红景天甙防治兔肝移植术后疲劳综合征的实验研究

目的研究红景天甙降低兔肝移植术后疲劳综合征的机制。方法日本大耳白兔30只,采用随机数表法分为假手术组、模型组、红景天甙组,每组各10只,采用小肠切除-吻合术模拟术后疲劳综合征动物模型,造模10 d后进行1/2减体积原位肝脏移植手术,术后红景天甙组经尾静脉注射红景天甙治疗7 d。比较三组兔外周血传出神经递质5-羟色胺(5-HT)、垂体生长素(GH),大脑皮层电位及肝功能谷草转氨酶(AST)、胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)水平。结果模型组造模10 d及治疗7 d时5-HT[(9.93±0.22)ng/m L vs(16.23±0.52)ng/mL]、AST[(504.7±37.9)U/L vs(554.3±32.9)U/L]、TBIL[(54.87±3.21)μmol/L vs(76.87±4.22)μmol/L]、ALT[(181.6±18.3)U/L vs(312.3±34.5)U/L]明显升高,GH[(0.71±0.03)pg/m L vs(0.53±0.05)pg/mL]明显降低,大脑皮层放电[(459.23±48.08)m V vs(513.03±50.28)m V]逐渐增强,与本组造模前及假手术组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。红景天甙组造模10 d时5-HT[(10.72±0.31)ng/mL]、AST[(484.7±20.1)U/L]、TBIL[(55.21±5.21)μmol/L]、ALT(186.2±19.2)U/L]明显升高,GH[(0.75±0.02)pg/mL]明显降低,大脑皮层放电[(451.71±45.58)m V]逐渐增强,与假手术组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗7 d时,红景天甙组兔5-HT[(10.21±0.31)ng/mL]、大脑皮层电位[(321.12±38.24)m V]、肝功能AST[(194.3±22.1)U/L]、TBIL[(24.07±1.25)μmol/L]、ALT[(112.2±23.1)U/L]明显降低,GH[(2.67±0.11)pg/mL]明显增高,与造模10 d及模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论红景天甙可降低兔肝脏移植术后疲劳综合征。

机能实验教学中存在的实验动物伦理问题及解决办法

目的调查医学实验及实验教学中的实验动物伦理观及存在的问题,并制定应对措施,使动物伦理和动物福利在医学实验中得以真正地体现。方法本研究针对实验动物伦理认知情况、动物实验是否道德和如何看待动物伦理与实验教学问题,以及虚拟仿真实验教学认知情况等3个方面,制定了含25条问题的“基础机能实验中心动物实验问卷调查表”。采用发放问卷调查表的方式对湖北医药学院2017级留学生(五年制)、2017级五年制本科生和2018级护理(四年制)学生及教师、科研人员及实验动物中心从业人员(均具有本科及以上学历)进行调查。调查结果以百分比表示。结果本研究调查表回收率为98.04%(2451/2500)。其中实验动物中心从业人员、教师及科研人员实验动物伦理观清晰明了,但学生中普遍存在伦理观滞后现象。有16.24%(398/2451)的学生未接受过动物实验伦理教育和培训,29.46%(722/2451)的不清楚动物保护相关法律法规,7.14%(175/2451)的认为动物实验不道德。对动物福利及伦理知识的认知情况模糊占比29.54%(724/2451)。不熟悉操作步骤的占25.91%(635/2451)。操作失误导致动物额外受伤中,无所谓的占9.38%(230/2451);动物大出血后如何处理中,选择放弃实验的占7.83%(192/2451),及时止血并输液后继续实验仅占5.43%(133/2451),而是否做与本次实验无关操作的占9.26%(227/2451)。在实验结束后采用放血处死动物的占2.28%(56/2451)、只有5.51%(135/2451)的学生选择过量麻醉安乐死,且仍有1.96%(48/2451)选择颈椎脱臼、暴力处死。对动物尸体时选择缅怀2 min的仅占15.79%(387/2451)。仅有32.56%(798/2451)的被调查者了解虚拟仿真实验,34.92%(856/2451)的被调查者认为可以应用虚拟仿真实验或实验教学录像代替现有活体动物实验,77.56%(1901/2451)的被调查者认为应该加强虚拟仿真实验室建设。结论加强学生实验动物伦理观教育势在必行,这有利于医学生建立正确的实验动物伦理观,使“3R”原则和动物福利得以真正落实于实验教学和科研实验中。

