响应面法优化十堰地区黄药叶果胶提取工艺及其基本性质研究

通过单因素试验和响应面法优化低温碱提取法黄药叶果胶提取工艺,并分析黄药叶果胶单糖组成及基本性质。结果表明,黄药叶果胶的最优提取工艺参数是NaOH浓度1.85 g/L、提取时间32 min和液料比60∶1(mL/g),黄药叶果胶在此条件下的得率为(10.785±0.017)%。果胶样品水解后得到5种单糖,分别是半乳糖醛酸45.06 mol%、鼠李糖19.91 mol%、半乳糖14.55 mol%、阿拉伯糖13.01 mol%、岩藻糖7.48 mol%。分析黄药叶果胶单糖组成和酯化度,黄药叶果胶为低脂果胶,且结构线性度低,主要结构为含有较短中性糖侧链的RG-I型果胶。本研究可为十堰地区黄药叶果胶的开发、利用和结构研究提供理论依据。

金荞麦化学成分、药理作用的研究进展及质量标志物(Q-Marker)的预测分析

金荞麦是我国传统中药材,主要含有黄酮类、三萜类、甾体类、有机酸类等化学成分,具有抗炎、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等多种药理活性。通过文献检索,梳理了近几年国内外对金荞麦化学成分及药理作用研究,从传统功效、传统药性、化学成分可测性、不同产地等多个方面对其质量标志物(Q-Marker)进行了预测分析,为金荞麦质量控制提供科学依据。

壳聚糖及其衍生物在生物医药领域的应用研究进展

壳聚糖衍生于甲壳素,是自然界中产量仅次于纤维素的天然高分子多糖。由于它具有生物相容性、生物可降解性、抗菌性、无细胞毒性以及非凡的蛋白亲和性等优异性能,在生物医药方面具有广阔的应用前景。此文对壳聚糖及其衍生物的生物特性以及在医药应用中的进展进行了综述。

十堰地区连翘叶HPLC指纹图谱的建立及抗氧化抑菌谱效关系研究

试验旨在通过研究十堰地区不同产地连翘叶HPLC指纹图谱与抗氧化、抑菌活性之间的谱效关系,初步确定其抗氧化、抑菌活性物质基础,为其质量控制方法研究提供参考。试验构建十堰地区十个不同产地的连翘叶HPLC指纹图谱,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)确定共有峰。2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基(ABTS+)清除法测定抗氧化活性,牛津杯法测定连翘叶水提物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性;灰色关联度和主成分分析法相结合阐明指纹图谱中多成分和药效数据之间的谱效关系。结果显示,连翘叶水提物的指纹图谱确定了13个共有峰,灰色关联度法计算出12个共有峰与抗氧化和抑菌效果的关联度均大于0.6,主成分分析构建的主成分综合评分结果也与实际药理活性结果相符。研究表明,十堰地区连翘叶具备开发潜力,其中以化龙堰和青石村产地的质量最优。连翘叶的抗氧化和抑菌活性为多组分协同作用的结果,特征成分连翘酯苷A、连翘苷、芦丁为强关联药效基础物质,连翘叶水提物整体活性与这些特征成分含量呈正相关。

当归补血泡腾片的制备及质量分析

优选当归补血泡腾片的处方工艺,并对其质量进行分析。通过Box-Behnken响应面法优化制剂处方。通过TLC法对样品中阿魏酸、藁本内酯进行薄层鉴别。通过HPLC-CAD法对黄芪甲苷进行含量测定,通过HPLC-DAD法对样品中阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定。在当归黄芪提取物用量15%、柠檬酸用量22%、碳酸氢钠用量19%、聚乙二醇6000用量5%、可溶性淀粉用量39%时,制剂的综合评分最佳,实测值与预测值偏差为1.43%。崩解时限、重量差异、硬度、pH等检查符合药典规定。在TLC检测中,阿魏酸、藁本内酯主斑点清晰。黄芪甲苷、阿魏酸、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量分别为448.38、242.31、526.02μg/g。实验确立的当归补血泡腾片处方科学合理,质量分析方法方便可靠。

