TRPM8通道介导的自噬调节可能通过JNK信号通路影响肾癌细胞的存活

目的:探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)与肾癌细胞增殖及凋亡的关系。方法:qRT-PCR检测肾癌细胞(A498、GRC-1、786-0)中TRPM8的表达水平。利用shRNA转染A498细胞来构建TRPM8低表达的稳定细胞株,qRT-PCR和Western blotting验证shRNA的干扰效率。细胞集落形成实验检测沉默TRPM8后A498细胞的增殖能力;流式细胞术检测沉默TRPM8后A498细胞的凋亡能力;自噬检测试剂盒检测沉默TRPM8后A498细胞的自噬通量的变化;Western blotting检测沉默TRPM8后自噬相关标志物(ATG3、ATG5、ATG6、ATG7和ATG12)的变化和c-Jun N末端激酶(JNK)通路相关蛋白的表达。结果:TRPM8在肾癌细胞中高表达;转染TRPM8 shRNA后,TRPM8的表达明显降低(P<0.01);沉默TRPM8后,A498细胞的增殖能力明显下降(P<0.01),凋亡率明显增高(P<0.01);转染TRPM8 shRNA,A498细胞的自噬通量也明显减少(P<0.05),且ATG3、ATG5、ATG6、ATG7和ATG12蛋白的表达也下降(均P<0.05);沉默TRPM8后,JNK的磷酸化水平降低(P<0.05);使用JNK抑制剂(SP600125)后,ATG5和ATG7蛋白水平明显降低(均P<0.05)。结论:沉默TRPM8通道介导的自噬调节通过JNK信号通路可抑制肾癌细胞的增殖,促进其凋亡。

晚期胆管癌安罗替尼维持治疗的疗效及安全性分析

目的:评估盐酸安罗替尼用于晚期胆管癌一线化疗后维持治疗的疗效及安全性。方法:收集2020年09月至2021年09月期间湖北省十堰市人民医院肿瘤科收治的经一线化疗后疾病评估达到的完全缓解(complete response,CR)、部分缓解(partial response,PR)以及疾病稳定(stable disease,SD)的42例晚期胆管癌患者,一线化疗结束后3周接受盐酸安罗替尼治疗,直至疾病进展。主要研究终点为客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、次要研究终点为无进展生存期(progression-free survival,PFS)、1年总体生存率及安全性。结果:39例患者可进行疗效评估,根据RECIST 1.1标准进行疗效评价:9例患者部分缓解,12例患者疾病稳定,没有患者达到完全缓解,ORR为23.08%,DCR为53.85%,mPFS达到6.0个月(95%CI,4.997~7.003),1年总体生存率69.2%。82.05%的患者报告了不良事件,其中主要不良事件为高血压、手足皮肤反应,无4级以上不良事件发生,没有患者因不良事件而停药。结论:盐酸安罗替尼在晚期胆管癌患者一线化疗后的维持治疗中具有潜在的疗效和可靠的安全性,但需要更大样本量的研究进一步证实。

肺癌细胞外泌体来源的miR-718通过靶向PTEN诱导血管新生

目的:探究肺癌细胞外泌体(exosome,exo)对血管新生的影响及机制。方法:提取人肺上皮细胞HFL-1和人肺癌细胞A549、H522、H460细胞分泌的外泌体,记为HFL-1 exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo,将上述外泌体以及等体积的PBS缓冲液与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)共孵育,记为HFL-1 exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组和PBS组,PBS组作为对照组。HUVEC转染PTEN siRNA和Negative control,记为si-PTEN组和si-NC组。提取转染miR-NC、miR-718 mimic、miR-718 inhibitor的A549细胞所分泌的外泌体,记为A549/miR-NC exo、A549/miR-718 mimic exo、A549/miR-718 inhibitor exo,将上述外泌体与HUVEC细胞共孵育,记为A549/miR-NC exo组、A549/miR-718 mimic exo组、A549/miR-718 inhibitor exo组,HUVEC细胞与A549/miR-718 mimic exo孵育后转染PTEN过表达质粒,记为A549/miR-718 mimic exo+PTEN组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测各组细胞及外泌体miR-718的表达;Transwell小室法和小管形成实验检测各组细胞的迁移能力和小管形成情况;Western blot检测PTEN蛋白的表达。结果:本文所提取的HFL-1 exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo均符合外泌体的结构特征;与PBS组比较,A549 exo、H522 exo、H460 exo组HUVEC细胞迁移数和小管形成数显著升高(P均<0.05)。与HFL-1细胞比较,A549、H522、H460细胞中miR-718表达显著升高(P均<0.05)。与HFL-1 exo比较,A549 exo、H522 exo、H460 exo中miR-718表达显著升高(P均<0.05),并且miR-718可靶向调控PTEN的表达。相比于si-NC组,si-PTEN组HUVEC细胞小管形成和细胞迁移数显著升高(P均<0.05)。相比于A549/miRNC exo组,A549/miR-718 mimic exo组细胞迁移和小管形成数显著增加(P均<0.05),A549/miR-718 inhibitor exo组细胞迁移和小管形成数显著减少(P均<0.05);相比于A549/miR-NC exo组,A549/miR-718 mimic exo+PTEN组细胞迁移和小管形成数显著升高(P均<0.05)。结论:肺癌细胞外泌体miR-718能够通过靶向抑制PTEN的表达而促进血管生成。

