吴茱萸碱对肺癌荷瘤小鼠生长及HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的:探讨吴茱萸碱对Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子(HIF-1α/VEGF)信号通路的影响。方法:通过皮下注射Lewis肺癌细胞建立荷瘤小鼠模型,建模后分为模型对照组、阳性对照组(顺铂干预)及吴茱萸碱低、高剂量组,共干预14 d。通过检测各组小鼠造模给药期间肿瘤大小,计算抑瘤率,评价吴茱萸碱对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。此外,运用定量PCR(qPCR)法检测吴茱萸碱干预14 d后各组小鼠肿瘤组织中HIF-1α及VEGF mRNA表达的影响,免疫组织化学染色评估肿瘤组织中HIF-1α、VEGF及血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)表达水平,计算肿瘤组织中微血管密度(MVD)。结果:吴茱萸碱对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长具有显著的抑制作用,阳性对照组及吴茱萸碱低、高剂量抑瘤率分别为53.13%、20.49%、38.54%;吴茱萸碱各给药剂量组可不同程度下调Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤组织HIF-1α及VEGF基因及蛋白表达(P<0.01),减少肿瘤组织中MVD(P<0.01)。结论:吴茱萸碱可抑制肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长,其作用机制可能是通过减少肿瘤组织中HIF-1α及VEGF表达,抑制肿瘤中血管生成。

切应力通过Pim1/Akt调节人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶Ser633和Ser1177位点磷酸化

目的探讨不同模式的血流切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Pim1表达的影响,以及对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177和Ser633位点磷酸化的调控作用。方法体外原代培养的HUVECs,采用平行平板流动腔系统给HUVECs分别施加15 dyn/cm2层流切应力(LSS)和(0.5±4)dyn/cm2振荡切应力(OSS),Western blotting法检测Pim1、Akt和Akt Ser473磷酸化、eNOS、eNOS Ser1177和Ser633位点磷酸化蛋白表达。用特异性小干扰RNA(siRNA)技术分别敲低HUVECs中Pim1和Akt进行干预。结果与OSS刺激相比较,LSS显著上调HUVECs中Pim1蛋白表达水平(P<0.01),同时,Akt Ser473磷酸化、eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化蛋白表达增加(P<0.05或P<0.01);siPim1和Pim1特异性抑制剂SMI-4a干预后,LSS诱导的Pim1蛋白表达显著被抑制(P<0.05),同时Akt Ser473磷酸化、eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化蛋白表达均降低(P<0.05或P<0.01)。敲低Akt,LSS诱导的Akt Ser473磷酸化蛋白表达显著被抑制(P<0.05),同时也显著抑制LSS上调的eNOS Ser633和Ser1177磷酸化蛋白表达(P<0.05),而对LSS上调的Pim1表达无影响(P>0.05)。结论切应力可以通过Pim1/Akt信号通路调节HUVECs eNOS Ser633和Ser1177位点磷酸化。

Pim-1在结核性胸膜炎和肺癌胸膜组织中的表达及临床意义

目的探讨Pim-1在结核性胸膜炎及在肺癌患者胸膜组织中的表达及临床意义。方法收集我院2021年1月-2021年11月内科胸腔镜手术切除的结核性胸膜炎及肺癌的胸膜活检标本共41例,其中结核性胸膜炎21例,肺癌20例。利用免疫组织化学法和Western-Blot法分别测定胸膜组织中Pim-1蛋白的表达情况,同时探寻与Pim-1表达有关的临床因素。结果Pim-1在结核性胸膜炎组中的阳性率为95.24%(20/21),在肺癌组中的阳性率为70%(12/20),结核性胸膜炎胸膜组织Pim-1表达水平更高(P<0.001);Western-Blot结果显示Pim-1在结核性胸膜炎中表达水平也高于肺癌组(P<0.01);结核组Pim-1蛋白表达与性别、吸烟史、BMI指数均无明显相关性(P>0.05),肺癌组中Pim-1蛋白表达与性别、吸烟史、BMI指数均无明显相关性(P>0.05),可能与淋巴结转移有关(P<0.01)。结论结核性胸膜炎胸膜组织中的Pim-1表达较高,检测胸膜组织中Pim-1对结核性胸膜炎和肺癌有鉴别诊断价值。