Rhopaladins类似物RPDPRO的绿色合成及抗肝癌活性研究

以3-对氯苯基丙烯醛、Z-2-溴甲基-3-苯基丙烯酸、对氟苯胺、环己基异腈为原料,以绿色、安全的乙醇/水作为混合溶剂,在pH值为4~6的条件下,通过Ugi 4C/S_(N)关环串联一锅法得到Rhopaladins类似物(2E,4E)-N-环己基-2-对氯苯乙烯基-1-对氟苯基-4-苄叉基-5-吡咯烷酮-2-酰胺(简称RPDPRO),其结构经^(1)H NMR、^(13)C NMR、EI-MS表征。并用MTT法检测了其对正常肝细胞和肝癌细胞的细胞毒性,流式细胞术检测了其对肝癌细胞凋亡的影响,结果表明Rhopaladins类似物RPDPRO对正常肝细胞的毒性较低,并且可以显著抑制肝癌细胞增殖并诱导其凋亡。

外泌体在肝癌诊断与治疗中的研究进展

肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,全世界每年约有84万例新增病例和78万例死亡病例;在全球范围内,肝癌是癌症相关病死率的第四大主要原因[1-2]。尽管近些年HCC在诊断、预防、化疗等方面取得了重大进展,但由于其隐匿性较强,多数患者确诊时已处于中晚期,并且预后效果差,患者五年生存率低于20%[3-5]。因此,寻找有助于肝癌早期诊断的生物标志物一直是研究的热点。外泌体是一种小的具有磷脂双层膜的纳米级囊泡,其直径约在50~150 nm之间[6],大小均一,并且包含有多种生物活性物质,如蛋白质、DNA、miRNA、lnc RNA、mRNA、肿瘤基因和转录因子等,包含丰富的可反应原发疾病的基因信息[7-8]。

温敏离子通道蛋白TRPV4受热激活参与相关疾病发生的机制研究进展

发热是机体应对感染和损伤的一种病理性防御反应。瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)是瞬时感受器电位离子通道家族的成员,在机体中广泛表达,对体温具有负调节作用。当机体温度升高激活TRPV4或使其表达增多时,可引起脑水肿和癫痫发作的加剧;TRPV4的活性及正常表达影响新生儿面部与心脏缺陷和精子活动趋热性。通过对TRPV4的多方面研究,有望揭示TRPV4受热激活下与疾病的具体机制,探索新的药物作用靶点和开发新的药物等。

黄药叶总黄酮提取工艺优化及其 抗氧化活性研究

采用超声波辅助提取法提取黄药叶总黄酮,通过单因素试验和正交试验优化黄药叶总黄酮提取工艺,并探讨其体外抗氧化活性。结果表明,黄药叶总黄酮最佳提取工艺参数为乙醇体积分数70%,提取次数3次,提取时间40 min,料液比1∶30(g/mL),此条件下黄药叶总黄酮得率为(6.18±0.13)%。体外抗氧化试验结果表明,黄药叶总黄酮提取物对羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基均具有一定的清除能力,相应的半数清除浓度(inhibitory concentration,IC_(50))为484.12、18.27、46.88μg/mL,分别为L-抗坏血酸的1.50、4.50、2.51倍,黄药叶总黄酮提取物铁离子还原能力略低于L-抗坏血酸。

十堰地区连翘叶提取物的抑菌和抗氧化活性研究

试验旨在研究十堰地区野生连翘叶提取物的抗氧化和抑菌活性。试验采用回流法提取连翘叶,通过测定DPPH·、OH·和ABTS^(+)·清除能力,研究不同浓度连翘叶水提取物的体外抗氧化活性。使用牛津杯法、倍比稀释法测定连翘叶提取物对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性。结果表明,连翘叶水提物清除DPPH·、OH·和ABTS^(+)·的IC_(50)值分别为1.29、100.71和16.30 mg/L;阳性对照VC清除DPPH·、OH·和ABTS^(+)·的IC_(50)值分别为6.23、388.19和47.70 mg/L;连翘叶水提物对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌均具有抑制作用,对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.100、0.100、0.200 g/L。研究表明,十堰地区野生连翘叶提取物具有较好的体外抗氧化和抑菌活性,可为该地区野生连翘叶功能性饲料添加剂的开发利用提供参考。

