芪苈强心通过p-Erk/Nrf2通路对心肌梗死小鼠细胞凋亡的影响

目的探讨芪苈强心通过p-Erk/Nrf2通路对心肌梗死小鼠细胞凋亡的影响。方法采用结扎左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型,小鼠随机分为假手术+生理盐水组、心肌梗死+生理盐水组、假手术+芪苈强心组(0.25 g/kg)、心肌梗死+芪苈强心组(0.25 g/kg)、心肌梗死+芪苈强心组(0.5 g/kg)、心肌梗死+芪苈强心组(0.75 g/kg),灌胃给药28 d。彩色多普勒超声诊断仪检测各组小鼠心功能;体外,通过CoCl2(600μmol/L)处理H9c2细胞12 h建立心肌细胞缺氧损伤模型,芪苈强心(0.25 mg/mL)及Erk抑制剂(PD98059,20μmol/L)预处理H9c2细胞24 h,Western blot检测小鼠心肌组织及H9c2细胞Erk、p-Erk、Nrf2、Bcl-2、Bax的表达。结果芪苈强心(0.25 g/kg)可改善心梗小鼠心功能,上调Bcl-2、p-Erk、Nrf2表达,下调Bax表达。体外实验结果与体内结果一致,同时Erk抑制剂处理能明显逆转芪苈强心的作用。结论芪苈强心可能通过激活p-Erk的表达,促进Nrf2表达,进而启动下游基因表达,从而缓解小鼠心梗后细胞凋亡。

黄芪皂苷在大鼠血管钙化中的作用及可能机制

目的在大鼠血管钙化模型上用黄芪皂苷注射液腹腔注射观察对血管钙化的影响,并探讨黄芪皂苷在血管钙化中的作用及可能机制。方法采用维生素D3和尼古丁制备大鼠血管钙化模型;运用von Kossa染色、原子吸收测定钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度;用生物化学方法测定血管一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量;原位缺口末端标记法检测血管平滑肌细胞凋亡。结果 VDN处理组大鼠血管vonKossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量棕黑色颗粒聚集;主动脉钙含量和ALP活性分别较对照高3.6和1.7倍(P<0.01),血管钙化后可加重血管组织氧化性损伤,增加血管平滑肌细胞凋亡;而诱导钙化后注射黄芪皂苷明显改善上述指标,减轻血管钙化程度和组织氧化损伤,平滑肌细胞凋亡数量明显减少。结论黄芪皂苷主要通过抑制血管平滑肌细胞氧化应激和细胞凋亡而减轻血管钙化。

星形胶质细胞分泌IL-1β激活NF-κB通路促进脑胶质瘤生长的机制研究

目的:探讨星形胶质细胞通过分泌IL-1β激活NF-κB通路促进脑胶质瘤生长的作用机制。方法:将星形胶质细胞和脑胶质瘤共培养,ELISA和Q-PCR分别检测星形胶质细胞中IL-1β的分泌和表达;CCK-8、Transwell及流式分别检测脑胶质瘤增殖、迁移和凋亡,蛋白免疫印迹检测NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:CCK-8、Tran⁃swell及流式结果分别显示星形胶质细胞可以促进脑胶质瘤增殖、迁移和抗凋亡,而抑制星形胶质细胞中IL-1β的表达能抑制脑胶质瘤增殖、迁移和抗凋亡;蛋白免疫印迹结果显示抑制星形胶质细胞中IL-1β的表达能抑制脑胶质瘤中NF-κB通路的激活。结论:星形胶质细胞通过分泌IL-1β激活NF-κB通路促进脑胶质瘤增殖、迁移和抗凋亡的能力从而促进脑胶质瘤的生长,此项研究为揭示脑胶质瘤的恶性进展机制提供新的思路。