含多黏菌素B抗菌方案治疗多重耐药革兰阴性菌HAP/VAP的贝叶斯网状Meta分析

目的采用贝叶斯网状Meta分析方法比较含多黏菌素B的抗菌方案与其他抗菌方案治疗多重耐药革兰阴性菌医院获得性肺炎/呼吸机相关性肺炎(HAP/VAP)的临床疗效。方法计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library、Web of Science、CNKI、SinoMed、ChiCTR、WanFang Data和VIP数据库,搜集含多黏菌素B的抗菌方案治疗多重耐药革兰阴性菌HAP/VAP的临床对照研究,检索时限均从建库到2022年10月15日。由2位研究员独立筛选文献、提取资料并评估纳入研究的偏倚风险后,采用Stata 17.0和R 4.1.2软件进行贝叶斯网状Meta分析。结果共纳入1个随机对照试验(RCT)和10项观察性研究,共1385例患者,涉及8种治疗方案。贝叶斯网状Meta分析结果表明,在临床有效率方面,8种用药方案组间差异无统计学意义(P>0.05),累积排序概率曲线下面积(SUCRA)显示多黏菌素B静脉滴注联合多黏菌素B雾化吸入方案的临床有效率高于多黏菌素B静脉滴注单用或其联合替加环素等方案;在病死率方面,文中涉及的4种用药方案中,SUCRA显示多黏菌素B静脉滴注联合多黏菌素B雾化方案的病死率较低,低于多黏菌素B静脉滴注、替加环素单用或两者联用等方案,其中多黏菌素B静脉滴注联合多黏菌素雾化吸入方案的病死率低于多黏菌素B静脉滴注联合替加环素方案,且差异有统计学意义[OR=0.21,95%CrI(0.05,0.94),P<0.05],其余涉及的治疗方案组间差异无统计学意义(P>0.05);在细菌清除率方面,涉及的4种用药方案组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论现有证据表明,就生存获益而言,推荐使用多黏菌素B静脉滴注联合多黏菌素B雾化吸入方案治疗多重耐药革兰阴性菌HAP/VAP。受纳入研究数量和质量限制,上述结论尚待更多大样本、高质量、多中心的RCT予以验证。

GATA4和RUNX2在良性脑膜瘤组织中的表达分析及临床意义

目的分析良性脑膜瘤组织中GATA结合蛋白4(GATA4)、Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达水平及临床意义。方法将2013年1月至2017年1月该院收治的100例良性脑膜瘤患者纳入研究。采用反转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测患者良性脑膜瘤组织和瘤旁组织中GATA4、RUNX2的表达水平,对良性脑膜瘤组织中GATA4与RUNX2表达水平的相关性进行分析。分析GATA4、RUNX2的表达述评与良性脑膜瘤患者临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析GATA4、RUNX2表达水平对良性脑膜瘤患者预后的影响。采用单因素和多因素Cox回归分析良性脑膜瘤患者复发的独立危险因素。结果与瘤旁组织相比,良性脑膜瘤组织中GATA4、RUNX2的表达水平均明显增加(t=9.21、10.73,P<0.05)。良性脑膜瘤组织中GATA4和RUNX2的表达水平呈正相关(r=0.218,P=0.029)。GATA4、RUNX2在良性脑膜瘤组织中的表达水平与肿瘤最大径、有无瘤周水肿及Ki-67指数有关(P<0.05)。GATA4高表达及RUNX2高表达的良性脑膜瘤患者的复发率均较高(P<0.05)。GATA4高表达、RUNX2高表达、肿瘤最大径>5 cm、有瘤周水肿和Ki67指数≥4%是良性脑膜瘤患者复发的独立危险因素(P<0.05)。结论GATA4和RUNX2是预测良性脑膜瘤患者复发的参考指标。

