多措并举推进疫情背景下医学免疫学线上教学实践

为贯彻响应疫情期间“停课不停教、停课不停学”的指示要求,该校免疫学教研室积极实践线上医学免疫学教学。该文总结了疫情背景下通过多种举措推进线上教学实践的过程,并讨论思考线上教学中存在的问题,为进一步推进“线上+线下”混合式教学提供思路。

结构化研讨方法在医学免疫学教学中的应用

医学免疫学在生命科学发展和医学教育中占有重要地位,但因其理论性强、内容抽象使学生感到学习困难,因此需要探索新的教学方法,以提高学生的学习效果.结构化研讨是一种新型的培训方式,依据立体思维的理念,针对明确的目标,遵循一定的规则和程序,运用适当的研讨工具,具有引导的团队研究和讨论活动.该文初次探索了该讨论方式在免疫学讨论课中的应用,以全面促进学生综合分析能力,加强学生对免疫学知识的理解.

白血病抑制因子通过调控CD44的表达增强结直肠癌细胞干性特征

目的:探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)通过调控肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)分子标志物CD44的表达增强结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞干性特征的分子机制。方法:利用TCGA公共数据库和RNAscope原位杂交方法分析LIF基因在CRC组织中的表达情况;应用慢病毒感染系统构建稳定敲减LIF的CRC细胞系(HCT116和Caco2细胞);实验分CRC细胞对照组、CRC细胞添加LIF组、CRC细胞敲减LIF对照组和CRC细胞敲减LIF组;应用干细胞成球实验、MTT、RTCA、平板集落及迁移实验检测LIF对CRC细胞的影响;应用RT-qPCR和Western blot检测LIF对CRC肿瘤球细胞干性相关标志物CD44和转录因子ELF3表达的影响;应用RT-qPCR检测敲减LIF后CD44剪接变异体的表达变化。结果:CRC组织中LIF的表达水平高于癌旁组织(P<0.01),且LIF高表达的CRC患者无病生存期缩短(P<0.05),外源性LIF可增强CRC细胞的成球、增殖和迁移能力(P<0.05),敲减LIF可抑制CRC细胞的增殖和迁移(P<0.05)。外源性LIF可上调CRC肿瘤球细胞CD44的表达(P<0.05),而敲减LIF可抑制CD44的表达(P<0.01),同时CD44剪接变异体的转录水平降低。外源性添加LIF和敲减LIF可分别增强和降低转录因子ELF3的表达水平(P<0.05)。结论:LIF通过上调转录因子ELF3,增强CRC细胞CD44的表达,进而增强CRC细胞的干性特征,促进CRC细胞的恶性进展。

结直肠成纤维细胞通过激活ERK信号通路促进结直肠癌细胞的恶性生物学行为

目的探究人结直肠成纤维细胞(CCD18-Co)条件培养基对结直肠癌(CRC)细胞恶性进展的影响,为CRC治疗提供思路。方法利用RTCA、克隆形成和创伤愈合实验测定CRC细胞增殖、克隆形成和迁移能力;Western blotting检测CCD18-Co-CM激活的CRC细胞ATK、ERK和STAT3信号通路,同时检测相应信号通路阻断后CRC细胞增殖、克隆形成和迁移能力;肿瘤球形成实验检测CCD18-Co-CM对CRC细胞成球能力的影响;RT-PCR方法检测CRC细胞干性标志物的表达情况。结果CCD-18Co-CM能够促进CRC细胞的增殖、克隆形成和迁移能力(P<0.05)。CCD-18Co-CM能够增强CRC细胞的成球能力及干性标志物的表达(P<0.05)。CCD-18Co-CM能够激活CRC细胞ERK信号通路(P<0.05),ERK信号通路抑制剂SCH772984能够降低CRC细胞增殖、克隆形成和迁移能力及成球能力和干性标志物的表达(P<0.05)。结论人正常结直肠成纤维细胞可通过激活ERK通路促进CRC细胞的恶性进展。

TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白体内抗肿瘤效果研究

目的:研究TCRγ9/δ2(OT3)-Fc融合蛋白在体内抗肿瘤效果。方法:通过同位素99mTc标记技术观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内的显像和分布,观察TCRγ9/δ2(OT3)-Fc对荷瘤裸鼠肿瘤生长和生存期的影响。结果:在荷瘤裸鼠体内99mTc-TCRγ9/δ2(OT3)-Fc与肿瘤组织有明显的结合,并且其可抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长速度,延长小鼠生存期。结论:本研究初步证实TCRγ9/δ2(OT3)-Fc在荷瘤裸鼠体内有一定的抗肿瘤效果,为肿瘤靶向性抗体治疗提供了新的思路。

异甘草素对体外肺纤维化模型的作用及其机制

目的观察异甘草素(ISL)对转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))诱导人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞所构建的体外肺纤维化模型的影响,探讨其作用机制。方法TGF-β_(1)刺激A549细胞发生上皮-间质转化(EMT)构建体外肺纤维化模型;加入ISL干预后,噻唑蓝(MTT)法检测TGF-β_(1)刺激A549细胞后,ISL对细胞增殖活性的影响;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测EMT相关E-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN及其相关转录因子Snail、Slug、Twist、ZEB1、ZEB2 mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN及MAPK/Erk信号通路中Erk1/2磷酸化蛋白的表达水平。结果TGF-β_(1)可使A549细胞形态由上皮细胞向成纤维细胞转变,细胞增殖及迁移能力增强(P<0.05或P<0.01);上皮细胞标志物E-cadherin表达降低,间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN表达升高;EMT相关转录因子及磷酸化Erk1/2表达升高(P<0.05或P<0.01)。而经ISL处理后,ISL能有效抑制TGF-β_(1)诱导的A549细胞的增殖、迁移及细胞形态变化(P<0.05或P<0.01);提高E-cadherin,降低N-cadherin、Vimentin、α-SMA、FN、EMT相关转录因子及磷酸化Erk1/2的表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论ISL通过干预MAPK/Erk信号通路,抑制TGF-β_(1)诱导的A549细胞的EMT过程,维护细胞上皮样形态,减少肺成纤维细胞的产生,有望成为治疗肺纤维化的一种潜在药物。

OCCLUDIN对非小细胞肺癌SPC-A1细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨OCCLUDIN对非小细胞肺癌细胞SPC-A1增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法培养非小细胞肺癌细胞SPC-A1,通过siRNA转染干扰OCCLUDIN表达,实验中分为空白对照组(control组)、空转组(siCtrl组)和siRNA转染组(siOCLN组)。采用CCK-8、流式细胞术和Westernblot检测OCCLUDIN对SPC-A1细胞增殖和细胞凋亡的影响。结果siOCLN组细胞在24、48、72、96和120h的增殖能力较control组和siCtrl组均明显降低(P<0.05)。siOCLN组细胞凋亡率高于control组和siCtrl组(P<0.05);siOCLN组Bax、caspase-3、caspase-9、AIF和CytC等凋亡相关蛋白水平较control组和siCtrl组表达明显升高(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2水平较control组和siCtrl组表达明显下降(P<0.05)。同时,siOCLN组AKT和PI3K蛋白磷酸化水平较control组和siCtrl组明显降低(P<0.05)。结论OCCLUDIN可能通过调控PI3K/AKT信号通路促进SPC-A1细胞的增殖和抑制凋亡。

HMGB1基因多态性与肺结核易感性的关系

目的探讨湖北地区HMGB1基因多态性位点与肺结核易感性的关系。方法采用PCR产物直接测序法,对278例肺结核患者(结核病组)和225例健康对照者的HMGB1基因的3个SNP位点(rs1045411、rs2249825和rs1412125)多态性进行分析,并分析HMGB1各位点等位基因、基因型和单体型与肺结核易感性的相关性。结果HMGB1基因各位点等位基因与基因型在结核组和对照组中的分布差异均无统计学意义(均P>0.05),且各位点在超显性、显性、隐性3种遗传模式下与肺结核易感性相关性无统计学意义(均P>0.05)。HMGB1基因位点rs1045411-rs2249825-rs1412125单体型ACC与增加结核病风险存在强关联(OR=2.044,95%CI:1.220~3.425,P<0.01)。结论HMGB1基因ACC单体型可能与中国湖北地区汉族人群肺结核易感性显著相关。