养血清脑颗粒治疗血管性痴呆大鼠的实验研究

目的研究养血清脑颗粒对大鼠血管性痴呆的治疗机制。方法该研究起止时间为2019年2—6月。24只SD大鼠采用两血管阻断法制作血管性痴呆模型,以随机数字表法分为模型组和实验组,每组12只,另取12只未造模鼠设为对照组。实验组每日按20 mL·kg^(−1)·d^(−1)的剂量分2次用6.4%的养血清脑颗粒混悬液灌胃治疗3周,模型组和对照组灌等体积生理盐水对照。治疗结束后采用Morris水迷宫分析系统分析大鼠学习和记忆能力,用Zea Longa神经行为学评分评定治疗效果。然后处死大鼠,检测各组大鼠血清S100B蛋白(S100B)及脑海马CA1区5-羟色胺含量、血管内皮生长因子(VEGF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及β-连环素(β-catenin)的表达。结果对照组逃避潜伏期为[(41.24±3.49)s],跨越平台次数为[(6.05±0.27)次],Zea Longa评分为[(0.04±0.00)分],与对照组相比,模型组逃避潜伏期[(86.95±6.34)s]明显延长(P<0.05),跨越平台次数[(2.92±0.14)次]减少(P<0.05),Zea Longa评分[(3.84±0.31)分]明显提高(P<0.05);对照组血清S100B为[(2.41±0.21)mg/L]、脑海马CA1区GFAP蛋白为[(10.84±0.89)个/高倍视野]、脑海马CA1区5-羟色胺含量为[(0.74±0.09)µg/L],与对照组相比,模型组血清S100B[(5.29±0.37)mg/L]及脑海马CA1区GFAP蛋白[(35.53±2.18)个/高倍视野]表达均增多(P<0.05)、脑海马CA1区5-羟色胺含量[(0.51±0.05)µg/L]降低(P<0.05);对照组脑海马CA1区VEGF为[(150.59±7.53)mg/L]、β-catenin蛋白为[(9.97±1.09)个/高倍视野],与对照组相比,模型组脑海马CA1区VEGF[(151.82±7.35)mg/L]、β-catenin蛋白[(10.08±1.20)个/高倍视野]表达差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,实验组跨越平台次数[(5.75±0.39)次]增多(P<0.05)、逃避潜伏期[(42.57±3.20)s]缩短(P<0.05),Zea Longa评分[(1.91±0.21)分]、S100B[(2.85±0.34)mg/L]和GFAP蛋白[(21.45±1.49)个/高倍视野]明显降低(P<0.05),5-羟色胺含量[(0.74±0.09)µg/L]及CA1区VEGF[(193.25±16.34)mg/L]和β-catenin蛋白[(12.40±1.56)个/高倍视野]表达均增多(P<0.05)。结论养血清脑颗粒可能通过上调β-catenin蛋白、促进VEGF和5-羟色胺合成、降低GFAP、改善脑组织血流状态来发挥对血管性痴呆的治疗作用。

LPS对人牙髓干细胞增殖及骨向分化能力的影响

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对人牙髓干细胞(human Dental pulp Stem cells,h DPSCs)增殖及骨向分化的作用关系。方法:将第3代h DPSCs体外常规培养后,采用MTT法分别检测不同浓度LPS(0、1、10、100、1000 ng/mL)作用h DPSCs 72 h后细胞增殖情况,筛选出促进h DPSCs增殖的LPS最佳浓度。通过Western Blot法检测该浓度作用下h DPSCs中各矿化相关蛋白:碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、骨唾液酸蛋白(BSP)及牙本质涎磷蛋白(DSPP)的表达水平。结果:与对照组比较,1 ng/mL及10 ng/mL LPS干预组能明显促进h DPSCs的增殖(P<0.05),其中以10 ng/mL LPS作用更显著。Western Blot检测结果表明,10 ng/mL LPS可明显上调h DPSCs中各矿化相关蛋白的表达水平。结论:低浓度LPS可促进h DPSCs的增殖和骨向分化。