线粒体活性对人类精子活动力的影响

目的:分析线粒体活性对人类精子活动力的影响。方法:以线粒体特异性荧光染料--mitotracker deep red 633(MTDR对不同活力的精子进行染色,然后用流式细胞术测定精子线粒体活性(即MTDR荧光强度值)。用雷帕霉素(rapamycin,RP)和羟氯喹(hydroxychloroquineon,HCQ)调控精子活性水平,测定精子活动力的变化。结果:MTDR荧光强度值与前向运动速率(progressive motility,PR)不相关(r=0.182,P=0.268)。5 nmol/L和100 nmol/L的RP均可明显降低线粒体活性,50μmol/L HCQ可明显提高线粒体活性(P<0.05),但它们对精子活动力影响都不明显(P>0.05)。结论:线粒体活性对人类精子活力影响不明显。

淫羊藿素对KG-1a细胞增殖和凋亡的影响及其相关作用机制

目的:分析淫羊藿素抑制Wnt/β-catenin信号通路干预急性髓系白血病KG-1a细胞增殖的可能机制,为开发治疗急性髓系白血病药物提供实验依据。方法:50只c57BL/6小鼠编号后随机分为空白对照、模型对照和淫羊藿素高、中、低剂量共5组(n=10只),除空白对照组外均采用腹腔注射人急性髓系白血病细胞KG-1a的方法建模。淫羊藿素高、中、低剂量组分别按80、40和20 mg/kg剂量肌肉注射淫羊藿素治疗3周,模型对照组和空白对照组肌肉注射生理盐水。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测S期激酶相关蛋白2(SKP2)、β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及多聚腺素二磷酸核糖多聚酶[poly(ADP-ribose)polymerase;PARP]蛋白表达;采用分光光度法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和天冬酶-3酶原(Procaspase-3)活性;流式细胞术分别检测经淫羊藿素处理后的细胞周期时相分布和细胞凋亡率情况。结果:淫羊藿素可增强Caspase-3活性,降低Procaspase-3的水平,还可上调E-cadherin蛋白的表达,下调SKP2和β-catenin蛋白的表达,呈剂量依赖性增加PARP蛋白表达,经淫羊藿素处理后细胞凋亡明显,KG-1a细胞被阻滞于G_0/G_1期,KG-1a细胞生长明显受到抑制。结论:淫羊藿素能够剂量依赖性地裂解PARP,以诱导人急性髓系白血病细胞株KG-1a细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及其下游相关基因表达有关。

淫羊藿苷对前列腺癌原位移植瘤模型小鼠雄激素受体信号通路的影响

目的:探讨淫羊藿苷对前列腺癌原位移植瘤模型SCID小鼠雄激素受体信号通路的影响机制。方法:雄性SCID小鼠64只,均采用前列腺腺体背外侧包膜内注射人前列腺癌细胞株(LNCaP)悬液的方法构建前列腺癌原位移植瘤模型,然后分为移植瘤组、10 mg·kg^-1组、40 mg·kg^-1组和80 mg·kg^-1组,除移植瘤组灌生理盐水对照外其它3组灌胃给予相应剂量的淫羊藿苷治疗5周。采用western blotting检测前列腺癌特异性抗原(PSA)和磷酸化AR(p-AR)表达,采用RT-PCR检测治疗前后前列腺瘤体雄激素受体(AR)和张力蛋白同源第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)表达,采用流式细胞学方法检测前列腺体肿瘤瘤体LNCaP前列腺癌细胞在肿瘤瘤体增殖周期。结果:40mg·kg^-1组和80 mg·kg^-1组治疗后AR mRNA为(0.25±0.02,0.27±0.03)、pAR为(1.45±0.22,1.64±0.24),PSA为(0.31±0.02,0.38±0.05),两组PSA、p-AR和AR mRN治疗后相对表达量均低表达,而PTEN mRNA高表达(0.91±0.07,0.95±0.09),与治疗前和移植瘤组比较差异均有统计学意义(P <0.05)。两组治疗后抑瘤率分别为(41.59±4.51)%和(42.76±5.13)%,瘤质量为(86.34±9.07,84.73±7.58)mg、瘤体积为(11.83±0. 84,10.27±1.14)mm^2,均较同组治疗前和移植瘤组比较明显降低(P <0.05);两组治疗后G0/G1期比例降低[两组G0/G1分别为(34.97±4.52,35.03±3.97)%、且S期比例明显提高[两组S期比例分别为(39.59±5.03,40.27±4.82)%],与同组治疗前和移植瘤组比较差异均均有统计学意义(P <0.05)。结论:淫羊藿苷抑制LNCaP增殖的机制应与其抑制雄激素受体信号通路中AR的磷酸化并增强PTEN表达而将癌细胞增阻滞于S期有关。