胃癌同期放化疗所致血小板减少危险因素分析

目的分析胃癌患者同期放化疗期间发生>2级血小板减少[TPG2(+)]的相关危险因素。方法回顾性分析2018—2020年间在中山大学肿瘤防治中心接受同期放化疗的非转移性胃腺癌患者治疗前临床资料、血液学参数及相关椎体剂量学参数与TPG2(+)的相关性。结果共纳入58例患者,其中TPG2(+)组23例(40%),TPG2(-)组35例(60%),两组间在临床基本资料上具有可比性(均P>0.05)。Logistic回归模型单因素分析显示放疗前外周血血小板计数(PLT)、嗜碱性粒细胞计数(BA)、乳酸脱氢酶(LDH)以及CTV最长径(LCTV)、勾画椎体个数(VBN)、VBN校正的椎体总体积(VBV)、D_(max)、D_(mean)、V_(5Gy)、V_(10Gy)、V_(20Gy)、V_(30Gy)、V_(40Gy),与TPG2(+)相关(均P<0.05),多因素分析显示放疗前PLT减少、LDH升高、LCTV较长、V_(20Gy)/VBN较高(P=0.048、0.028、0.013、0.030)可能增加TPG2(+)的发生风险。结论对于胃腺癌的同期放化疗,治疗前纠正PLT减少、避免较长的CTV以及控制VBN校正的V_(20Gy)有可能减少放化疗导致的显著血小板降低。

姜黄素通过内质网应激途径诱导肺癌A549细胞凋亡

目的：观察姜黄素诱导肺癌A549细胞的凋亡并探讨其相关机制。方法：传代培养肺癌A549细胞,分别给予姜黄素0,5,10,20,40μmol/ml处理,观察各组细胞增殖能力、细胞凋亡率、葡萄糖调节蛋白78（GPR78）、CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）蛋白表达。结果：姜黄素作用A549细胞后,细胞增殖能力下降,细胞凋亡率升高,GPR78、CHOP和Caspase-12蛋白表达均升高,这些改变随剂量增加而明显（P均〈0.05）。结论：姜黄素可能通过内质网应激途径诱导肺癌A549细胞调亡,这一作用在一定范围具有剂量依赖性。

三维适形放疗同步替吉奥治疗局部晚期胰腺癌

目的观察三维适形放疗同步替吉奥治疗局部晚期胰腺癌的近期疗效及毒副反应。方法 63例患者随机分为两组:联合组32例,采用三维适形放疗同步替吉奥治疗;三维适形放疗组31例;三维适形放疗分割剂量为2 Gy/次,5次/周,总剂量50～60 Gy。联合组自放疗开始起口服维康达[80 mg/(m2.d)],每日2次,第1～14天,每周期21 d,至少2个周期。结果联合组4例完全缓解(CR),9例部分缓解(PR),有效率43.75%;放疗组1例CR,5例PR,有效率19.35%,两组疗效比较差异有统计学意义(P=0.032)。联合组和单纯放疗组1年、2年生产率分别为50%、21.88%和25.81%、12.9%,中位生存期为13月和8月,两组生存时间比较差异有统计学意义(P=0.024)。两组毒副反应比较在恶心、呕吐,白细胞减少及贫血方面差异有统计学意义(均P<0.05),均未出现Ⅳ级副反应。所有副反应经过临床处理可以得到控制。结论替吉奥联合三维适形放疗治疗局部晚期胰腺癌是一种安全有效的治疗方法。

