滇楸叶斑病病原菌的生物学特性及其抑菌药剂筛选

为明确滇楸叶斑病病原菌（Glomerella cingulata）的生物学特性和选用最适抑菌剂,对不同条件下的病原菌菌丝生长进行了观察和室内药剂平板筛选。结果表明：该病原菌菌丝生长的适温为21~28℃,致死温度为45℃,在pH 4~7的范围内生长良好,碳源和氮源分别以蔗糖和硝酸钠为宜;在供试5种药剂中,10%苯醚甲环唑抑菌效果最好,在质量浓度1.00mg/mL时相对抑菌率为93.6%;45%石硫合剂抑菌效果最差,在质量浓度6.70mg/mL时相对抑菌率仅为13.4%。

核桃内生菌与病原真菌的体外互作研究

为挖掘核桃内生菌的生物防治潜能。对核桃的内生菌和病原菌进行了分离,并通过平板对峙和发酵液抑菌试验,对其体外互作进行了研究。结果发现3株核桃内生细菌XHE7、XHE8和XHE12对2种病原真菌HK2(Colletotrichium sp.)和HD1(Alternaria sp.)有拮抗作用,抑制率高达82%。其发酵液对HK2的抑制作用高达100%。对其中2株拮抗作用明显的细菌进行了生理生化和16S rDNA分子鉴定,初步确定XHE8和XHE12皆为芽孢杆菌(Bacillus sp.)。

香葱灰霉病病原鉴定及其生物学特性研究

为明确香葱灰霉病病原及其生物学特性,采用单孢分离法分离香葱灰霉病病原菌,依据病原菌形态特征及r DNA-ITS序列分析结果,鉴定香葱灰霉病病原为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea Pers.),同时对其生物学特性进行研究。结果表明:病原菌在供试的10种培养基上均能生长,最适宜培养基为PDA培养基;供试的9种碳源和11种氮源中,最利于病原菌菌丝生长的碳源为可溶性淀粉,氮源为酵母粉;在pH值为4.0~12.0条件下,病原菌都能生长,最适pH值为5.0~6.0;病原菌在4~30℃均能生长,适合病原菌菌丝生长的温度为15~25℃,25℃时病原菌菌丝不仅生长快且非常浓密,温度高于30℃菌丝停止生长;菌丝致死温度是52℃(10 min)。

1株油茶病害拮抗真菌的鉴定、生物学特性及拮抗作用研究

为了给油茶病害的生物防治提供科学依据,从油茶根部土壤分离获得1株能拮抗油茶主要病害的真菌F217-3。依据该菌株的形态特征,并结合全自动微生物鉴定系统及r DNA-ITS序列分析,将其鉴定为草酸青霉（Penicilium oxalicum）。对其生物学特性研究结果表明：该菌株在查氏培养基上生长最佳,碳源和氮源分别以蔗糖和尿素最适宜,生长适温为28℃,致死温度为65℃,在p H值为3~10条件下均生长良好,其中最适p H值是4~7,通气与否对菌丝生长无明显影响,但光照24 h条件下菌丝生长较差。平板对峙试验结果表明,F217-3对油茶炭疽病菌（C.nicotianae）、油茶软腐病菌（A.camellia）、黑斑病菌（A.alternate）和溃疡病菌（B.dothidea）的抑菌率均达到90%以上,可抑制油茶胶孢炭疽病菌、黑斑病菌分生孢子产生,抑制或致畸油茶炭疽病菌、溃疡病菌和叶斑病菌菌丝,是一株具有广谱拮抗作用的生防菌株。

菠萝皮可溶性膳食纤维提取工艺的研究

为了提高菠萝的综合利用水平,以菠萝皮为原料,采用纤维素酶水解法从菠萝皮中提取可溶性膳食纤维,以单因素试验为基础,对正交试验的工艺参数进行优化。结果表明:菠萝皮可溶性膳食纤维最佳的提取工艺条件为:纤维素酶浓度0.7%、料液比1∶30、酶解温度60℃、浸提4次、pH 5.6、酶解时间75 min;在此工艺条件下,可溶性膳食纤维的提取率可达23.89%;膳食纤维的持水力为11.86 g/g,溶胀性为15.5 mL/g,持油力6.94 g/g。此结果表明菠萝皮膳食纤维具有良好的理化性能。

