阿魏侧耳子实体多糖分离纯化及其化学结构的初步研究

对阿魏侧耳子实体多糖的分离纯化及其级份PW2的化学结构进行了初步研究。阿魏侧耳子实体经热水提取醇沉得粗多糖PW。将PW用Sevag法脱蛋白后,去离子,层析,分级分离得3种多糖级份PW1、PW2和PW3,PW2经紫外光谱鉴定不含有蛋白质和核酸;采用纸色谱和高压电泳以及柱色谱分析结果表明多糖PW2满足结构分析的要求。测定其分子量为3.18×104。PW2经过完全酸水解后,测定多糖是由葡萄糖和半乳糖两种单糖组成,摩尔比例为1.77∶1。通过红外光谱,核磁共振测试分析,初步确定多糖PW2主要以α构型为主,含有少量β构型,单糖的连接方式主要以1-6连接为主链,含有1-4连接的支链,糖环构型为D-吡喃糖环。

纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilisnatto)为出发菌株,研究了其液体发酵产生纳豆激酶(Nattokinase,NK)的培养基组成(碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成)和培养条件(温度、初始pH值、发酵时间、接种量和装液量)对产酶量的影响。结果表明,液体发酵培养基的最佳碳源为麦芽糖,浓度为1.0%;最佳氮源为大豆蛋白胨,浓度为2.0%;添加无机盐组分为MgSO40.05%、CaCl20.02%、KH2PO40.4%。优化发酵培养条件如下:种龄为18h,发酵周期为72h,温度为37℃,初始pH值为7.2,装液量为20mL/100mL,接种量为2.0%。通过优化培养基和发酵条件,NK酶活性达到2100IU.mL-1。

纳豆激酶羟丙基-β-环糊精包合物的制备和鉴定

通过液体发酵、分离纯化生产高纯度纳豆激酶,制备和鉴定纳豆激酶-HP-β-CD包合物,并考察包合物的制备工艺与表征等。采用水溶液搅拌法辅助微波制备纳豆激酶HP-β-CD包合物,采用差热分析、酶活测定等方法对包合物进行鉴定。得到纳豆激酶-HP-β-CD的合格产品。纳豆激酶HP-β-CD包合物制备工艺简单,包合物水溶性强,稳定性高,适合制成注射制剂。