长基因间非编码RNA 472靶向微小RNA-942-5p对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨长基因间非编码RNA 472(LINC00472)靶向调控微小RNA-942-5p(miR-942-5p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法采用GEPIA分析来自TCGA数据库的969例NSCLC组织(483例腺癌+486例鳞癌)的LINC00472水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系(NCI-H157、NCI-H1975和A549)的LINC00472水平。构建LINC00472过表达质粒pcDNA3.1-LINC00472并采用脂质体法转染A549细胞,根据转染质粒分为3组:未转染任何质粒的空白对照组、转染pcDNA3.1质粒的阴性对照组和转染pcDNA3.1-LINC00472质粒的过表达组。MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测A549细胞的增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测EMT相关因子E-钙黏蛋白(E-cad)、N-钙黏蛋白(N-cad)和波形蛋白(Vim)的水平,LncBase预测LINC00472与miR-942-5p的结合序列并经荧光素酶报告基因实验验证两者的靶向关系。结果GEPIA在线分析显示,NSCLC组织的LINC00472水平低于正常组织(P<0.05);NSCLC细胞的LINC00472水平均低于BEAS-2B细胞(P<0.05),选取水平最低的A549细胞进行后续功能实验。过表达组的LINC00472和E-cad水平升高,而miR-942-5p、N-cad和Vim水平降低(P<0.05)。过表达组转染48、72 h后的增殖活力低于其余两组(P<0.05)。过表达组的划痕愈合率为(29.148±3.034)%,低于空白对照组的(84.517±8.722)%和阴性对照组的(87.479±5.672)%,穿膜细胞数为(144.437±12.178)个,亦低于空白对照组的(240.365±14.156)个和阴性对照组的(224.713±17.805)个,差异有统计学意义(P<0.05)。荧光素酶活性检测结果显示,miR-942-5p模拟物能抑制LINC00472野生型质粒的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论LINC00472在NSCLC组织和细胞中表达均下调,增强LINC00472表达可抑制NSCLC细胞的EMT和侵袭迁移能力,可能通过靶向miR-942-5p来发挥抑癌作用,LINC00472/miR-942-5p轴在NSCLC防治中有一定潜能。