钙处理对鄂北冬枣采后生理和贮藏品质的影响

以鄂北冬枣为试验材料,在低温条件下分别采用0.5%、1.0%、1.5%的CaCl2溶液对果实进行浸泡处理,研究CaCl2处理对鄂北冬枣采后生理和贮藏品质的影响。结果表明,与对照相比,钙处理抑制了采后冬枣果实的可溶性固形物含量、可滴定酸含量、维生素C含量和硬度的下降,钙处理的果实其呼吸速率和丙二醛(MDA)活性较对照降低,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性较对照提高,从而延缓了果实成熟衰老进程,较好地保持了果实的品质。CaCl2溶液3个浓度处理中,以1.5%CaCl2溶液处理效果较好。

菠萝皮可溶性膳食纤维碱法提取工艺的优化

以菠萝(Ananas comosus L.)皮为原料,采用碱法提取可溶性膳食纤维。通过设计单因素试验分别考察了料液比、浸提温度、浸提液pH、浸提时间4个因素对菠萝皮可溶性膳食纤维提取率的影响,并在此基础上,采用正交试验优化菠萝皮可溶性膳食纤维的提取工艺。结果表明,菠萝皮可溶性膳食纤维的优化工艺为料液比1∶20(m/V,g∶mL)、浸提温度80℃、浸提液pH 12、浸提时间90 min,在此条件下,菠萝皮可溶性膳食纤维的提取率可达23.58%,所得膳食纤维的持水力和溶胀性分别为11.59 g/g和14.7 mL/g。

改性香蕉皮对六价铬的去除研究

用硝酸和异丙醇改性处理香蕉皮,并在静态条件下探讨了吸附剂用量、吸附时间、pH、温度对废水中Cr(Ⅵ)吸附效果的影响。结果表明,硝酸和异丙醇改性处理的香蕉皮在Cr(Ⅵ)初始浓度为100μg/m L、pH为1.5,吸附时间为90 min、吸附剂用量分别为0.100和0.050 g/L、温度为30℃、转速为200 r/min的条件下能够获得良好的吸附效果,对Cr(Ⅵ)的吸附量分别可达24.198、49.695 mg/g;二者的吸附过程均符合准二级动力学方程。

响应面优化酶法提取黑胡萝卜色素的工艺研究

以干燥的黑胡萝卜粉为原料,在单因素试验的基础上,选取液固比、p H值和浸提次数为自变量,色素提取率为响应值,根据响应面Box-Benhnken试验设计原理,采用三因子三水平的分析法模拟得到二次回归方程的预测模型,优化黑胡萝卜色素酶法提取工艺。结果表明,建立的回归模型具有高度显著性,方程对试验拟合度好,适用于黑胡萝卜色素提取率的预测;各因子对提取率的影响程度依次为:浸提次数>p H值>液固比;二次项对黑胡萝卜色素提取的影响都达到了极显著水平;但响应面分析图表明各因素之间的交互作用均不显著;在纤维素酶浓度0.5%、浸提温度50℃的条件下,纤维素酶辅助提取黑胡萝卜色素的最佳工艺条件为:液固比30∶1,p H值3.9,浸提次数2次。黑胡萝卜色素提取率的实际值为0.9485 mg/g,与模型预测值0.9508 mg/g没有显著差异。

离子色谱法对茶汤中阴离子溶出的测定研究

应用离子色谱仪测定了砖茶和花茶中4种阴离子的含量。采用不同制备方式,研究放置不同时间后茶汤中F-、Cl-、NO3-和SO42-的含量及浸出率的动态变化。结果显示,花茶中Cl-、NO3-和SO42-含量均显著高于砖茶,分别为砖茶的5.30、1.60和3.92倍。随着放置时间延长,所试阴离子在茶汤中的含量显著增加,5 h后趋于稳定甚至有所下降。

氮形态对油菜苗期生长的影响

为油菜的合理施肥提供依据,以甘蓝型油菜中双8号为对象,通过营养液培养试验,在同一氮水平下设置5种不同的硝铵比,研究不同氮形态对油菜幼苗株高、根长、鲜重、生物量及叶绿素含量等指标的影响。结果表明,供应两种形态氮素比单一形态氮素更有利于油菜生长发育以及提高产量;硝铵比75/25的处理生长状况最好;硝铵比超过75/25时,随着营养液中NH4+比例升高,幼苗各项指标显著降低。

