讲授和案例融合教学方法在免疫学教学中的实施及效果评价

目的探讨讲授和案例融合教学方法在医学免疫学教学中的教学效果。方法选取本校护理专业本科2011级2班、2011级1班的学生分别作为实验组和对照组,实验组采用讲授和案例融合教学方法 ,对照组采用传统教学法。通过问卷调查的形式评价教学效果,并比较两组的考试成绩。结果大多数学生(≥80.00%)认为讲授和案例融合教学方法能够将基础理论与临床问题相联系,有利于临床实践能力的培养;多数学生(≥75.00%)认为此教学方法能激发学习兴趣,提高自学能力,提高思考、归纳能力;仅少数学生(<30.00%)认为该方法有利于科研意识和良好职业道德的培养。实验组的平均成绩为(84.57±5.36)分,显著高于对照组的(72.81±4.13)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论讲授和案例融合教学方法可提高教学效果,有利于学生开阔视野及临床思维能力的培养。

DAPT调节Treg/Th17细胞免疫平衡抑制动脉粥样硬化

目的:观察Notch信号抑制剂分泌酶抑制剂(γ-DAPT)对动脉粥样硬化小鼠病理改变及Treg/Th17细胞免疫平衡的影响。方法:将24只Apo E基因敲除C57BL小鼠随机分为空白组、模型组和DAPT组。空白组用普通饲料饲养,模型组和DAPT组用高脂饲料饲养。饲养5周后,DAPT组小鼠以100 mg/(kg·d)皮下注射DAPT(溶于DMSO中),其余两组皮下注射等量DMSO。5周后,采用病理染色分析各组小鼠动脉病理改变,ELISA检测血浆中IL-17水平,采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏Treg/Th17细胞比例。结果:HE染色结果显示,模型组有明显粥样斑块形成和泡沫细胞形成,DAPT组动脉病变程度比粥样动脉硬化模型组明显减轻。正常组、模型组和DAPT组各组血浆中IL-17水平分别为(293.94±28.59)、(454.05±172.68)和(335.40±89.57)pg/ml;DAPT降低AS小鼠血浆IL-17水平(P<0.05)。空白组、模型组和DAPT组各组小鼠Treg细胞百分比分别为(3.80±0.56)%、(2.54±0.38)%和(4.73±0.64)%;DAPT降低AS小鼠血浆IL-17水平(P<0.05)。空白组、模型组和DAPT组各组小鼠Th17细胞亚群分别为(3.46±0.23)%、(4.52±0.85)%和(1.38±0.37)%。结论:DAPT降低AS小鼠血浆IL-17的水平,抑制Th17细胞亚群分化,而促进Treg细胞分化,通过改变Treg/Th17细胞免疫平衡从而减轻动脉粥样硬化。

浅谈医学免疫学实验内容的改进

实验课教学作为医学教育不可分割的一个重要组成部分,不仅对提高学生学习理论课的兴趣、加深对理论的理解和记忆等有极大的促进作用,而且与培养学生基本操作技能,提高其分析问题和解决问题的能力、树立严谨的科学态度等息息相关。然而,在医学免疫学迅猛发展的今天,免疫学实验教学整体水平却越来越落后于理论教学,

大承气汤降低心脏骤停后综合征兔血清类胰蛋白酶及炎性细胞因子的水平

目的观察大承气汤对心脏骤停后综合征(PCAS)兔血清肥大细胞类胰蛋白酶和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素8(IL-8)水平的影响。方法大耳白兔30只,随机分为假手术组、模型组、大承气汤组。采用窒息性心脏骤停制备兔PCAS模型。大承气汤组在自主循环恢复后15 min给予大承气汤每日15 g/kg灌胃(分2次使用)。分别在0、24、48、72 h观察反映器官功能的检测指标,采用ELISA测定兔血清类胰蛋白酶、MCP-1、IL-8的水平。结果大承气汤可明显减轻心、脑、肝、肾功能障碍。PCAS模型组血清类胰蛋白酶、MCP-1和IL-8含量均明显高于假手术组(P<0.01)。大承气汤组血清类胰蛋白酶含量(6 h)、MCP-1含量(6、24、48 h)和IL-8含量(6、24 h)均明显低于PCAS模型组(P<0.05或P<0.01)。结论大承气汤可降低PCAS兔血清类胰蛋白酶、MCP-1、IL-8的水平。