多功能Exosome在卵巢癌靶向治疗中的作用及临床意义

目的探讨构建多功能外来体(Exosome)用于卵巢癌靶向治疗的应用价值。方法选用BALB/c小鼠未成熟树突状细胞(DC)作为Exosome供体细胞,转染表达肿瘤靶向肽i RGD的融合蛋白质粒,构建具有肿瘤靶向性的i RGD-Exos,观察其与Nu Tu-19肿瘤细胞的相互作用,同时利用电穿孔方法将阿霉素(Dox)负载到i RGD-Exos中,构建i RGD-Exos-Dox,选取30只BALB/c小鼠,随机分为PBS组、Exosome组、Dox组、blank-Exos-Dox组和i RGD-Exos-Dox组,每组6只,观察各组小鼠体内肿瘤生长情况。结果与blank-Exos相比,i RGD-Exos在肿瘤细胞膜上定位更快,膜融合程度更明显;i RGDExos与肿瘤细胞结合率为(95.41±12.43)%,明显高于blank-Exos,差异有统计学意义(P<0.05);i RGD-Exos在注射后0.5 h内迅速出现在肿瘤组织部位,在2 h达到最高值,持续8 h后代谢完全,而blank-Exos注射后未出现在肿瘤组织部位;i RGDExos-Dox组小鼠肿瘤体积为(0.561±0.132)cm^3,明显小于PBS组、Exosome组、Dox组和blank-Exos-Dox组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论构建多功能Exosome在抗肿瘤治疗中有较好的应用前景,具有较好的肿瘤靶向性。

Akt调节切应力诱导骨髓间充质干细胞Bmi-1基因的表达

目的探讨流体切应力对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中Bmi-1基因表达的影响及可能的信号机制。方法原代体外分离培养大鼠BMSCs,应用平行平板流动腔系统,给BMSCs施加不同强度(0.5、1.5、3.0 Pa)和不同加载时间(1、2、6、24 h)的层流切应力,用实时定量RT-PCR法检测Bmi-1基因的表达水平,用免疫印迹法检测磷酸化Akt和ERK1/2的表达水平,利用Wortmannin(PI3K特异性抑制剂)、PD98059(ERK1/2 MAPK特异性抑制剂)信号阻断剂探讨信号转导途径。结果 BMSCs在1.5 Pa切应力作用1 h后Bmi-1基因表达即明显增强,24 h达高峰。不同强度切应力都会刺激Bmi-1基因表达,其中3.0 Pa最强。切应力能显著激活磷酸化Akt和ERK1/2表达。Wortmannin而不是PD98059可以明显抑制Bmi-1基因的表达。结论切应力可诱导BMSCs中Bmi-1基因表达,其表达量与刺激时间和切应力的强度密切相关,这种作用可能通过Akt信号调节。

切应力通过Pim1/eNOS途径调节人脐静脉内皮细胞NO分泌

目的:探讨层流切应力是否可通过Pim1调节内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性,从而调节血管内皮细胞一氧化氮(NO)分泌。方法:体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),运用平行平板流动腔系统给HUVECs加载层流切应力(15 dyn/cm^2)。采用Western blot法检测Pim1蛋白表达及eNOS-Ser1177磷酸化水平;硝酸还原酶法检测NO分泌量;利用特异性小干扰RNA(siRNA)转染技术沉默Pim1基因后再检测上述指标的变化。结果:切应力作用HUVECs 15 min,可以显著上调Pim1蛋白表达(P<0.05),同时显著增强eNOS-Ser1177磷酸化水平(P<0.05),伴随HUVECs NO分泌显著增多(P<0.05)。转染siPim1可以抑制切应力诱导的Pim1表达(P<0.05),同时抑制eNOS-Ser1177磷酸化(P<0.05),NO分泌随之显著降低(P<0.05)。结论:流体切应力可能通过Pim1/eNOS途径调节血管内皮细胞NO分泌。