侧脑室注射鼠神经生长因子对阿尔茨海默病转基因模型小鼠学习能力及行为学的影响

目的探讨鼠神经生长因子(mNGF)侧脑室注射影响阿尔茨海默病(AD)转基因模型小鼠学习记忆能力及行为学的可能机制。方法将20只老年痴呆转基因小鼠(C57BL/6J)采用随机数字表法分为AD转基因模型组(AD组)和实验组,每组10只小鼠,另取老年正常C57BL/6J小鼠10只设为老年组。AD组和实验组分3次(间隔10 d)侧脑室注射mNGF,老年组注射等量0.9%氯化钠注射液。用Morris水迷宫视频跟踪分析系统进行空间探索实验;采用全细胞膜片钳记录海马CA1区诱发的群峰电位(PS)和自发性动作电位(AP);采用免疫组化法检测小鼠海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达水平;实时定量聚合酶链式反应检测海马CA1区中BDNF mRNA和NGF mRNA水平。结果治疗第40天,实验组小鼠脑薄片海马回CA1区BDNF[(100.51±2.27) ng/mL]和NGF[(159.85±1.23) ng/mL]蛋白阳性表达及BDNF mRNA[(72.02±0.98)β-actin]、NGF mRNA[(67.08±1.16)β-actin]明显升高,PS[(63.02±1.25) mV]和AP[(58.57±0.93) mV]膜电位降低,三组间的治疗前和第40天比较均差异有统计学意义(均P<0.05)。实验组小鼠跨越平台次数(4.29±0.64)明显高于AD组和治疗前同组[(2.85±0.12),(2.68±0.24)](F=49.815,232.391,P<0.05),实验组逃避潜伏期[(21.73±0.54)s]较AD组[(68.59±2.01)s]明显缩短,与AD组和治疗前同组比差异有统计学意义(F=2 910.165,3 137.281,P<0.05)。老年组运动轨迹主要在原平台位置,AD组则主要分散在外周,而实验组运动轨迹在两者之间。结论鼠神经生长因子能促进AD转基因模型小鼠学习记忆能力,其作用机制可能与mNGF稳定海马CA1区膜电位,上调BDNF和NGF蛋白及其基因表达以营养和修复神经有关。

正清风痛宁对大鼠骨质疏松性椎体骨折的影响

目的:观察正清风痛宁注射液穴位注射对大鼠骨质疏松性椎体骨折的影响。方法:用随机数字表将40只雌性SD大鼠编号后随机分为假手术组、模型组、0.5 mg组和2 mg组,采用手术摘除双侧卵巢以建立大鼠骨质疏模型,术后2个月再剪断L3椎体前缘建立大鼠骨质疏松性椎体骨折模型。成模后0.5 mg组和2 mg组分别于L3夹脊穴注射正清风痛宁注射液治疗4周,模型组和假手术组给予等体积生理盐。采用机械触诱发痛和自发痛观察疼痛行为学改变。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测脑脊液八肽胆囊收缩素(CCK-8)、6-酮-前列腺素E1α(6-keto-PGE1α)、一氧化氮(NO)及神经元型一氧化氮合酶(n NOS)含量。采用骨定量超声诊断技术检测骨折腰椎骨定量振幅衰减(BUA)及骨密度(BMD)。结果:与模型组比,2 mg组抬腿次数和抬腿持续时间降低,大鼠4周后足缩足阈值均值明显提高,1、2、3、4周机械缩足阈值(MWT)逐步提高,且脑脊液中n Nos、NO、CCK-8和6-keto-PGE1α明显低于模型组(P<0.05);骨定量超声显示BUA及BMD均明显高于模型组(P<0.05)。结论:正清风痛宁穴位注射可增加骨质疏松性椎体骨折大鼠下丘脑n NOS分泌、抑制6-keto-PGE1α和NO合成、降低CCK-8和6-keto-PGE1α而产生中枢镇痛作用,并可促进大鼠骨质疏松性椎体骨折愈合。