靶向克隆法构建pET15b-VP3原核表达载体

目的探索利用PCR产物靶向克隆法构建能够表达凋亡素的pET15b-VP3原核表达载体。方法以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b,得到重组表达载体pET15b-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行XhoⅠ和BamHⅠ双酶切,图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体。结果 PCR产物经过电泳鉴定可见366bp特征性的VP3片段,重组质粒经双酶切电泳获得了一个大小为366bp的VP3片段,重组质粒测序证实VP3cDNA编码区成功地插入了pET15b,且其序列与GeneBank中VP3cDNA序列完全一致。结论靶向克隆法可快速,高效地构建pET15b-VP3原核表达载体,为进一步研究VP3药用价值奠定了基础。

黄柏对大鼠口腔溃疡的作用及其对TNF-α水平的影响

目的:探讨黄柏对大鼠口腔溃疡的治疗效果及其作用机制。方法:采用90%苯酚灼烧的方法制备大鼠口腔溃疡模型,观察不同浓度黄柏的治疗效果。采用ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。结果:黄柏可明显缩短口腔溃疡病程。口腔溃疡造模后大鼠血清TNF-α含量明显升高,与正常对照组相比,有显著性差异(P<0.01);黄柏治疗后,高、低剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低,尤以高剂量组TNF-α的含量降低明显,低于模型对照组(P<0.05)。结论:黄柏可降低血清TNF-α含量,减轻炎症损伤,这可能是黄柏治疗口腔溃疡的机制之一。

硒化壳聚糖促创面愈合作用的体内研究

目的:研究硒化壳聚糖软膏促浅Ⅱ度烫伤小鼠创面愈合的作用。方法:147只昆明种小鼠随机分为硒化壳聚糖软膏治疗组、基质治疗组和京万红治疗组,每组49只,采用将脱毛区置于70℃恒温水浴中6s的方法制成10%体表面积浅Ⅱ度烫伤模型,伤情经病理切片证实。各组创面分别用硒化壳聚糖软膏纱布(1ml/cm2)、基质纱布(1ml/cm2)、京万红纱布(1ml/cm2)覆盖包扎固定后放回笼中饲养,换药1次/天,观察愈合时间,于伤后12h,第1、3、5、7和9天,分别处死各组小鼠7只,检测含水量、羟脯氨酸、TNF、NO、ALT,另取7只做为正常对照。结果:①创面愈合时间:硒化壳聚糖软膏组为(12.9±2.9)天、基质组为(16.3±2.1)天、京万红组为(11.8±2.4)天,硒化壳聚糖软膏组比基质组明显缩短(P<0.05);②创面含水量:伤后第1、3、5天硒化壳聚糖软膏组[(86.3±3.5)%、(77.8±3.9)%、(72.3±2.7)%]创面含水量显著低于基质组[(92.8±3.2)%、(84.9±4.2)%、(77.2±2.8)%,(P<0.05)],伤后7～9天,各组均基本恢复到正常水平;③创面TNF-α水平:伤后12h至1天达高峰,随后逐渐下降,至伤后第5天仍高于正常对照组(P<0.05);伤后12h、1天、3天、5天,硒化壳聚糖软膏组和京万红组TNF水平明显低于基质组(P<0.05);④创面组织NO含量:伤后12h各烫伤组NO含量达高峰,随后下降,至伤后第9天仍高于正常对照组(P<0.05);伤后12h、1天,硒化壳聚糖软膏组和京万红组NO含量明显低于基质组(P<0.05);⑤创面羟脯氨酸含量:伤后5、7、9天硒化壳聚糖软膏组羟脯氨酸含量显著高于基质组和京万红组(P<0.05)。结论:硒化壳聚糖软膏能有效减少烫伤后早期创面组织NO和TNF-α释放,减少渗出和水肿,晚期通过增强创面胶原合成来促进创面愈合。

凋亡素VP3蛋白的原核表达及纯化

目的构建凋亡素VP3蛋白的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法采用PCR法自PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒中扩增VP3基因,运用靶向克隆酶将VP3基因插入线性pET15b,构建重组表达质粒pET-15b-VP3;经测序证实构建成功后转化E.coli Rosetta,表达凋亡素VP3蛋白;经Ni-NTA树脂亲和层析,对纯化产物进行SDS-PAGE、Western blotting分析鉴定。结果成功构建凋亡素VP3蛋白原核表达质粒,表达并纯化了分子量为13.6 kD的凋亡素VP3蛋白。结论凋亡素VP蛋白原核表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用凋亡素VP3蛋白进行抗肿瘤研究奠定了基础。