水通道蛋白1在切应力调节血管内皮细胞迁移和血管生成中的作用及机制

目的:探讨流体切应力作用下水通道蛋白1(AQP1)的表达对血管内皮细胞迁移和血管生成的影响及可能的机制。方法:取雄性C57BL/6小鼠主动脉弓和胸主动脉血管壁组织,用qPCR和Western blot检测体内不同切应力作用部位血管壁AQP1表达的差异。原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),体外采用平行平板流动腔系统给HUVECs分别加载层流(LF,15 dyn/cm^(2)单向层切应力)和扰流[DF,(0.5±4)dyn/cm^(2)振荡切应力],用特异性小干扰RNA(siRNA)转染技术沉默AQP1基因,采用Transwell实验和Matrigel小管形成实验检测HUVECs迁移和血管生成能力;用Western blot检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177和Ser633磷酸化水平。结果:在体胸主动脉中AQP1的mRNA和蛋白表达显著高于主动脉弓(P<0.05)。HUVECs静态下敲减AQP1可以显著抑制细胞迁移和血管生成(P<0.01)。与DF组相比,LF显著上调HUVECs中AQP1的mRNA和蛋白表达(P<0.05),促进HUVECs迁移(P<0.01)和血管生成能力(P<0.05),同时显著增加eNOS Ser1177(P<0.01)和Ser633(P<0.05)磷酸化水平。转染siAQP1后,LF诱导的AQP1表达增强被抑制(P<0.01),HUVECs的迁移和血管生成能力也随之降低(P<0.01),同时eNOS Ser1177和Ser633的磷酸化水平降低(P<0.05或P<0.01)。eNOS抑制剂N^(G)-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)预处理HUVECs后,LF诱导的细胞迁移和血管生成能力被抑制(P<0.01)。结论:AQP1在流体切应力调节血管内皮细胞迁移和血管生成中发挥作用,其机制可能和eNOS信号有关。

磷酸化p38介导低切应力诱导的血管内皮细胞Bmi-1表达

目的 探讨低切应力（LSS）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中Bmi-1表达的影响及其可能的机制。方法原代培养HUVEC,免疫荧光检测Bmi-1在细胞中的定位;运用平行平板流动腔系统,给HUVEC加载0.5 Pa低切应力0.5 h、1 h、2 h和4 h,以无切应力加载为对照组,用实时定量RT-PCR检测Bmi-1 mRNA表达,用Western blot检测Bmi-1蛋白表达,利用p38特异性抑制剂SB2219探讨信号转导途径。结果 免疫荧光观察发现Bmi-1主要分布在HUVEC胞核中;HUVEC在LSS作用0.5 h后Bmi-1表达即明显增强,随着作用时间延长（1 h、2 h、4 h）,Bmi-1mRNA及蛋白表达逐渐降低;切应力能显著激活磷酸化p38表达;SB2219可以明显抑制Bmi-1表达。结论 LSS可诱导HUVEC中Bmi-1表达,其表达量与刺激时间长短密切相关,这种作用可能通过p38信号调节。

Pim1调控巨噬细胞M1型极化介导血管内皮细胞炎症在ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化中的作用

目的:探讨Pim1在巨噬细胞M1型极化中的作用及M1型巨噬细胞对内皮细胞黏附分子表达的影响,并观察其在ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成中的作用。方法:采用脂多糖(LPS)刺激小鼠Raw264.7细胞建立M1型巨噬细胞模型,用Pim1特异性抑制剂SMI-4a和转染Pim1小干扰RNA(siPim1)进行干预,分为对照组、LPS组、LPS+SMI-4a组、LPS+siNC组和LPS+siPim1组。收集以上各组Raw264.7细胞上清作为条件培养液(CM)孵育原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为CM^(M0)、CM^(M1)、CM^(SMI-4a)、CM^(siNC)和CM^(siPim1)组。动物采用颈动脉部分结扎术建立颈动脉AS模型,用6周龄ApoE^(-/-)雄性小鼠18只建模后,随机分为模型组及SMI-4a干预组,每组各9只。采用油红O染色法观察颈动脉脂质蓄积变化。免疫荧光法和Westernblot法检测M1型巨噬细胞标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Pim1、血管内皮标志物血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、细胞间黏附分子1(ICAM1)和血管细胞黏附分子1(VCAM1)在血管壁和细胞中的表达变化。结果:与对照组相比,LPS显著上调了Raw264.7细胞M1型极化标志物iNOS蛋白表达(P<0.01),同时Pim1蛋白表达也显著增高(P<0.05);SMI-4a干预和siPim1转染Raw264.7细胞,显著抑制LPS诱导的Pim1和iNOS表达(P<0.05或P<0.01)。与CM^(M0)相比,CM^(M1)显著上调HUVEC中ICAM1和VCAM1蛋白表达(P<0.05或P<0.01);CM^(SMI-4a)和CM^(siPim1)均显著抑制了HUVECs中ICAM1和VCAM1表达(P<0.01)。动物实验水平,建模后结扎侧左颈动脉可见脂质沉积,有AS斑块形成,血管壁iNOS表达显著增多(P<0.01),Pim1、ICAM1和VCAM1蛋白表达上调(P<0.05)。SMI-4a干预后,与模型组相比,左颈动脉脂质沉积被抑制,Pim1和iNOS表达显著降低(P<0.05或P<0.01),血管内皮标志物VE-cadherin蛋白水平升高(P<0.05),同时ICAM1和VCAM1蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:抑制Pim1可以抑制ApoE^(-/-)小鼠AS斑块形成,其机制可能与减少巨噬细胞M1型极化,降低内皮细胞炎症反应有关。