鹿瓜多肽穴位注射治疗兔椎体骨折

目的:观察注射用鹿瓜多肽穴位注射对兔L1–L5节段椎体骨折愈合过程中骨折椎体血管内皮生长因子(VEGF)表达及椎间盘二聚糖的影响。方法:48只新西兰兔采用随机数字表随机分为空白对照组、模型组、鹿瓜多肽小/大剂量组,除空白对照组外,另3组动物均采用手术方法造成兔L1–L5节段椎体骨折,术后14 d鹿瓜多肽小/大剂量组分别于L1–L5节段椎体夹脊穴,配合血海、足三里、阳陵泉穴位注射鹿瓜多肽,治疗21 d,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水。采用免疫组化染色测定兔L1–L5节段骨折椎体VEGF阳性表达率,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测VEGF mRNA表达,图像分析法测骨密度,免疫荧光法测定兔L1–L5节段腰椎间盘组织二聚糖。结果:与空白对照组比较,模型组经21d治疗,L1–L5节段骨折椎体VEGF为(52.67±5.28)pg/mL、VEGF mRNA为0.58±0.08,两者较空白对照组升高(P<0.05);而椎间盘二聚糖光密度为0.080±0.011、骨密度为(0.935±0.090)g/cm2,均较空白对照组降低(P<0.05)。X线示模型组骨折椎体未愈合。鹿瓜多肽小/大剂量组经21 d治疗,L1–L5节段骨折椎体VEGF阳性表达率分别为(81.90±7.67)%、(83.53±7.86)%,VEGF mRNA分别为(0.99±0.10)、(1.04±0.13),VEGF和VEGF mRNA较模型组表达明显升高(P<0.05),而二聚糖光密度(分别为0.148±0.010、0.137±0.012)及骨密度[分别为(1.851±0.093)、(1.916±0.075) g/cm2]均显著升高(P<0.05),但鹿瓜多肽小/大剂量组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。X线示鹿瓜多肽小/大剂量组骨折椎体基本愈合。结论:注射用鹿瓜多肽穴位注射可促进兔椎体骨折愈合过程中VEGF的合成分泌,促使骨折椎体血管内皮新生,提高椎间盘二聚糖黏附细胞数量,对骨折椎体骨痂形成及维持椎间盘组织的稳定具有明显的促进作用。

藻蓝蛋白对缺血/再灌注大鼠心肌能量代谢及心功能的影响

目的:观察藻蓝蛋白对缺血/再灌注大鼠心肌能量代谢及心功能的影响。方法:将30只SD大鼠均分为对照组、缺血组和藻蓝蛋白组,每组10只。除对照组外均建立心肌缺血/再灌注损伤模型。术后待动物清醒后,藻蓝蛋白组灌胃给予藻蓝蛋白治疗2周,对照组、缺血组灌胃给予等体积0.9%氯化钠溶液对照。治疗结束后采用右心室内插入心导管的方法记录心功能并监测Ⅱ导联心电图ST段回落百分比(sumSTR),PR间期及QRS波时限;然后取心脏,采用比色法检测心肌组织Ca^2+/Mg^2+-ATP酶和Na^+/K^+-ATP酶活力,采用BI-2000医学图像分析系统计算各组心肌梗死面积(myocardial infarct size,MIS),比较缺血组和藻蓝蛋白组动物死亡率(mortality rate,MR),藉此分析藻蓝蛋白影响缺血/再灌注大鼠心肌能量代谢及心功能的可能机制。结果:藻蓝蛋白组PR间期和QRS波时限延长,sumSTR回落分布显著优于缺血组(P<0.05),心肌组织Ca^2+/Mg^2+-ATP酶、Na^+/K^+-ATP酶活力、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室内压力峰值(left ventricular pressure peak,LVSP)和等容收缩期左心室内压力上升最大速率(+dp/dtmax)均升高,MIS减小、等容收缩期左心室内压力下降最大速率(-dp/dtmax)和MR均降低,与缺血组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:藻蓝蛋白可能通过提高ATP酶活力这一途径来增强心肌能量代谢,从而改善缺血/再灌注大鼠心功能。

藻蓝蛋白降低大鼠心肌缺血-再灌注损伤的机制研究

目的观察藻蓝蛋白对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响并分析可能机制。方法选取大鼠36只,用随机数字表法均分为空白对照组、模型组和治疗组。模型组和治疗组采用反复3次丝线结扎、复灌左冠状动脉前降支45 min的方法建模。建模后治疗组用10%藻蓝蛋白混悬液以200 mg/(kg·d)分2次灌胃治疗7 d,空白对照组和模型组用等体积生理盐水灌胃。采用图像分析法检测大鼠冠状动脉细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p27、p21表达;采用免疫组织化学染色后检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS);酶联免疫吸附法检测大鼠心室内动脉血清超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)。结果治疗组大鼠冠状动脉细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p27、p21高表达,iNOS阳性细胞及SOD、NO水平升高,CK-MB、MDA水平均明显降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论藻蓝蛋白具有抑制心肌缺血-再灌注损伤的效应。