核桃细菌性疫病菌的特性及其与核桃内生菌的竞争

为了明确从湖北省丹江口市核桃病幼果上分离到的一株核桃细菌性疫病菌DW3F3的基本形态、生理生化特性、致病性相关特征以及与寄主内生菌的互作关系,对该病原菌进行了显微观察、生物膜形成测定,不同培养基上多糖和色素含量测定,18项生理生化指标测定,通过毛细管法和滴落法观察其趋化作用,并测试其与寄主内生菌的竞争能力。结果表明,病原菌DW3F3为杆状,极生鞭毛,有运动性,能形成生物膜。DW3F3在YPGAI、King's B和NA培养基上生长较好,而在NYG、PDA和LB培养基上产生多糖和色素较多。DW3F3有较强的耐盐性,致死温度达60℃,对纤维素和淀粉都有较强的分解能力,对HCl、NaCl和寄主叶片表现出一定的趋性。在与核桃叶部内生菌的共培养中,DW3F3表现出一定竞争优势。DW3F3有树生黄单胞菌核桃致病变种(Xanthomonas arboricola pv.juglandis,Xaj)的基本特征及致病相关特性,这些特征可能与其致病性强及病害难以控制有关。

木瓜斑点落叶病菌生物学特性及室内药剂筛选

对木瓜(Chaenomeles sinensis)斑点落叶病致病菌冠盘二胞(Marssonina coronaria)的生物学特性及其室内药剂防治进行了研究。结果表明,病菌生长的最适培养基为PDA,在p H为7.0、碳源和氮源分别为可溶性淀粉和尿素、光照条件光/暗为12 h/12 h的条件下生长最好;菌丝致死温度为45℃。在供试的9种药剂中,多菌灵的抑菌效果最好,其EC50为8.78 mg/L,在浓度1.0 mg/L条件下,相对抑菌率达85.0%,代森锰锌效果最差,在浓度1.67 mg/L条件下,相对抑菌率仅为40.8%。

二化螟APN1的原核表达及其与Cry2Aa蛋白的结合特性研究

【目的】Bt杀虫蛋白发挥杀虫活性的重要前提是Cry蛋白能够与昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜囊(BBMVs)上的受体蛋白结合。在前期获得二化螟氨肽酶N1(Aminopeptidase N,APN1)基因全长序列的基础上,明确二化螟APN1多肽片段与Cry2Aa的结合能力。【方法】将二化螟APN1序列片段在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,利用蛋白质单向电泳和ligand blotting技术分析二化螟APN1多肽片段与Cry2Aa的结合能力。【结果】重组载体可在表达菌株BL21(DE3)中表达一个约70 ku的蛋白,纯化后的多肽条带单一,纯度较好。Ligand blot分析结果显示,表达的二化螟APN1多肽片段可以与活化的Cry2Aa杀虫蛋白结合,且结合条带随着重组蛋白上样量的降低而减弱。【结论】APN1多肽片段可以与Cry2Aa结合,为阐明APN1基因的功能奠定基础,也为其他Bt蛋白的受体蛋白相关研究提供新的借鉴。

白睡莲黑斑病菌的生物学特性及室内防治药剂筛选

从白睡莲黑斑病叶上分离获得1株真菌SL-1512,对其完成致病性测定,依据病原菌形态特征结合rDNA-ITS序列分析,将其鉴定为草茎点霉(Phoma herbarum);为明确该病原菌的生物学特性和最佳的室内抑菌药剂,对不同条件下病原菌菌丝的生长情况展开分析和进行室内药剂平板筛选。结果表明,马铃薯葡萄糖培养基(PDA)和马铃薯蔗糖培养基(PSA)均适合该菌株的生长,碳源和氮源以葡萄糖和蛋白胨较适宜,生长适温为28℃,致死温度为55℃,在pH值4~10条件下均生长良好,其最适p H值为5~7,通气及光照对草茎点霉菌丝生长均无显著性影响;在供试的3种药剂中,代森锰锌抑菌效果最好,在质量浓度1 000 mg/L时相对抑菌率为97.1%,EC50为1.2 mg/L。

兰花茎腐病拮抗菌HJ-5的筛选和生防潜力评估

为给兰花茎腐病的绿色防控提供新的微生物资源,从湖北省孝感市健康的兰花幼苗根围土壤中分离筛选拮抗菌,并评估其生防潜力。结果表明,分离到8株对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)生长具有良好抑制作用的拮抗菌。16S rDNA测序比对和系统发育树构建表明,这8株拮抗菌均为芽孢杆菌属(Bacillus)。其中,巨大芽孢杆菌(B.megaterium)HJ-5在平板对峙中对尖孢镰刀菌具有较好且稳定的拮抗作用,将其无菌发酵液以5%添加到PDA培养基制成的带毒平板,可抑制灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)、炭疽菌(Colletotrichum siamense)、镰刀菌(F.moniliforme,F.oxysporum)、桃褐腐菌(Monilia fructigena)、毛霉菌(Mucor hiemails)、根霉菌(Rhizopus stolonifer)、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)和白绢菌(Sclerotium rolfsii)的菌丝生长,抑菌率均高于50%。HJ-5无菌发酵液在高温、强酸碱和长时间紫外线照射条件下仍能保持一定的抗真菌活性。此外,在HJ-5的基因组中扩增到了抗菌物质表面活性素、丰原素的生物合成关键基因sfp和fenB。上述结果表明,巨大芽孢杆菌HJ-5对兰花茎腐病具有良好的生防潜力。

