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短小芽孢杆菌木聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 被引量:12
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作者 江正兵 宋慧婷 马立新 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期50-55,共6页
将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组... 将短小芽孢杆菌HB0 30的内切 1,4 木聚糖酶基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9k上 ,得到重组质粒pH BM2 2 0 ,将pHBM2 2 0经酶切后分别转化三株毕赤酵母KM71、GS115、SMD116 8,该木聚糖酶基因在三株毕赤酵母中均实现了分泌表达。将重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )、GS115 (pHBM2 2 0 )、SMD116 8(pHBM2 2 0 )分别诱导产酶 ,对重组酶进行相关的酶学性质分析表明 ,三者的最适反应pH值约为 5 5 ,最适反应温度约为 6 0℃。在其最适反应条件下测得三者粗酶液酶活分别为 10 80IU mL ,11 6 3IU mL ,9 6 8IU mL。重组毕赤酵母KM71(pHBM2 2 0 )所产酶的热稳定性较好 ,而在pH稳定性方面三者没有太大的差异。 展开更多
关键词 短小芽孢杆菌 木聚糖酶基因 分泌表达 酶学性质 毕赤酵母
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灵芝(Ganoderma lucidum)漆酶基因的克隆及其序列分析 被引量:7
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作者 张银波 江木兰 +2 位作者 胡小加 张桂敏 马立新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期700-704,共5页
The oxidizing enzyme laccase produced by many fungi is generally considered to be active in the biodegradation of lignin, a major plant cell wall component highly resistant to microbial attack. Using degenerate primer... The oxidizing enzyme laccase produced by many fungi is generally considered to be active in the biodegradation of lignin, a major plant cell wall component highly resistant to microbial attack. Using degenerate primers and molecular techniques such as genome-walking and RT-PCR, a laccase gene and its corresponding cDNA were cloned from Ganoderma lucidum. The coding region of the genomic laccase sequence, which is preceded by the eukaryotic promoter elements TATA and CAAT, spans more than 2107 bp. The corresponding laccase cDNA was identical to the genomic sequence except for 9 introns that were 51-78 bp long. Sequence analysis indicated that the G. lucidum lccGl product has 10 potential N-glycosylation sites (Asn-Xxx-Ser/Thr) and four conserved fungi laccase amino acids signature sequences. The G. lucidum laccase sequence is most similar to the sequence of the laccase from Flammulina velutipes (similarity 73%). 展开更多
关键词 灵芝 漆酶基因 基因克隆 基因序列 氨基酸
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植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析 被引量:4
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作者 黄生平 汪昌丽 +1 位作者 张桂敏 马立新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期280-284,共5页
根据已发表的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因序列设计并合成引物,应用PCR技术,分别以土曲霉总DNA和质粒pHBM1201为模板,扩增出均不含假定信号肽序列的植酸酶基因phyA和甘露聚糖酶基因man,将它们各自克隆到毕赤酵母表达载体pHBM907C上,分别... 根据已发表的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因序列设计并合成引物,应用PCR技术,分别以土曲霉总DNA和质粒pHBM1201为模板,扩增出均不含假定信号肽序列的植酸酶基因phyA和甘露聚糖酶基因man,将它们各自克隆到毕赤酵母表达载体pHBM907C上,分别得到重组质粒pHBM907C-phyA和pHBM907C-man。将质粒pHBM907C-phyA上由乙醇氧化酶(AOX1)启动子和终止子引导表达、酿酒酵母α信号肽序列引导分泌的phyA表达盒式结构插入到质粒pHBM907C-man中,构成双基因表达分泌质粒pHBM907C-phyA-man。pHBM907C-phyA-man经SalⅠ酶切线性后转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115,获得了同时分泌表达植酸酶和甘露聚糖酶的双功能酵母工程菌。研究了该酵母工程菌所分泌表达的重组植酸酶和甘露聚糖酶的相关酶学性质,并进行了双功能酵母工程菌的稳定性测试。 展开更多
关键词 植酸酶 甘露聚糖酶 毕赤酵母 共表达
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一种新型巴斯德毕赤酵母表达载体的构建及甘露聚糖酶的表达
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作者 黄生平 汪昌丽 马立新 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期220-223,共4页
目的:构建以带自身启动子的蔗糖转化酶基因(suc2)为选择标记的载体,用于外源基因在巴斯德毕赤酵母中的正确分泌表达。方法:根据已发表的蔗糖转化酶基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术,以啤酒酵母INVSC1总DNA为模板,扩增出包含自身... 目的:构建以带自身启动子的蔗糖转化酶基因(suc2)为选择标记的载体,用于外源基因在巴斯德毕赤酵母中的正确分泌表达。方法:根据已发表的蔗糖转化酶基因序列设计并合成1对引物,应用PCR技术,以啤酒酵母INVSC1总DNA为模板,扩增出包含自身启动子和终止区序列的suc2基因。将该基因与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,构建了以suc2为选择标记的表达载体pPIC12K。将甘露聚糖酶基因man克隆入载体pPIC12K,用PEG/LiCl法转化毕赤酵母GS115菌株。以蔗糖为惟一碳源筛选转化子,利用底物平板检测筛选到的转化子中man基因的表达,并对重组表达菌株进行连续传代实验。结果:部分转化子周围产生明显的水解圈,证明甘露聚糖酶已经得到分泌表达;对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性。结论:以带自身启动子的suc2基因为选择标记的表达载体构建成功,并且这个新型表达载体能够对外源基因进行稳定有效的分泌表达。 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 表达载体 蔗糖转化酶基因 甘露聚糖酶 表达
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