结直肠癌细胞通过激活成纤维细胞的ERK通路诱导癌症相关成纤维细胞的形成

目的探究结直肠癌(CRC)细胞(HCT116、Caco-2)条件培养基促进癌症相关成纤维细胞(CAFs)形成的机制,为CRC治疗提供新的思路。方法将对数生长期的人正常结直肠成纤维细胞(CCD-18Co)分为对照组、HCT116细胞条件培养基处理组(HCT116-CM组)、Caco-2细胞条件培养基处理组(Caco-2-CM组)、300 nmol/L ERK抑制剂SCH772984组(iERK组)、HCT116-CM联合ERK抑制剂组(HCT116-CM+iERK组)、Caco-2-CM联合ERK抑制剂组(Caco-2-CM+iERK组)。采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测CAFs相关分子标志物表达水平;利用RTCA、克隆形成和创伤愈合实验测定细胞增殖、克隆形成和迁移能力;Western blot检测HCT116-CM和Caco-2-CM激活的成纤维细胞信号通路,同时检测相应信号通路阻断后CAFs形成情况。结果HCT116-CM和Caco-2-CM可上调CCD-18Co中CAFs标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白(FAP)、纤连蛋白(FN)和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达水平并促进成纤维细胞向CAFs转化(P<0.05)。HCT116-CM和Caco-2-CM促进CCD-18Co细胞的增殖、克隆形成和迁移(P<0.05)。HCT116-CM和Caco-2-CM增强CCD-18Co细胞中α-SMA蛋白的表达和ERK磷酸化修饰水平(P<0.05),ERK抑制剂SCH772984可抑制α-SMA的表达并抑制CRC细胞条件培养基的促CAFs形成作用(P<0.05)。结论CRC细胞可通过激活成纤维细胞的ERK通路诱导CRC相关CAFs的形成。

睾酮对结核分枝杆菌感染的RAW264.7细胞自噬的影响

目的探讨睾酮对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染的鼠源巨噬细胞RAW264.7细胞自噬的影响及其分子机制。方法MTB感染RAW264.7细胞24h后,给予10-8mol/L睾酮处理24h;采用透射电镜观察细胞自噬情况,Westernblot法检测细胞自噬相关蛋白以及MAPKs信号通路蛋白。结果睾酮干预MTB感染的RAW264.7细胞后自噬体、自噬特异标志物LC3Ⅱ均明显增加(P<0.01),通路蛋白JNK磷酸化水平明显上调(P<0.001)。结论睾酮可能通过激活JNK信号通路诱导MTB感染的RAW264.7细胞自噬。

基础医学学科群课程思政体系的构建与实践

湖北医药学院从医学教育整体考虑,依据课程思政的整体要求与标准,以基础医学学科群为切入点,重塑"三维度"基础医学课程思政目标,建设了"六视角"同质化与个性化相统一的课程思政元素库,搭建了专业课程内容与课程思政"四线、四结"整合衔接的立体化实现途径,实现了"五育融合"整合式课程思政育人目标。课程思政体系建设取得了较好的效果,2019—2021学年调研结果显示,超过90%的学生对该体系表示认可和接受,超过70%的学生认为该体系对专业课程学习具有促进作用。基础医学学科群课程思政体系的实施是对在医学专业课程中开展课程思政教育的有效探索,可以为医学院校的课程思政建设提供参考。