谷氨酰胺对小鼠脑损伤中热休克蛋白70表达的影响

将45只体质量为21~24 g的雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌注组(I/R)和谷氨酰胺组(Gln),每组15只.采用线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,取材前对各组小鼠进行神经功能损伤评分,分别使用TTC染色、HE染色、尼氏染色和TUNEL染色检测各组小鼠脑组织梗死体积、病理损伤情况、尼氏体数量和神经元凋亡情况.采用试剂盒检测各种小鼠脑组织中SOD活性和MDA含量,采用qRT-PCR和Western blot检测各组小鼠脑组织中HSP70的表达,探讨谷氨酰胺(Gln)诱导热休克蛋白70(HSP70)的表达及对小鼠大脑损伤的保护作用及其机制.结果显示,Gln处理脑缺血再灌注小鼠后,小鼠神经功能损伤评分明显降低(P<0.01),脑组织梗死体积明显减少(P<0.01),脑组织中HSP70的表达水平显著增加(P<0.001),尼氏体数量增加,脑组织中SOD活性增加(P<0.05),MDA含量减少(P<0.05),TUNEL阳性细胞数比例明显减少(P<0.01).以上结果表明,Gln通过诱导HSP70的表达,可以减少脑组织梗死体积、降低氧化应激和神经元凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤.

雷替曲塞通过诱导自噬增强耐药结直肠癌细胞的敏感性及机制研究

目的:探讨雷替曲塞对顺铂耐受的结直肠癌细胞(R-HCT116)化疗敏感性的影响,并初步探究其分子机制。方法:建立顺铂耐受的结直肠癌细胞株R-HCT116,CCK-8法检测结直肠癌细胞(HCT116)和R-HCT116细胞活力的影响;Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测各组R-HCT116细胞凋亡情况;通过透射电子显微镜观察各处理组R-HCT116细胞自噬体;免疫荧光染色检测各处理组R-HCT116细胞中LC3表达;蛋白免疫印迹法检测分析自噬蛋白及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果:不同浓度的雷替曲塞(0.1、0.5、1.0、2.0μg·ml^(-1))处理HCT116细胞48 h和72 h,细胞存活率下降且呈剂量依赖性(P<0.05);与顺铂组比较,使用0.5、1.0、2.0μg·ml^(-1)的雷替曲塞联合20μg·ml^(-1)顺铂作用的R-HCT116细胞存活率下降,细胞凋亡率上升,细胞中自噬体数量增加,LC3表达荧光强度增加,Beclin-1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达增高而P62蛋白表达降低;细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR均降低(均P<0.05)。结论:雷替曲塞能明显增强结直肠癌细胞HCT116细胞对顺铂化疗敏感性其机制可能与增强细胞自噬有关。

甲磺酸阿帕替尼治疗转移性肾癌的临床观察

目的评估甲磺酸阿帕替尼治疗转移性肾癌的有效性及安全性。方法收集2018年10月至2020年4月,湖北省十堰市人民医院、太和医院、国药东风总医院肿瘤科收治的接受甲磺酸阿帕替尼治疗(500 mg/次,1次/d)的转移性肾癌患者32例,主要研究终点是无进展生存期(PFS),次要研究终点是客观缓解率(ORR)、疾病控制率(DCR)及安全性,采用Cox回归进行PFS多因素分析。结果中位随访时间6.5(2~10)个月,32例患者均可进行疗效评估。疗效评价完全缓解0例,部分缓解14例(43.75%),疾病稳定10例(31.25%),疾病进展8例(25.00%),ORR 43.75%(14/32),DCR 75.00%(24/32)。患者的PFS与性别、年龄、病理类型和既往手术无显著相关性(均P>0.05),与转移部位显著相关(HR=0.032,95%CI为0.003~0.411,P=0.008)。所有患者中位PFS为9.5个月(8.3~10.7个月),其中肺转移(n=21)和其他部位转移患者(n=11)的中位PFS差异有统计学意义(9.5个月vs.6.2个月,χ^(2)=14.812,P<0.001)。不良反应主要为高血压(37.50%,12/32)、手足综合征(31.25%,10/32)、蛋白尿(18.75%,6/32)、中性粒细胞减少症(25.00%,8/32)、贫血(28.13%,9/32)、血小板减少症(18.75%,6/32)、恶心/呕吐(15.63%,5/32)、转氨酶升高(15.63%,5/32),多数为1级或2级,3级不良反应发生率为28.13%(9/32),无4级不良反应,经过减量及对症治疗后,症状均可控制。结论甲磺酸阿帕替尼能够有效延长转移性肾癌患者的PFS,且具有良好的安全性,可作为转移性肾癌的治疗选择。