丹参滴丸降低大鼠急性心肌梗死早期心肌易损性

目的观察丹参滴丸对急性心肌梗死模型大鼠离体心脏早期心肌易损性的影响。方法采用随机、对照、盲法原则,将60只SD大鼠分为对照组、模型组、维拉帕米组、丹参滴丸组(A组)、维拉帕米+丹参滴丸组(B组,先给予维拉帕米再给予丹参滴丸)、丹参滴丸+维拉帕米组(C组,先给予丹参滴丸再给予维拉帕米),每组10只。除对照组外,均经尾静脉注射垂体后叶素(15 U/kg)诱发大鼠急性心肌梗死模型。采用原子吸收光谱法检测心肌组织间液中钙离子(Ca^(2+))浓度;记录程序性电刺激诱发的有效不应期(ERP)、心室易损期(VVP)时程、心室颤动阈值(VFT)和心室颤动(VF)发生率。结果A、B、C组VVP时程明显缩短、ERP时程延长、VF降低、VFT和Ca^(2+)升高,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);其中B组和C组Ca^(2+)、VFT和VF与维拉帕米组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丹参滴丸可能通过影响钙通道而降低急性心肌梗死模型大鼠早期心肌易损性。

藻蓝蛋白对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究藻蓝蛋白对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用随机数字表将48只SD大鼠随机分为假手术A组、假手术B组、模型组和藻蓝蛋白组(n=12)。假手术B组和藻蓝蛋白组用10%藻蓝蛋白混悬液[200 mg/(kg·d)]灌胃治疗1周,假手术A组和模型组灌等体积0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红染色后观察肺组织病理学改变,酶联免疫吸附法检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素6β(Interleukin-6β,IL-6β)含量;免疫组化染色后检测诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达及阳性细胞数。结果:藻蓝蛋白组肺组织外观正常,充血、膨胀现象基本消失,光镜下泡壁增厚和水肿程度较模型组明显减轻,但仍有少量炎性细胞浸润现象。藻蓝蛋白组IL-1β、IL-6β和MDA含量及i NOS阳性细胞数均显著降低、NO和SOD活性显著提高,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:藻蓝蛋白可能是通过抑制肺组织缺血-再灌注后促炎细胞因子IL-1β和IL-6β释放,减少炎性细胞在缺血肺组织聚集,并提高氧自由基清除酶SOD活性,降低i NOS来调节NO的合成,达到减轻肺损伤,对大鼠肺缺血再灌注损伤发挥保护作用。

FK506对肝细胞癌模型大鼠肝移植术后免疫调节的影响

目的:观察他克莫司(FK506)对大鼠肝细胞癌模型肝移植术术后免疫功能的影响。方法:雄性Lewis大鼠76只,DA大鼠48只。选取其中60只Lewis大鼠用二乙基亚硝胺灌胃构建肝癌模型,14周后将48只正常DA大鼠肝脏移植于造模后存活的48只肝癌模型大鼠,术后随机分为模型组,FK506高、中、低剂量组(n=12);另16只正常雄性Lewis大鼠作为正常对照组。术后FK506治疗组分别以1、0.5和0.25 mg/kg剂量灌胃4周,正常对照组和模型组给予0.9%氯化钠溶液。于治疗2周和4周时采用ELISA法分别检测外周血一氧化氮(nitric oxide,NO)及肝组织白介素-2β(Interleukin-2β,IL-2β)、IL-4β、IL-12β、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta,TGF-β1)及肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)水平;采用流式细胞仪检测Treg、CD4+T、CD8+T细胞数;RT-PCR方法检测肝脏诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因表达。结果:FK506中、高剂量组IL-2β、IL-4β、IL-12β、NO、IFN-γ、TGF-β1、TNF-α、CD4+T%、CD8+T%在治疗2周和4周时均明显降低,iNOS mRNA低表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗4周时与同组治疗2周时比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FK506对二乙基亚硝胺诱导肝细胞癌模型大鼠原位肝移植术后急性排异反应具有明显的抑制作用,这一作用主要是通过调节Treg类细胞因子及NO信号通路蛋白而实现。