超高效液相色谱指纹图谱结合化学模式识别分析艾叶质量

为艾叶质量控制提供参考,进行了题示方法研究。以不同产地的10批艾叶样品为研究对象,采用超高效液相色谱法(UHPLC)建立指纹图谱,通过与混合标准溶液色谱图比对指认其中的共有峰,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012 A版)进行相似度评价;对UHPLC测定异绿原酸B、异绿原酸C、棕矢车菊素含量进行方法学验证,并定量分析10批样品中这3种成分;采用聚类分析、主成分分析对10批艾叶样品进行化学模式识别。结果表明:由10批艾叶样品指纹图谱得到17个共有峰,指认出其中3个共有峰,分别为异绿原酸B(峰3)、异绿原酸C(峰5)、棕矢车菊素(峰8);异绿原酸B、异绿原酸C、棕矢车菊素的质量在一定范围内与对应的峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为1.0×10^(-5)~8.0×10^(-5)ng,方法学验证结果显示仪器精密度良好,并且该方法稳定性、重复性较好,10批样品中异绿原酸B、异绿原酸C、棕矢车菊素的质量分数分别为0.211 9~2.537 1 mg·g^(-1),0.165 8~3.365 0 mg·g^(-1),0.169 1~0.931 8 mg·g^(-1);相似度评价结果显示,除S3样品外,其余样品的相似度均大于0.900;聚类分析和主成分分析结果一致,均将10批艾叶样品分为两类,S3样品为一类,其余样品为一类。

Rhopaladins类似物对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察Rhopaladins类似物(RPDPB)对宫颈Hela细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组、空白组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO培养液,空白组加入不含细胞的MEM培养液,分别于24、48、72 h采用CCK-8法检测OD值,计算细胞增殖抑制率。取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测Annexin V-FITC和PI,计算细胞凋亡率。取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用RT-PCR法检测细胞人乳头瘤病毒18 E6(HPV18 E6)、人乳头瘤病毒18 E7(HPV18 E7)、WNT2B、β-catenin mRNA和miR-145 RNA。取对数生长期Hela细胞,将细胞分为实验组、对照组,实验组又分为不同剂量组,不同剂量组分别以12.5、25、50μmol/L RPDPB干预,对照组只加DMSO不加药,48 h后采用Western blot法检测细胞WNT2B、β-catenin蛋白。结果与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率增加,且呈时间和剂量依赖性(P均<0.05)。与对照组比较,实验组细胞早期凋亡率和晚期凋亡率增加,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。与对照组比较,实验组HPV18 E6 mRNA、HPV18 E7 mRNA、WNT2B mRNA、β-catenin mRNA相对表达量降低,miR-145 RNA相对表达量升高,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。与对照组比较,实验组WNT2B、β-catenin蛋白相对表达量降低,且呈剂量依赖性(P均<0.05)。结论RPDPB可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,并诱导细胞凋亡,呈时间和剂量依懒性,作用机制可能是其通过下调HPVE6/E7 mRNA表达,导致miR-145 RNA表达上调,进而抑制下游WNT2B/β-catenin通路中WNT2B、β-catenin mRNA和蛋白表达。

气相色谱-质谱指纹图谱结合化学计量学方法分析不同产地艾叶挥发油的差异

将来自10个不同产地的艾叶样品粉碎、过筛,参照《中华人民共和国药典》(2020年版)进行提取。取40 g样品,加入700 mL水和100 mL饱和氯化钠溶液,于100℃加热回流5 h。放置10 h,分取0.1 mL,用正己烷稀释至10 mL,加入1.0 g无水硫酸钠,过0.22μm滤膜,滤液按照优化的仪器工作条件测定。用气相色谱-质谱法(GC-MS)建立10批样品的指纹图谱,共鉴定出103个成分,共有成分21个。将10批艾叶挥发油的指纹图谱导入指纹图谱相似度评价系统,以来自河南省南阳市样品的指纹图谱为参照图谱,以桉油精色谱峰为参照峰进行多点校正,所得相似度结果显示,10批样品可分为3类,和后续通过对21个共有成分色谱峰进行主成分分析、偏最小二乘法-判别分析和系统聚类分析所得分类结果一致。其中,偏最小二乘法-判别分析模型拟合效果好,聚类效果较优。

苗药蓝布正制剂云实感冒合剂中鞣花酸的含量测定

目的：建立云实感冒合剂中的鞣花酸含量测定方法。方法：采用Agilent Technologies 1290 Infinity UHPLC进行测定,色谱柱为Phenomenex Synergi（2.0 mm×100 mm,2.5μm）,柱温为40℃,流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,检测波长为254 nm,进样量为3μL。结果：经方法学考察,6批云实感冒合剂中的鞣花酸含量线性关系良好。结论：该方法操作简单、快速、准确和重复性好,可用于云实感冒合剂的质量控制。