可溶性丙型肝炎病毒E2糖蛋白抑制人活化CD4^+T细胞的促炎细胞因子分泌

目的探索可溶性丙型肝炎病毒(HCV)E2糖蛋白对人活化CD4^+T细胞的免疫调节作用。方法真核表达质粒pcDNA3.1-HCV sE2转染HEK293T细胞,细胞培养上清经Ni-NTA树酯亲和层析纯化可溶性HCV E2蛋白。应用流式细胞术分选健康捐献者外周血CD4^+T细胞,经1.0μg/mL小鼠抗人CD3单克隆抗体、1.0μg/mL小鼠抗人CD28单克隆抗体刺激培养48 h。刺激后的CD4^+T细胞分成空白对照组、(2、5、10)μg/mL HCV E2蛋白组,后者经HCV E2糖蛋白处理。培养36 h后,流式细胞术检测CD4^+T细胞程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达变化,ELISA检测细胞培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的水平。结果与空白对照组比较,HCV E2蛋白组CD4^+T细胞PD-1表达轻微降低,但差异无统计学意义。与空白对照组比较,可溶性E2蛋白组CD4+T细胞分泌TNF-α水平明显降低,并呈剂量依赖性;可溶性E2蛋白组CD4^+T细胞分泌IFN-γ水平明显降低,但高低剂量组无明显差异。结论可溶性HCV E2蛋白抑制人活化CD4^+T细胞促炎细胞因子的分泌。

IRGM基因多态性与尘肺易感性研究

目的探讨免疫相关鸟苷三磷酸酶M(IRGM)基因多态性与尘肺易感性的关系。方法采用病例–对照的研究方法,选择248例尘肺患者为病例组,275例年龄相近、同性别、同民族、同工种且工龄相近的非尘肺接尘工人为对照组。采用Sanger测序法检测病例组和对照组中IRGM基因三个单核苷酸多态性(SNP)位点的基因型和等位基因。应用SNPstats软件分析单个SNP和尘肺的相关性,应用在线软件SHEsis进行各个位点的连锁不平衡分析和单体型分析。结果IRGM基因rs4958846位点的TT基因型在病例组的分布频率高于对照组,TC与CC基因型在对照组中的分布频率高于病例组,等位基因T在病例组的分布频率高于对照组,等位基因C在对照组的分布频率高于病例组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。IRGM基因rs4958842、rs4958843位点的基因型和等位基因在病例组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。经连锁不平衡检验,IRGM的rs4958842、rs4958843、rs4958846三个基因两两位点之间均存在连锁不平衡(D’>0.7,r2>0.3)。对三个基因位点进行单体型分析,共构建4种单体型,其中ACT和ACC单体型在病例组和对照组中的频率分布差异具有统计学意义(P<0.05),所构建的其他单体型与尘肺的易感性无显著关联(P>0.05)。结论IRGM基因rs4958846位点的T等位基因和ACT单体型可能与尘肺的易感性有关。

TRIM28在肺癌中的表达及预后价值分析

目的:探讨TRIM28在肺癌中的表达情况,与肺癌临床病理特征的关系,评估其在肺癌中的预后价值。方法:下载美国国立生物信息技术中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)的肺癌样本数据集GSE30219,对表达谱资料及临床信息进行分析。结果:TRIM28在肺癌组织中高表达,在高TNM分期肿瘤中高表达(P均<0.01)。在不同性别、AJCC T分期、有无区域淋巴结转移、远处转移、复发的肺癌患者中,TRIM28的表达均有显著性差异(P均<0.05)。TRIM28高表达与肺癌患者(HR=1.49,95%CI=1.31~1.69,P<0.01)、肺腺癌患者(HR=2.12,95%CI=1.66~2.7,P<0.01)、不吸烟患者(HR=3.56,95%CI=1.89~6.72,P<0.01)和吸烟患者(HR=1.26,95%CI=1.02~1.55,P<0.05)的预后不良相关,还可作为临床Ⅰ期(HR=2.4,95%CI=1.81~3.2,P<0.01)、Ⅱ期(HR=1.6,95%CI=1.11~2.32,P<0.05)和化疗(HR=1.66,95%CI=1.11~2.49,P<0.05)患者预后的危险因素。结论:TRIM28高表达与肺癌多个临床病理指标和患者预后不良相关,可以作为潜在的判断肺癌患者预后的标志物和肿瘤治疗的靶点。

