OVA联合S100A4蛋白组(右踝关节注射OVA 20μg和S100A4蛋白5μg混合液,即联合组),注射2周后收集2组小鼠引流淋巴结和血清,采用流式细胞术检测引流淋巴结T细胞与树突状细胞(DC)及其活化百分比,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中OVA特异性免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白E(IgE)的水平。结果:流式细胞术检测结果显示,联合组小鼠引流淋巴结中T细胞(CD3+)、DC(CD11c+)、活化T细胞(CD3+CD69+)及活化DC(CD11c+MHC-Ⅱ+)百分比均高于OVA组(P<0.05);ELISA检测结果显示,联合组小鼠血清中OVA特异性IgG明显高于OVA组(P<0.01)。结论:S100A4蛋白能够促进OVA诱导的免疫应答,起着免疫佐剂的作用。

钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞活化的作用

目的:探讨钙结合蛋白S100A4调节小鼠骨髓源肥大细胞(BMMC)活化的作用。方法:8~10周龄野生型(WT)和S 100 A 4基因敲除(S 100 A 4-/-)C57BL/6健康雄性小鼠各2只,取胫骨与股骨提取骨髓进行骨髓源肥大细胞(BMMC)培养并鉴定;以成熟WT BMMC为模型细胞,实验分为S100A4蛋白处理组(1500μg/L S100A4蛋白)和磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(S100A4蛋白等量体积PBS),分别于培养第1、2及3周采用甲苯胺蓝染色鉴定小鼠成熟BMMC,采用化学发光法检测各组小鼠成熟BMMC中β-氨基己糖苷酶(β-hex)的吸光度(OD),采用流式细胞术检测各组小鼠成熟BMMC的S100A4蛋白表达和白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-13(IL-13)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的荧光强度并计算相对荧光指数(rFI);以成熟WT和S 100 A 4-/-BMMC为模型细胞,实验分为WT离子霉素(ION)处理组(1500μg/L ION)、WT PBS对照组(ION等量体积PBS)、S 100 A 4-/-ION处理组(1500μg/L ION)及S 100 A 4-/-PBS对照组(ION等量体积PBS),采用化学发光法检测各组小鼠成熟BMMC中β-hex的吸光度(OD)。结果:BMMC培养至3周时基本成熟,并表达S100A4蛋白;S100A4蛋白处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平高于PBS对照组(P<0.05或P<0.01);WT ION处理组成熟BMMCβ-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平高于WT PBS对照组(P<0.01),S 100 A 4-/-ION处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5及IL-6明显高于S 100 A 4-/-PBS对照组(P<0.05),S 100 A 4-/-ION处理组成熟BMMC中β-hex、IL-5、IL-6、IL-13及TNF-α水平均低于WT ION处理组(P<0.05)。结论:S100A4蛋白能够直接诱导成熟BMMC活化,S 100 A 4基因的缺失可抑制成熟BMMC活化及炎性因子的产生。