见血清提取物对LPS诱导BV-2小胶质细胞介导神经炎症的作用及成分分析

探究见血清不同部位提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导BV-2小胶质细胞神经炎症反应的作用及潜在机制。见血清药材粉碎,提取浓缩得醇提物,经萃取得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水相萃取物,进一步利用D101大孔树脂柱色谱对乙酸乙酯萃取物进行分离得流分①~⑥。实验分为对照组、模型组、见血清提取物单独处理组及LPS联合见血清提取物干预组。采用LPS诱导BV-2建立神经炎症细胞模型,Griess法检测细胞上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)生成;MTT法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素(interleukin,IL)-6和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的释放;RT-qPCR检测促炎细胞因子诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环加氧酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、IL-6、IL-1β和TNF-α的m RNA表达水平;Western blot检测i NOS、COX-2、核转录因子-κB p65(nuclear factor kappa-B p65,p65)、磷酸化核转录因子-κB p65(p-p65)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、c-jun N末端激酶(c-jun N-terminal kinease,JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38),磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达;UHPLC-Q-Exactive Orbitrap技术结合文献比对解析活性部位化学成分。结果表明见血清不同部位提取物均可以显著降低LPS诱导BV-2中一氧化氮(nitric oxide,NO)的释放,其中乙酸乙酯萃取物抑制作用最显著且无细胞毒性,该部位流分⑥还可以剂量依赖性降低i NOS、COX-2、IL-6、IL-1β和TNF-α的基因及蛋白表达水平,同时对LPS诱导BV-2中p-p65、p-ERK、p-p38和p-JNK蛋白表达具有显著抑制作用;质谱分析流分⑥共鉴定到79种化合物,含12种已被证实具有抗炎活性的化合物。该研究通过体外实验证实了见血清提取物在治疗神经炎症方面具有显著效果,并揭示了其抗炎作用可能通过抑制NF-κB及MAPK信号通路实现。

血见愁植物化学成分研究（英文）

对香科科属植物血见愁进行化学成分研究,分离得到1个新化合物和6个已知化合物。通过波谱、理化常数以及比对文献资料的方法进行结构鉴定,分别为4,8,9-trihydroxy-6(7)-en-decenoicacidγ-lactone(1),3,7-Dimethyloct-1-ene-3,6,7-triol(2),2,8-Bornanediol(3),1-(4-hydroxyphenyl)ethane-1,2-diol(4),2-(3-methoxy-4-hydroxyphenyl)-propane-1,3-diol(5),indole-3-carboxylic acid (6)和3-hydroxy-benzenemethanol (7),化合物1–7均首次从该植物中分离得到。

左卡尼汀注射液中三甲胺分离提取及其离子色谱测定法研究

目的建立分离提取左卡尼汀注射液中三甲胺含量的方法,及采用离子色谱法对三甲胺进行检测研究。方法以L_(9)(3^(4))正交试验优化提取条件,采用0.25 mol·L^(-1)NaOH溶液创造碱性环境,40℃加热20 min,连接N^(2)流量为0.4 L·min^(-1),用0.1 mol·L^(-1)甲磺酸溶液吸收气体,有效实现左卡尼汀注射液中三甲胺的分离提取;采用DionexIonPac^(TM) CS12A(4.0 mm×250 mm)色谱柱,DionexIonPac^(TM) CG12A(4.0 mm×50 mm)保护柱,以17 mmol·L^(-1)甲磺酸溶液为淋洗液,流速0.5 mL·min^(-1),柱温30℃,电导检测。结果三甲胺在0.30~48.64μg·mL^(-1)内线性关系良好,相关系数为0.9993,检出限为0.012μg·mL^(-1)(S/N=3),定量限为0.3μg·mL^(-1)(S/N=10),精密度良好,溶液置于室温24 h或2~8℃48 h内稳定。平均加样回收率在97.33~100.82%内,相对标准偏差(RSD)为1.07%(n=9)。结论该方法能够有效提取分离左卡尼汀注射液中的三甲胺,离子色谱检测方法灵敏度高,回收率和重现性良好。