1株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌分型、耐药机制及毒力研究

目的探讨1株临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的基因分型及耐药机制。方法用PCR法对该菌鉴定并进行荚膜血清分型以确定其多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST);并用PCR对其相关毒力因子及相关耐药基因进行检测。结果确认该菌株为肺炎克雷伯菌,但不属于常见的高致病力K1、K2及K5型;MLST分型为ST11;PCR鉴定其携带有blaCTX-M、blaTEM、blaSHV耐药基因及wabG、uge、ureA毒力基因。结论该菌为ST11型的非K1、K2及K5菌株,致病力较弱,但可导致临床多重耐药菌株的增多。

幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌BIB发酵及纯化工艺研究

目的初步建立重组幽门螺杆菌多靶点疫苗工程菌（BIB）的高密度发酵及其蛋白纯化工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,放大工艺至50L发酵罐中,对影响目的蛋白收率的因素如发酵培养基、工作种子接种量、诱导剂浓度、诱导起始时间、诱导持续时间及诱导剂添加方式等进行优化验证;并利用rBIB蛋白高等电点特性（pI=9.05）,在pH 7.0-7.5的磷酸盐缓冲液中目的蛋白带正电荷,采用阳离子交换层析进行纯化,对阳离子交换层析填料及纯化缓冲液的pH进行优化。结果经高密度发酵后BIB菌体产量为70g/L,蛋白表达量为32%;rBIB蛋白经阳离子交换层析纯化后其纯度为91.8%。结论该工艺的初步建立为深入研究rBIB蛋白性质及其规模化生产奠定了基础。

布鲁氏菌部分毒力相关调控因子免疫原性检测与保护性评价

目的检测部分布鲁氏菌毒力相关调控因子刺激机体产生细胞免疫反应的能力,并对具有细胞免疫原性蛋白的免疫保护性进行初步评价。方法利用Gateway的方法将9个布鲁氏菌毒力相关转录调控因子克隆至表达载体pHXGWA上并利用Ni-NAT层析的方法纯化重组蛋白。构建布鲁氏菌疫苗株S19株免疫的BALB/c小鼠模型,免疫35d后分离小鼠脾细胞并用体外重组蛋白再刺激,ELISA方法检测蛋白体再刺激后小鼠脾细胞分泌的细胞因子IFN-γ水平,了解毒力相关调控因子刺激机体产生细胞免疫反应情况。以CpG-ODN为免疫佐剂,用具有细胞免疫活性蛋白免疫小鼠,观察对布鲁氏菌强毒株544攻击感染的免疫保护作用。结果 7个布鲁氏菌毒力相关调控因子在大肠埃希菌中得以表达。其中BMEⅠ1573及BMEⅡ0475再刺激下S19免疫小鼠脾细胞产生的IFN-γ水平高于PBS对照小鼠。而在以CpG-ODN为免疫佐剂时,两者均不具有免疫保护性。结论布鲁氏菌LysR家族及GntR家族的转录因子BMEⅠ1573及BMEⅡ0475具有细胞免疫原性,初步检测无免疫保护作用。

视网膜神经节细胞分化调控因子Math5的体外表达与纯化

目的体外克隆、表达视网膜神经节细胞分化调控因子Math5,并通过亲和层析的方法进行纯化获得重组表达的Math5蛋白。方法采用限制性内切酶双酶切系统将Math5基因克隆到表达载体pET28a上,并通过载体自身所带6×His标签,利用Ni-NTA纯化出相应的重组蛋白。结果 Math5基因432bp的序列成功克隆到pET28a载体上,通过Ni-NAT纯化出重组表达的Math5蛋白,其纯度为90%,浓度为1.0mg/mL。结论视网膜神经节细胞分化调控因子Math5蛋白的体外表达与纯化为体外蛋白诱导神经前体细胞向视网膜神经节细胞的分化提供蛋白。