去甲斑蝥素对食管癌细胞株Eca-109中hTERT的表达和PTPRO基因启动子甲基化影响的实验研究

目的探索去甲斑蝥素(NCTD)诱导食管癌细胞Eca-109对人端粒酶逆转录酶(hT ERT)表达和受体O型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRO)基因启动子甲基化的影响。方法 MTT比色法检测不同浓度(0、1、2、4、8、16μg/ml)NCTD及不同作用时间(12、24 h)对食管癌细胞Eca-109增殖的影响;TUNEL法配合激光共聚焦扫描显微镜检测NCTD+Eca-109组(实验组)和Eca-109组(对照组)细胞凋亡情况;甲基化特异性PCR(MSP)检测实验组和对照组中PTPRO基因启动子的甲基化状态,Western blotting检测实验组和对照组hT ERT蛋白的表达。结果 MTT检测显示,NCTD可抑制Eca-109细胞增殖,呈时间和浓度依赖性,不同作用时间和浓度的细胞增殖抑制率的差异有统计学意义(P<0.05);TUNEL法结合激光共聚焦扫描显微镜观察显示,实验组细胞内部结构发生剧烈的变化,较对照组细胞核染色质致密浓染,核形缩小;MSP检测显示,对照组PTPRO基因启动子发生明显甲基化;Western blotting检测显示,实验组hT ERT蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论NCTD对食管癌细胞Eca-109有细胞毒性,能够抑制细胞生长,其机制可能与下调hT ERT蛋白表达和PTPRO基因启动子去甲基化有关。

吉西他滨对食管癌Eca-109细胞株凋亡的影响及其调控机制

目的探讨吉西他滨(GEM)对食管癌Eca-109细胞株的凋亡及相关差异蛋白表达的影响及可能机制。方法MTT法检测GEM在不同浓度(1、2、4、8、16μg/ml)及不同时间(12、24 h)下对Eca-109细胞增殖的影响,并计算半数抑制浓度(IC_(50))。4. 26μg/ml GEM(处理组)处理Eca-109细胞,另设GEM未处理组,采用流式细胞仪检测24 h后两组凋亡情况;提取两组相应蛋白,采用双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定表达差异量较大的蛋白质点,确定蛋白质类型和功能; Western blotting检测两组培养12、24 h后ASC、Mcl-1和Bax-α蛋白的表达;透射电镜观察两组细胞线粒体超微形态结构的改变。结果 GEM对Eca-109细胞增殖抑制呈浓度和时间依赖性,12、24 h的IC_(50)分别为5. 13μg/ml和4. 26μg/ml;经GEM诱导Eca-109细胞凋亡的差异表达蛋白分别为Bax-α、ASC和Mcl-1。GEM处理组12、24 h后ASC和Bax-α表达水平均高于GEM未处理组,而Mcl-1表达量则相反,两组差异有统计学意义(P<0. 01)。透射电镜结果显示GEM处理组细胞线粒体的超微形态结构发生剧烈变化。结论 GEM能抑制食管癌细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过线粒体凋亡通路调节ASC、Mcl-1和Bax-α表达来实现的。