YAP过表达稳定细胞系的建立及与结肠癌细胞增殖的关系

目的:研究YAP对结肠癌细胞增殖的影响。方法:利用四质粒慢病毒感染系统建立过表达YAP稳定细胞系,通过细胞计数和克隆形成检测过表达YAP对结肠癌细胞增殖的影响。结果:过表达YAP稳定细胞系中,YAP的mRNA和蛋白水平明显增加;过表达YAP能促进结肠癌细胞增殖。结论:本研究初步证实YAP能促进细胞的增殖,为结肠癌的治疗提供了新的方向。

IL-4和TGF-β通过调控TFEB表达和溶酶体定位调节Mφ杀菌功能

目的:探讨IL-4和TGF-β对Mφ溶酶体功能和定位的影响及可能机制。方法:骨髓细胞经M-CSF刺激培养成骨髓来源巨噬细胞(Bone marrow-derived macrophages, BMDMs)。分别使用PBS、IL-4、TGF-β或TGF-β+IL-4刺激BMDMs,流式细胞仪检测BMDMs溶酶体降解DQ-OVA的功能;激光共聚焦检测溶酶体胞内分布;免疫印迹和免疫荧光检测溶酶体关键转录因子TFEB的表达和活化;庆大霉素保护实验检测BMDMs杀伤细菌的功能。结果:与对照组比较,IL-4增强溶酶体降解DQ-OVA的功能;促进溶酶体向核周分布;上调TFEB的表达和活化;并且增强巨噬细胞杀菌功能。而与对照组比较,TGF-β抑制溶酶体降解DQ-OVA的功能;阻止其核周分布;下调TFEB表达和活化;并且抑制其杀菌功能。结论:IL-4和TGF-β通过调控TFEB表达和溶酶体定位调节Mφ杀菌功能。

维生素D受体基因多态性与煤工尘肺易感性关系的研究

目的:探讨湖北地区维生素D受体(VDR)基因多态性位点与煤工尘肺(CWP)易感性的关系。方法:采用PCR产物直接测序法,对340例CWP患者(CWP组)和312例对照者的VDR基因的4个SNP位点(FokⅠ、BsmⅠ、ApaⅠ和TaqⅠ)的多态性进行分析,并分析VDR各位点等位基因、基因型和单体型与CWP易感性的相关性。结果:VDR基因各位点等位基因与基因型在CWP组和对照组中的分布差异均无统计学意义(均P>0.05),且各位点在超显性、显性、隐性三种遗传模式下与CWP易感性相关性无统计学意义(均P>0.05)。VDR基因位点FokⅠ-BsmⅠ-ApaⅠ-TaqⅠ单体型TAGT与降低CWP风险存在强关联(OR=0.158,95%CI=0.046~0.541,P<0.01)。结论:VDR基因TAGT单体型可能与中国湖北地区汉族人群CWP易感性显著相关。

EV71感染SK-N-SH细胞相关基因的鉴定

目的:鉴定肠道病毒EV71型感染SK-N-SH细胞相关基因的改变。方法:EV71感染SK-N-SH细胞后,收集细胞做基因微阵列分析,并对差异表达的基因进行Real-time PCR和ELISA鉴定。结果:共有86个基因mRNA的转录表达改变。上调表达的基因涉及细胞因子、趋化因子、泛素蛋白以及Toll样受体信号途径、P53信号途径、凋亡途径、白细胞穿越内皮细胞、MASP信号途径和Jak-STAT信号途径等相关基因。Real-time PCR和ELISA验证了差异显著基因的高表达。结论:本研究结果提示EV71感染后的高致死率可能与一系列释放细胞因子和趋化因子的免疫反应有关,对更好地理解感染EV71病毒后机体的免疫反应提供了参考,并提供了阻断和控制EV71感染潜在的治疗策略。