缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis,RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Alix、CD63的表达增加(P<0.05)。与常氧外泌体组相比,缺氧外泌体组Huh7细胞增殖和迁移能力增强(均P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达上调,Bax、E-cadherin和p62的表达下调(均P<0.05),自噬流增强(P<0.05)。与缺氧外泌体组相比,缺氧外泌体+3-MA组Huh7细胞增殖、迁移和上皮间质转化作用减弱(P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达下调(P<0.05),Bax、E-cadherin和p62的表达上调(P<0.05)。结论缺氧诱导的外泌体可以参与细胞自噬的发生进而促进肝癌进展。