托烷司琼对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用与机制

目的托烷司琼是一种选择性α7nAchR激动剂药物,具有抑制炎症反应与细胞凋亡的作用。文章旨在探讨托烷司琼对缺氧/复氧(H/R)后H9C2心肌细胞损伤的保护作用与机制。方法将培养好的H9C2心肌细胞,按实验方案分组:正常组(不予处理,正常培养)、溶剂对照组(加托烷司琼培养18 h,终浓度为10 nmol/L)、缺氧/复氧组(缺氧12 h,复氧6 h)、托烷司琼组(缺氧/复氧前托烷司琼预处理1 h,终浓度为10 nmol/L)、MLA拮抗剂组(缺氧/复氧前MLA预处理2 h,终浓度为10 nmol/L)、托烷司琼+MLA拮抗剂组(缺氧/复氧前2 h加MLA,1 h后加托烷司琼,终浓度均为10 nmol/L),利用乳酸脱氢酶释放试验测定细胞乳酸脱氢酶活性,ELISA法测定细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的浓度,CCK-8法检测细胞增殖,细胞免疫荧光染色检测细胞Cleaved caspase-3表达量,Western blot法检测p-p38、p-pka与凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达水平。结果与正常组比较,缺氧/复氧组TNF-α、IL-1β和LDH浓度明显增加(P<0.01);与缺氧/复氧组比较,托烷司琼处理组TNF-α、IL-1β和LDH浓度明显减少(P<0.05)。托烷司琼组p-p38、Cleaved caspase-3表达(0.46±0.05,0.51±0.03)较缺氧/复氧组(0.62±0.05,0.67±0.05)下调(P<0.05),p-pka表达水平(0.38±0.06)较缺氧/复氧组(0.19±0.05)升高(P<0.05)。托烷司琼+MLA拮抗剂组Cleaved caspase-3蛋白表达(0.99±0.08)和p-p38蛋白表达(1.18±0.06)较托烷司琼组(0.75±0.08、0.93±0.11)均升高(P<0.05)。结论托烷司琼可通过激活α7nAchR抑制p38 MAPK信号通路减轻H9C2心肌细胞缺氧/复氧后炎症反应及细胞凋亡,进而起到心肌保护作用。

托烷司琼通过激活大鼠脊髓α7nAChR减轻慢性神经病理性疼痛和p38MAPK表达

目的:探索鞘内注射托烷司琼是否通过激活α7烟碱乙酰胆碱受体(alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor,α7nAChR)减轻坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)大鼠慢性神经病理性疼痛和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)表达。方法:体质量180~220 g的成年雄性SD大鼠,鞘内置管和模型成功后,采用随机数字表法分为5组(n=12只/每组):假手术组、神经损伤组、托烷司琼组、α7nAChR拮抗剂methyllycaconitine citrate组(MLA组)、MLA+托烷司琼组。假手术组仅暴露右侧坐骨神经,神经损伤组、托烷司琼组、MLA组、MLA+托烷司琼组均制备右侧坐骨神经损伤模型。模型建立后第14天分别鞘内给药,于不同时间点进行疼痛行为学观察和测试。给药1 h后处死大鼠取脊髓L4~6段,采用组织免疫荧光染色观察脊髓背角α7nAChR分布和表达情况,Western blot检测α7nAChR、p-p38和p38蛋白表达量变化。结果:与给药前相比,托烷司琼组和MLA+托烷司琼组给药后机械缩爪阈值(paw mechanical withdrawal threshold,PMWT)和辐射热缩爪潜伏期(paw thermal withdrawal latency,PTWL)都明显升高,MLA+托烷司琼组均较托烷司琼组低。给药前后MLA组PMWT和PTWL均无明显变化;α7nAChR荧光结果显示,与假手术组阳性面积相比,神经损伤组明显降低。托烷司琼组和MLA+托烷司琼组阳性染色都明显较神经损伤组升高;Western blot结果发现托烷司琼组和MLA+托烷司琼组α7nAChR蛋白表达较神经损伤组明显增高,而p-p38蛋白表达水平与神经损伤组相比均明显降低。各组p38蛋白表达水平均无明显差异。结论:鞘内注射托烷司琼可减轻SNI大鼠慢性神经病理性疼痛,α7nAChR拮抗剂MLA可一定程度阻断其疼痛减轻作用。其机制可能与托烷司琼选择性激活α7nAChR从而抑制p38MAPK信号通路有关。

托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响:与α7nAchR的关系

目的评价托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响及其与α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的关系。方法正常培养的H9C2心肌细胞,采用随机数字表法分成4组(n=6):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、托烷司琼+缺氧复氧组(Tro+H/R组)和α7nAchR拮抗剂MLA+托烷司琼+缺氧复氧组(MLA+Tro+H/R组)。除C组外,其余3组均采用缺氧12 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型。Tro+H/R组缺氧前1 h时加入托烷司琼,终浓度10 nmol/L;MLA+Tro+H/R组缺氧前2 h时加入MLA,1 h后加入托烷司琼,终浓度均为10 nmol/L。于复氧6 h时,采用荧光免疫双染caspase-1-AlexaFluor 488/DAPI法确定心肌细胞焦亡率,ELISA法检测上清液IL-1β和IL-18浓度,2,4二硝基苯肼显色法检测上清液LDH活性,Western blot法检测心肌细胞α7nAchR、NOD样受体蛋白-3(NLRP3)和caspase-1表达。结果与C组比较,H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度升高,NLRP3和caspase-1表达上调,α7nAchR表达下调(P<0.05);与H/R组比较,Tro+H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度降低,NLRP3和caspase-1表达下调,α7nAchR表达上调(P<0.05);与Tro+H/R组比较,MLA+Tro+H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度升高,NLRP3和caspase-1表达上调,α7nAchR表达下调(P<0.05)。结论α7nAchR参与了托烷司琼抑制缺氧复氧心肌细胞焦亡的过程。