水杨酸对盐胁迫下豇豆幼苗生长发育的影响

在300mmol／LNaGl胁迫条件下，研究了水杨酸对豇豆[Vigna unguiculata（L．）Walp]幼苗生长发育的影响。结果表明，经水杨酸处理的豇豆幼苗株高、茎粗明显提高，促进了幼苗的形态构建。并且幼苗的超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性均显著高于对照，丙二醛含量和电解质渗透率显著或明显降低；水杨酸在适宜的施用浓度范围内能够缓解豇豆幼苗的盐害症状，提高抗盐能力。对豇豆幼苗的生长有一定的促进作用，当水杨酸的处理浓度为100～150mg／L时，作用效果最明显。

由核桃疫病果实上分离的一株栖稻假单胞菌YKW14

【目的】对一株来自云南昆明核桃疫病幼果上的细菌YKW14进行生理生化特性和分子鉴定。【方法】通过传统的细菌显微形态观察,不同培养基生长状况比较,生理生化特性测定,抗药性及冰核活性测试,结合16S-rDNA和gyrB基因序列比对分析,用MEGA7.0构建进化发育树对菌株进行鉴定。【结果】菌株YKW14在LB培养基平板生长良好,在含2%氯化钠的培养基上不能生长,致死温度为55℃。该菌株对石硫合剂、稻瘟灵和戊唑醇有抗性,对壮观霉素、卡那霉素和氨苄青霉素钠也表现出抗性,而对头孢无抗性。菌株的16S-rDNA和gyrB基因序列与NCBI中的栖稻假单胞菌同源性和相似性为100%。结合形态、生理生化特性和基因序列,将菌株YKW14鉴定为栖稻假单胞菌Pseudomonas oryzihabitans。【结论】栖稻假单胞菌为首次在核桃疫病幼果上分离报道。该菌可能为核桃果实疫病的复合侵染病原菌之一,其致病性或在疫病发生中的作用有待进一步验证。

基于小龙虾田间分布的稻虾共生机制探究

为探究稻虾共生机制,运用地笼捕获法研究了小龙虾分别在高频分布采样区(GP)、低频分布采样区(DP)和无虾对照区(CK)的田间分布特征,结合稻田土壤性状、病虫草害调查和稻谷产量性状分析,研究稻虾共作模式的生态效应。结果显示:小龙虾稻田分布数量与田面水深呈显著正相关关系,一元线性回归方程为y=197.69x-25.77;小龙虾高频分布可以改善土壤结构,显著降低0~10 cm土壤容重6.25%~11.76%,显著增加0~10 cm土层总毛管孔隙度8.08%~10.78%(P<0.05);小龙虾高频分布显著增加0~10 cm土壤有机质含量6.24%~10.30%,显著增加0~20 cm土层的土壤微生物生物量碳(P<0.05),并能显著抑制杂草生长;小龙虾不同分布频度对病虫害和水稻产量及其构成因子无显著影响,但水稻产量随着分布频度的加大具有增加的趋势。因此,生产和科研上可适当区分小龙虾不同分布频度(水深)进行管理和研究,促进稻虾生态种养绿色可持续发展。

二化螟钙黏蛋白CAD1的原核表达及与Cry1Ac、Cry2Aa蛋白的结合

【目的】二化螟是水稻的重要害虫之一,钙黏蛋白(cadherin,CAD)是一类重要的Bt杀虫蛋白受体,在获得二化螟钙黏蛋白基因(Cs CAD1)的基础上,明确Cs CAD1蛋白与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的结合能力。【方法】利用PCR技术克隆Cs CAD1基因片段,将构建的p ET-28a-(+)-Cs CAD1重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。目的蛋白经Ni柱亲和纯化后SDS-PAGE电泳检测,利用western blot和ligand blot技术分析其与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的结合能力。【结果】重组载体可在表达菌株BL21中表达一个约44 ku的蛋白,原核表达载体构建成功。SDS-PAGE显示该蛋白条带单一,且纯度较好。Ni柱亲和层析纯化该目的蛋白后进行Ligand blot分析,结果显示Cs CAD1重组蛋白可以与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白结合。【结论】Cs CAD1蛋白可以与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白结合,是潜在的Cry蛋白受体,所得结果有助于阐明Cry1Ac和Cry2Aa蛋白对二化螟的作用机制。