浆细胞样树突状细胞与免疫耐受

浆细胞样树突状细胞（PDC）来源于淋巴系干细胞，其表面标志、功能有别于髓系DC，不仅在抗病毒免疫中发挥重要作用，而且通过多种途径诱导T细胞失能和调节性T细胞的形成，从而参与免疫耐受的诱导。PDC诱导T细胞免疫耐受的分子机制与吲哚胺2，3-双加氧酶（IDO）－色氨酸代谢通路和具有抑制功能的膜分子密切相关。深入阐明PDC诱导耐受的机制，将为免疫耐受异常相关的疾病的治疗提供新方案。

兔心肺复苏后全身炎症反应综合征的动态变化

目的探讨心搏骤停心肺复苏后全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）的变化规律，为临床防治提供理论依据。方法将日本大耳白兔40只随机（随机数字法）分为假手术组和心搏骤停4，5，6min组，每组10只。假手术组仅进行麻醉和逆行气管插管、动脉血压监测，不进行气管夹闭窒息；心搏骤停组采用气管夹闭窒息法致使心脏骤停，分别于心搏骤停后4，5，6min进行复苏，分别在0，24，48，72，96，120h6个时点观察动物生理参数，取血样测定炎性因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C-反应蛋白（C—reactive protein，CRP）和白细胞的水平。多时点资料比较采用重复测定方差分析。结果复苏组心肺复苏后24h均呈现SIRS，TNF-α，CRP的表达明显升高，与心搏骤停前基础值相比差异具有统计学意义（P〈0．01）。心搏骤停4min复苏组，SIRS水平以24～48h较高，于复苏后72h基本消失。心搏骤停5，6min组，SIRS水平以24—72h较高，持续至复苏后96h。结论心搏骤停4min，SIRS较轻，容易恢复。心搏骤停5min以上，SIRS严重。心搏骤停复苏后血清TNF—α是反映SIRS程度的敏感指标，可作为SIRS的辅助诊断指标，并指导临床早期诊断、早期治疗。

氧化低密度脂蛋白抑制人外周血CD4^+T细胞Notch1、Notch2的表达

目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人CD4+T细胞Notch分子表达的影响。方法:采用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞,分离淋巴细胞,经流式细胞术分选CD4+T细胞,然后分为4组:空白对照组,低、中、高浓度组,加入浓度分别为0、50、100、200 mg/L的ox-LDL培养72 h,流式细胞术检测CD4+T细胞Notch1、Notch2分子的表达变化。结果:流式细胞术检测显示,空白对照组,低、中、高浓度组的Notch1表达分别为(3.81±0.34)%、(1.68±0.25)%、(0.73±0.21)%、(0.31±0.17)%。与空白对照组比较,低、中、高浓度组Notch1表达率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组,低、中、高浓度组的Notch2表达分别为(15.75±1.48)%、(26.33±2.68)%、(12.42±3.19)%、(9.87±1.65)%。与空白对照组比较,低浓度组Notch2表达率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),中、高浓度组Notch2表达率反而明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的ox-LDL能明显抑制人外周血CD4+T细胞Notch1、Notch2分子表达,可能与ox-LDL抑制Th2分化而促进Th1异常分化有关,参与动脉粥样硬化的发生、发展。

靶向克隆法构建PEP-1-VP3基因的原核表达载体

目的利用PCR产物靶向克隆法构建细胞穿透肽-凋亡素(PEP-1-VP3)的原核表达载体。方法以PGEX-6P-1/TAT-VP3质粒为模板,PCR扩增VP3基因的366bp片段,应用靶向克隆酶,将VP3基因插入到线性pET15b-PEP-1,得到重组表达质粒pET15b-PEP-1-VP3,经过筛选,挑选出阳性克隆进行NdeⅠ和BamHⅠ双酶切图谱分析和重组质粒核苷酸序列分析以鉴定所构建的原核表达载体。结果 PCR产物经过电泳可见366bp特征性的VP3片段,重组的质粒经过双酶切获得了一个大小为440bp的特征性PEP-1-VP3片段,重组质粒测序证实VP3cDNA编码区成功地克隆入了pET15b-PEP-1,且其序列与GeneBank中VP3cDNA序列完全一致。结论靶向克隆法可快速、高效地构建PEP-1-VP3基因的原核表达载体,为制备PEP-1-VP3融合蛋白奠定基础。