结核杆菌Ag85B与ESAT-6双顺反子真核表达质粒的构建及体外表达

目的 构建结核杆菌Ag85B与ESAT 6双顺反子真核表达质粒。方法 采用PCR的方法从结核杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出Ag85B及ESAT 6基因 ,将其分别定向克隆入真核双表达载体pIRES ,构建同时表达两个目的基因的双顺反子重组质粒。进行酶切分析及序列测定后 ,用脂质体包裹体外转染A5 4 9细胞 ,RT PCR检测Ag85B及ESAT 6的表达。结果 核酸序列测定证实重组质粒构建正确 ;该重组质粒能在体外表达Ag85B及ESAT 6mRNA。结论 成功构建了结核杆菌Ag85B及ESAT 6双顺反子真核表达质粒 ,并在体外实现了共表达 。

结核分枝杆菌Ag85B与IL-2基因双顺反子真核表达质粒的构建及体外表达

目的:构建结核分枝杆菌Ag85B与白细胞介素2(IL-2)双顺反子真核表达质粒。方法:以结核杆菌H37Rv基因组DNA为模板,通过PCR扩增出Ag85B基因。采用亚克隆的技术从pcDNA3.1-IL-2中获得小鼠IL-2基因的cDNA片段。将两者分别定向插入真核双表达载体pIRES,构建表达两个目基因的双顺反子重组质粒,然后用脂质体包裹体外转染A549细胞,RT-PCR检测Ag85B及IL-2的表达。结果:酶切分析及序列测定证实重组质粒构建正确;该重组质粒能在体外表达Ag85B及IL-2 mRNA。结论:成功构建了结核杆菌Ag85B及IL-2基因双顺反子真核表达质粒,为进一步在整体动物水平的实验研究奠定了基础。