微小RNA-199a对人胚肺成纤维细胞表型转化的抑制作用机制研究

目的探讨微小RNA-199a(miR-199a)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)向肌成纤维细胞转化的作用及机制。方法将细胞分为6组:对照组、模型组(5 ng·mL^-1的TGF-β1诱导HELF细胞72 h)、第1转染组(转染150 nmol·L^-1的inhibitor NC质粒)、第2转染组(转染150 nmol·L^-1的miR-199a inhibitor质粒)、第3转染组(转染inhibitor NC质粒+TGF-β1诱导)和第4转染组(转染miR-199a inhibitor质粒+TGF-β1诱导)。用实时荧光定量-PCR法检测细胞中miR-199a基因的表达(2^-△△Ct值),以蛋白质印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CollagenⅠ、磷酸化-丝氨酸/苏氨酸激酶(p-Akt)和磷酸化-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平(灰度值)。结果对照组、模型组、第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组的miR-199a表达水平分别为0.99±0.00,4.73±0.29,0.93±0.12,0.37±0.01,4.52±0.22和0.31±0.08,模型组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。模型组、第3转染组和第4转染组的α-SMA蛋白表达水平分别为0.58±0.13,0.58±0.10和0.36±0.03;这3组的CollagenⅠ蛋白表达水平分别为0.50±0.05,0.49±0.07和0.29±0.04;这3组的p-Akt(S473)/Akt蛋白表达水平分别为0.60±0.15,0.59±0.16和0.30±0.09;这3组的p-mTOR/mTOR蛋白表达水平分别为0.74±0.02,0.74±0.04,0.49±0.06,上述指标:第4转染组与第3转染组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论miR-199a促进TGF-β1诱导的HELF细胞向肌成纤维细胞的转化,其机制可能与miR-199a激活PI3K/Akt/mTOR通路有关。