Wee1基因修饰细胞抗CTL诱导的凋亡效应

目的 研究Wee1转基因细胞抗CTL介导的凋亡效应及抗穿孔素抗体的对此抗凋亡效应的影响。方法 采用DNA转染技术将重组体Wee1Hu GFP导入哺乳动物细胞NIT(鼠胰岛细胞瘤细胞 ) ;以转染重组体前、后的NIT为靶细胞 ,采用ELISA凋亡试剂盒检测CTL介导的凋亡效应。结果 转染Wee1及加入抗穿孔素抗体的NIT组发生凋亡的细胞数最少。结论 Wee1基因转染靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞凋亡 ,而穿孔素抗体可协同增强此抗凋亡效应。

FADDdel-GFP真核表达载体的构建及其抗细胞毒效应初步观察

目的 构建融合蛋白FADDdel GFP真核表达载体 pFADDdel GFP ,用该融合基因转染小鼠胰岛瘤细胞 (NIT) ,从而抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导 ,以探讨IDDM的发病机制及防治措施。方法 采用基因重组技术将FADDdel定向连接于真核表达载体 pEGFP N1 ,用脂质体将重组子pFADDdel GFP导入哺乳动物细胞NIT并检测其表达 ,采用FACS和MTT法检测特异性T细胞对转染重组子NIT引起的细胞毒效应。结果 转染重组子 pFADDdel GFP的NIT可见绿色荧光蛋白表达 ;pFADDdel GFP转染的NIT对特异性T细胞介导的细胞毒有明显抵抗。结论 成功构建 pFADDdel GFP融合基因并获稳定表达 ;pFADDdel GFP转染NIT可有效抑制死亡受体介导的细胞内凋亡信号传导。