根尖屏障术结合牵引再植术在年轻恒切牙复杂冠根折中的临床疗效

目的:观察分析年轻恒切牙复杂冠根折经根尖屏障术结合外科牵引再植治疗后保存断冠的临床效果。方法:选取外伤致复杂冠根折的年轻恒切牙12颗,局麻下采用根尖屏障术封闭根尖区,经牙槽内移植的外科牵引牙根至所需位置,纤维桩和桩核树脂对断冠行内固位和树脂美容冠修复。结果:12例复杂冠根折外伤牙平均随访时间为1年;经治疗后1例出现牙根表面吸收,2例发生边缘骨丧失,2例发生断冠脱落,但所有病例并未见根尖周病变,牙松动、移位和根外吸收发生。结论:根尖屏障术结合外科牵引再植术可以作为处理年轻恒切牙复杂冠根折的一种相对简单有效的方法。

藻蓝蛋白对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究藻蓝蛋白对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用随机数字表将48只SD大鼠随机分为假手术A组、假手术B组、模型组和藻蓝蛋白组(n=12)。假手术B组和藻蓝蛋白组用10%藻蓝蛋白混悬液[200 mg/(kg·d)]灌胃治疗1周,假手术A组和模型组灌等体积0.9%氯化钠溶液。采用苏木精-伊红染色后观察肺组织病理学改变,酶联免疫吸附法检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素6β(Interleukin-6β,IL-6β)含量;免疫组化染色后检测诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达及阳性细胞数。结果:藻蓝蛋白组肺组织外观正常,充血、膨胀现象基本消失,光镜下泡壁增厚和水肿程度较模型组明显减轻,但仍有少量炎性细胞浸润现象。藻蓝蛋白组IL-1β、IL-6β和MDA含量及i NOS阳性细胞数均显著降低、NO和SOD活性显著提高,与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:藻蓝蛋白可能是通过抑制肺组织缺血-再灌注后促炎细胞因子IL-1β和IL-6β释放,减少炎性细胞在缺血肺组织聚集,并提高氧自由基清除酶SOD活性,降低i NOS来调节NO的合成,达到减轻肺损伤,对大鼠肺缺血再灌注损伤发挥保护作用。

FK506对肝细胞癌模型大鼠肝移植术后免疫调节的影响

目的:观察他克莫司(FK506)对大鼠肝细胞癌模型肝移植术术后免疫功能的影响。方法:雄性Lewis大鼠76只,DA大鼠48只。选取其中60只Lewis大鼠用二乙基亚硝胺灌胃构建肝癌模型,14周后将48只正常DA大鼠肝脏移植于造模后存活的48只肝癌模型大鼠,术后随机分为模型组,FK506高、中、低剂量组(n=12);另16只正常雄性Lewis大鼠作为正常对照组。术后FK506治疗组分别以1、0.5和0.25 mg/kg剂量灌胃4周,正常对照组和模型组给予0.9%氯化钠溶液。于治疗2周和4周时采用ELISA法分别检测外周血一氧化氮(nitric oxide,NO)及肝组织白介素-2β(Interleukin-2β,IL-2β)、IL-4β、IL-12β、干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor beta,TGF-β1)及肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF-α)水平;采用流式细胞仪检测Treg、CD4+T、CD8+T细胞数;RT-PCR方法检测肝脏诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因表达。结果:FK506中、高剂量组IL-2β、IL-4β、IL-12β、NO、IFN-γ、TGF-β1、TNF-α、CD4+T%、CD8+T%在治疗2周和4周时均明显降低,iNOS mRNA低表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),治疗4周时与同组治疗2周时比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FK506对二乙基亚硝胺诱导肝细胞癌模型大鼠原位肝移植术后急性排异反应具有明显的抑制作用,这一作用主要是通过调节Treg类细胞因子及NO信号通路蛋白而实现。