切应力通过AQP1调节内皮细胞迁移、增殖和血管生成

目的水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)参与内皮细胞的迁移、增殖和血管生成等过程。探讨层流切应力是否通过AQP1调节内皮细胞迁移、增殖和血管生成以及可能的机制。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。

层流切应力通过Pim1/PFKFB3调节内皮细胞糖酵解

目的代谢酶PFKFB3是内皮细胞糖酵解途径的关键调节基因。丝/苏氨酸蛋白激酶Pim1参与细胞糖酵解过程。探讨层流切应力是否通过Pim1/PFKFB3途径调节内皮细胞糖酵解。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞,运用平行平板流体腔系统给内皮细胞施加层流切应力(1.5 Pa),1 h,以静止培养为对照。用Lip3000转染过表达质粒和特异性小干扰RNA(siRNA)分别建立Pim1和PFKFB3过表达和敲低的内皮细胞。

流体剪切应力对人脐静脉内皮细胞Pim-1基因表达的影响

目的探讨流体剪切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中Pim-1基因表达的影响及可能的信号机制。方法酶消化法分离健康产妇新鲜脐静脉获取原代HUVECs,应用平行平板流动腔系统给HUVECs加载不同时间(1、4、6 h)和不同大小(0.5、1.5、3.0 Pa)的层流剪切应力,用实时定量RT-PCR检测Pim-1基因的表达水平,用蛋白质印迹法检测p-Akt和p-STAT3的表达水平,利用Wortmannin(PI3K抑制剂)、Deguelin(Akt抑制剂)和AG490(JAK抑制剂)信号阻断剂探讨信号转导途径。结果 HUVECs在1.5 Pa剪切应力作用4 h后Pim-1基因表达明显增加。不同强度的切应力均会刺激Pim-1基因的表达,其中3.0 Pa表达最强。切应力能显著激活p-Akt和p-STAT3的表达。AG490可以明显抑制Pim-1的表达,而Wortmannin和Deguelin增强Pim-1的表达。结论流体剪切应力可诱导HUVECs中Pim-1基因表达,其表达量与刺激时间和剪切应力的强度密切相关,这种作用可能通过JAK/STAT3和PI3K/Akt信号通路调节。

AQP1通过Akt/eNOS调节层流切应力诱导的人脐静脉内皮细胞血管生成

切应力诱导的内皮细胞血管生成(angiogenesis)在内皮损伤修复中有重要作用,水通道蛋白1(AQP1)与血管生成密切相关,本研究探讨AQP1是否可通过调节Akt/eNOS信号通路,从而调节层流切应力诱导的内皮细胞血管生成。

L-鸟氨酸盐酸盐碳点的制备及其在细胞成像中的应用

目的:以L-鸟氨酸盐酸盐探索制备新型碳点,并研究其在细胞成像领域的应用。方法:以L-鸟氨酸盐酸盐为碳源,利用一步水热法,制备出碳点,通过高分辨率透射电镜(HRTEM)、紫外-可见吸收光谱、荧光光谱和傅里叶红外光谱(FTIR)等方法对碳点的大小、形貌和光学性能进行表征;MTT法检测碳点的细胞毒性,荧光显微镜观察碳点对肿瘤细胞A549成像能力。结果:L-鸟氨酸盐酸盐碳点具有水溶性好,粒径均一,荧光性质稳定,细胞毒性低等优点,并能用于A549细胞荧光成像。结论:L-鸟氨酸盐酸盐碳点具有优良的光学性质,有望应用于细胞成像领域。