十堰市白菜黑斑病病原真菌的分离与鉴定

对湖北省十堰市当地白菜(Brassica pekinensis)品种的黑斑病进行病原真菌鉴定和病害分析,并提出相应的预防措施。采用组织分离法从病叶中分离得到病原真菌,并利用rDNA ITS和Alt-α1基因序列比对进行分析鉴定。结果表明,发现1个新的链格孢属(Alternaria sp.)真菌,推测其是导致十堰市当地白菜黑斑病的致病真菌。此外,确认ITS序列和Alt-α1基因序列的联合分析,能够区分3种常见的链格孢属真菌Alternaria brassicicola、Alternaria japonica、Alternaria brassicae。

何首乌中相关蒽醌类化合物抗癌作用的研究进展

目的:何首乌是蓼科多年生缠绕藤本植物何首乌Polygonum multiflorum的干燥块根,2015年版《中国药典》根据其加工方法不同分为生何首乌(Polygoni Multiflori Radix)和制何首乌(Polygoni Multiflori Radix Praparata)。该综述总结了何首乌中相关蒽醌类化合物的抗癌作用,为探讨何首乌的抗癌作用活性物质基础和作用机制研究奠定基础。方法:依据网络数据库Pub Med,CNKI,重庆维普等相关文献,对近15年来关于何首乌中相关蒽醌类化学成分及药理作用等研究成果进行汇总分析。结果:何首乌中相关蒽醌类化合物有20种。与其他蓼科植物相比,2015年版《中国药典》规定的何首乌质量标记物大黄素和大黄素甲醚含量较高。在抗癌作用方面,诱导癌细胞凋亡的有大黄素及其大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚及其大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸;抑制细胞周期的有大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸;抑制细胞迁移、侵袭和转移的有大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚及其大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷;阻断能量代谢者有大黄素、大黄酚、大黄酸;逆转肿瘤多药耐药的有大黄素。结论:何首乌相关蒽醌类化合物具有潜在的抗癌药用价值,其作用机制、成分之间的相互作用等有待深入研究。

金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的调节机制研究

目的:研究金茵清热口服液(JYQR)对人外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样2受体(TLR2)信号通路免疫调节作用机制。方法:体外分离、培养人PBMC,设空白对照组和JYQR组,JYQR组加入JYQR刺激PBMC,与空白组经37℃,5%CO2培养24 h后,分别提取各组PBMC中总RNA、总蛋白、细胞上清液,RT-PCR和Western Blot法检测空白对照组和JYQR组PBMC中相关信号分子TLR2、MyD88、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测细胞因子IL-1α、IL-6、TNF-α、IFN-α的分泌水平;分别设空白对照组:不作处理;JYQR组:JYQR 2.015 mg·mL^-1;TLR2激动剂组:Pam3CSK4 300 ng·mL^-1;TLR2抑制剂组:OxPAPC 30μg·mL^-1+JYQR 2.015 mg·mL^-14组,提取核蛋白和浆蛋白,Western Blot法检测IRF3和NF-κB p65的核转位情况。结果:与空白对照组相比,JYQR组中TLR2、IRAK4、TRAF6、IRF3 mRNA表达水平分别上调5.93倍、1.77倍、2.95倍、1.43倍(*P<0.05,**P<0.01);MyD88、TRAF6蛋白的表达分别上调1.26倍、1.24倍(*P<0.05),IRAK4和IRF3的相对表达水平差异无统计学意义;细胞因子IL-1α、IL-6的表达下调55%、61%,TNF-α、IFN-α的分泌水平上调4.3倍、2.9倍(*P<0.05,**P<0.01)。JYQR预处理PBMC后,IRF3及NF-κB核转位增加,但是经过TLR2抑制剂预处理后,IRF3和NF-κB的核转位减弱;相反,TLR2激动剂预处理可以进一步上调IRF3和NF-κB的核转位。结论:金茵清热口服液对人PBMC中TLR2信号通路的作用机制可能是通过MyD88依赖型信号通路激活中、下游的IRAK4、TRAF6、IRF3以及NF-κB调控终端效应因子发挥免疫调节作用。

基于Illumina高通量测序技术的草豆蔻基因组研究

目的对药食同源植物草豆蔻Alpinia katsumadai进行基因组调研分析,完善草豆蔻基因组遗传信息。方法研究采用Illumina高通量测序技术,基于K-mer分析手段来研究草豆蔻基因组的大小及杂合度,利用MISA方法分析可能的SSR分子标记。结果草豆蔻的基因组大小为1.60 Gb,基因组杂合度为0.44%,重复序列比例为72.72%;在基因组序列中,进行SSR分子标记分析,共鉴定出了364 395个SSR,其中,单、双、三核苷酸重复模体的比例较高,分别占比64.25%、24.05%、10.31%;从测序得到的350 bp文库中,随机取10 000条单端reads,与NT库进行BLAST比对,发现草豆蔻的近缘物种艳山姜Alpinia zerumbet和小豆蔻Elettaria cardamomum上的reads数分别占比对上NT库reads数的12.89%和12.36%。结论通过对草豆蔻植物的基因组大小、杂合度调查及SSR分子标记分析表明,草豆蔻物种基因组属于高重复、大基因组的复杂基因组,这为草豆蔻的资源保护和遗传多样性分析及品种选育提供了遗传信息支撑。

金茵清热口服液对PBMC中TLRs mRNA表达的影响

目的:研究金茵清热口服液(试药)对人外周血单个核细胞(PBMC)中Toll样受体(TLRs)mRNA水平的影响,探索试药在TLRs信号通路中的免疫调节作用。方法:体外分离、培养人PBMC,设试药组和空白对照组,试药组加入试药刺激PBMC,与空白组经37℃,5%CO2培养24h后,用Trizol抽提PBMC总RNA,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测PBMC中TLR1-10mRNA水平。结果:与空白对照组比较,试药组PBMC中,除TLR5、TLR7、TLR8、TLR10mRNA水平下调(aP<0.05,c P>0.05),其他TLRs mRNA表达均上调,其中TLR1、TLR2和TLR6上调最为显著,分别上调4.11,6.32和5.58倍(b P<0.01)。结论:金茵清热口服液可能主要通过影响TLR1、TLR2和TLR6来激活天然免疫应答,发挥免疫调节作用。

药用植物益智的基因组调研及SSR分子标记开发

益智是中国著名的“四大南药”之一,也是海南省道地药材。本研究以Illumina高通量测序技术为基础,通过益智样品的基因组DNA构建350 bp文库,采用Kmer分析方法分析益智基因组大小、重复序列比例和杂合率;采用MISA方法分析可能的SSR分子标记;利用与NT库(Nucleotide Database)进行BLAST比对,分析益智物种多样性。结果显示:益智的基因组大小为2.06 Gb,重复序列比例为77.94%,基因组杂合度为0.38%;在基因组序列中,进行SSR分子标记分析,共鉴定出了409474个SSR,其中,单、双、三核苷酸重复模体的比例较高,分别占比68.16%、19.66%、10.68%;为分析益智的物种多样性,在测序构建的350 bp小文库中,任意筛选10000条单端reads与NCBI核酸数据库比对,发现在已公布的序列信息的物种中,小豆蔻(Elettaria cardamomum)和艳山姜(Alpinia zerumbet)上的reads匹配率较高,分别占比15.96%和10.44%。该研究表明,南药益智的基因组属于大基因组,高重复的复杂基因组结构特征;同时,也为益智的资源保护和遗传多样性分析及品种选育提供了遗传信息支撑。