苦参碱对HT29细胞凋亡影响的实验研究

目的研究去苦参碱对HT29细胞的促凋亡活性及其与胞内[Ca2+]i浓度的关系。方法流式细胞术(FCM)及DNAladder法检测细胞凋亡;应用钙荧光指示剂Fluo-3/AM测定细胞内游离Ca2+浓度。结果 HT29细胞经苦参碱作用24h后,靶细胞的磷脂酰丝氨酸外化率显著高于对照组,其基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈典型的梯状带型;HT29细胞内游离Ca2+浓度进行性升高。结论苦参碱触发的HT29细胞凋亡与胞内游离Ca2+浓度升高密切相关。

PEG10表达与原发性肝癌预后相关性分析

目的检测PEG10在原发性肝癌(PHC)组织中表达的情况,探讨其与临床病理参数的关系及对肝癌预后的临床意义。方法应用免疫组织化学方法(SP法)检测58例PHC患者肝组织中PEG10的表达情况,并分析PEG10与PHC临床病理特征及预后的关系。结果 58份PHC标本中44份PEG10阳性,其中"+"16份、"++"13份和"+++"15份。平均随访时间为40.5 m,至随访结束时共有23例(39.7%)患者死亡;所有患者中位生存时间为31 m,PEG10表达为"-"、"+"、"++"、"+++"的中位生存时间分别为57、34、27和15 m,不同PEG10表达组间生存率差异有统计学意义(P=0.000);PEG10在女性、晚期病例、术前AFP>200 ng/mL、微血管侵犯、低分化肝癌患者肿瘤组织中表达更高(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤直径、病因无关(P>0.05);早期复发病例中PEG10阳性比例明显高于阴性(P<0.05),而晚期复发病例组间无明显差异(P>0.05)。PEG10预测PHC复发的诊断特异度77.5%,敏感度为38.9%,准确率为65.5%,多因素COX模型中AJCC分期、微血管侵犯、病因和PEG10表达是影响PHC预后的危险因素(P<0.05),其中PEG10阳性的HR达6.724。结论 PEG10对PHC预后具有很好的评估价值,但是其特异性高而敏感性不高,需要联合其他指标作出综合评价。

Peg10基因在黏着斑激酶介导的肝癌细胞耐药中的作用

目的初步探讨Peg10基因与黏着斑激酶(FAK)介导的肝癌细胞耐药(CAM-DR)的关系及分子机制。方法采用MTT法检测5-氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADR)对LO2细胞、ADR耐药的人肝癌细胞BEL-7404/ADR(7404/ADR)和Peg10基因沉默的siRNA-BEL-7404/ADR(siRNA-7404/ADR)细胞增殖的影响;建立7404/ADR和siRNA-7404/ADR裸鼠荷瘤模型,48只裸鼠随机分为6组,每组8只,A、C、D组注射7404/ADR细胞,B、E、F组注射siRNA-7404/ADR细胞;A、B组尾静脉注射生理盐水,C、E组给予5-Fu,D、F组给予尾静脉注射ADR,测量瘤块体积,RT-PCR检测Peg10基因的表达,Western Blot法检测PEG10、p-FAK、p-JNK、p-ERK和p38MAPK蛋白的表达。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果 ADR和5-Fu对siRNA-7404/ADR 24 h的IC50值均较7404/ADR的降低,差异均具有统计学意义(t值分别为7.641,7.560,P值均<0.01)。B、C、D组肿瘤体积较A组小,差异均有统计学意义(P值均<0.05),E、F组肿瘤体积较B组小,差异均具有统计学意义(P值均<0.01);E组与C组比较,F组与D组的肿瘤体积差异亦均有统计学意义(P值均<0.05)。B、E、F组Peg10的mRNA极少表达,C、D组Peg10的mRNA表达较A组有所降低。B组PEG10蛋白极少表达,与A组比较,差异具有统计学意义(P<0.01),其pFAK、p-JNK、p-ERK和p38MAPK蛋白表达与A组比较,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。C、D组PEG10、p-FAK、pJNK、p-ERK和p38MAPK蛋白的表达较A组均降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。E、F组p-FAK、p-JNK、p-ERK和p38MAPK蛋白表达与B组比较,差异均有统计学意义(P值均<0.01),而C组与E组、D组与F组相比,PEG10、p-FAK、p-JNK、p-ERK和p38MAPK蛋白的表达差异亦均有统计学意义(P值均<0.01)。结论 Peg10基因失活后可增加ADR耐药的BEL-7404细胞株对5-Fu和ADR的敏感性,其作用机制可能与其下调p-FAK、p-JNK、p-ERK和p38MAPK蛋白的表达有关。

苦参碱对体外诱导人结肠HT29细胞凋亡作用的实验研究

[目的]研究苦参碱（matrine，MA）对体外诱导人结肠癌HT29细胞的凋亡作用及其机制。[方法]不同浓度MA（0-32mg／m1）作用HT29细胞24h后，流式细胞仪检测细胞凋亡，线粒体跨膜电位检测试剂盒（3C-1）检测线粒体膜电位（Apm）变化，分光光度法检测caspase-3，9酶活性，Westernblot法检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2表达。[结果]MA显著诱导HT29细胞凋亡；16mg／mlMA作用HT29细胞24h后，caspase-9，-3酶活性明显升高；Westernblot结果显示：MA处理组促凋亡蛋白Pax表达明显升高，抗凋亡蛋白Bcl2表达明显降低。[结论]MA具有促进结肠癌细胞凋亡的作用，且具有剂量依赖性，其机制与线粒体凋亡途径有关。