动物启动子的研究策略

动物启动子是调控动物基因表达的重要元件,开展动物启动子的研究对于阐明基因表达调控机制具有重要意义。简要介绍了动物启动子的一般结构、研究启动子的意义及其克隆和功能分析方法,并对启动子生物信息学分析的网络资源工具进行了介绍,最后,对其发展前景进行了展望。

体细胞核移植技术生产转基因猪胚胎的研究

以转染绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,体外成熟卵母细胞为核移植受体构建绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,研究供核细胞的处理、注核部位及重构胚融合/激活时间对转GFP克隆胚早期发育的影响.结果显示,胎儿成纤维细胞血清饥饿与非饥饿培养10 d处理组,采用卵周间隙核移植重构胚的卵裂率(82.35%和79.07%)差异不显著(P>0.05);体外培养42～44 h卵母细胞进行胞质内和卵周间隙注核的重构胚胎,其卵裂率(81.11%和76.80%)差异不显著(P>0.05);将卵周间隙注射法构建重构胚在0～1 h,2～4 h和6～8 h进行融合/激活操作,前2组重构胚卵裂率(75.61%和83.07%)无显著差异(P>0.05),但显著高于第3组(60.00%)的卵裂率(P<0.05).

动物基因修饰的发展动态

基因修饰是改变动物生物性状的重要手段之一,其相关的方法和技术已逐步应用于医学、动物遗传育种、基因功能研究等方面,但在家畜育种过程中,基因修饰不应带标记基因,这就需要动物基因修饰技术得到进一步完善。因此,从转基因动物、体细胞克隆、转基因体细胞克隆、基因打靶及标记基因删除等方面,阐述了动物基因修饰的发展现状及发展趋势,为现代动物育种学的发展提供参考。

亮甲酚蓝对猪卵母细胞体外成熟及核移植胚胎发育能力的影响

试验旨在研究亮甲酚蓝(brilliant cresyl blue,BCB)染色对卵母细胞体外成熟及后期胚胎发育潜力的影响。本研究利用13、26、39、52μmol/L BCB对成熟培养前的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complexes,COCs)染色90min,比较各组卵母细胞的着色率、成熟率及孤雌激活胚胎和核移植胚胎的发育情况。结果表明,随着BCB浓度的增加,COCs着色率依次增加(20.00%、46.39%、51.66%和59.03%),但猪卵母细胞体外成熟率逐渐降低(74.03%、72.16%、70.53%和48.61%);不同浓度BCB染色后所得BCB+组卵的成熟率均明显高于BCB-组。试验结果发现,BCB浓度在26μmol/L时,经染色的COCs既有较高的着色率,且不影响其体外成熟的效率。基于此,研究选取26μmol/L BCB作为最佳浓度对猪卵母细胞进行染色筛选,然后进行体外培养、孤雌激活及核移植试验。结果显示,筛选的BCB+组卵母细胞的孤雌胚和核移植胚的卵裂率和囊胚率均显著高于BCB-组(P<0.05),而与对照组间无显著差异(P>0.05)。胚胎移植试验挑选BCB+组中发育较好的1-2细胞期重组胚对5头代孕母猪进行了移植,其中2头怀孕,1头顺利产下了6头健康胎儿。综合以上试验结果表明,利用BCB染色可作为一种有效的方法筛选体外成熟质量较高的猪卵母细胞,同时提高胚胎体外生产效率。

体细胞核移植生产梅山猪

本研究以中国优良地方品种梅山猪为材料,采用胰酶消化法获得猪胎儿成纤维细胞,通过使用Y染色体SRY基因引物SRY-1、SRY-2进行PCR扩增,结果发现,雄性胎儿样本能扩增出250bp的Y染色体特异性基因片段,而雌性胎儿样本未扩增出此条带;G1、G2、G3、G4和G5代的融合效率差异不显著(P>0.05),但G5代作为供体细胞核移植的重组胚胎卵裂率显著高于G1、G2、G3和G4代(P<0.05);使用G5代的胎儿成纤维细胞作为供核细胞,通过手术移植的方法,将重构胚胎移植到二元后备母猪体内,结果成功地获得了体细胞克隆梅山仔猪,并且仔猪全部为雄性胎儿,说明该性别鉴定方法不但操作简单,而且准确度高;经微卫星DNA多态性鉴定,确定克隆猪来自供核细胞,与代孕母猪无亲缘关系。本研究将为中国优质猪品种改良、保种、性别控制及建立人类疾病模型等研究提供有效可行的方法,为批量生产克隆优秀种猪提供了坚实的理论基础。

猪ACTA2基因的克隆、表达分析及其与生产性状的关联

为鉴定对猪生产性状有重要影响的新分子标记,文章采用电子克隆结合PCR方法获得了猪肌动蛋白α2(Actin alpha 2,ACTA2)基因编码区序列和部分基因组序列,建立了第2内含子C1554T替换的PCR-HinfⅠ-RFLP基因分型方法,在所检测的7个不同猪群中除大白和梅大群体外,其他群体中均是C等位基因频率高于T等位基因的频率。标记与性状关联分析发现ACTA2基因型与肩部背膘厚、臀部背膘厚、肥肉率、瘦肉率、股二头肌pH和肌内脂肪显著或极显著相关,TT基因型与CC基因型相比具有更高的瘦肉率以及更低的肥肉率和背膘厚。通过Real-time RT-PCR分析发现ACTA2在大白和梅山两个品种猪骨骼肌中的表达量都随着日龄的增加而降低,在各个阶段,梅山猪中的表达量都比大白猪中的表达量高。

藏绵羊mtDNA D-loop区的长度异质性研究

用PCR技术扩增藏绵羊线粒体DNA(mtDNA)控制区时,发现藏绵羊群体中存在个体间和个体内的mtDNA长度变异现象。DNA测序表明,长度变异发生在mtDNA D-loop区靠近tRNApro220～520 bp的位置,由该区域75 bp的串联重复序列的重复数目的差异造成。在检测的27个个体组成的藏绵羊群体中,四个串联重复的个体有23个,占总群体数的85.2%;三个串联重复的个体有3个,占11.1%;既有三串联重复又有四串联重复的异质性个体有1个,占3.7%。线粒体DNA异质性现象产生的原因和意义有待进一步研究。

肉鸡沙门菌病的流行情况及防控对策

1流行情况及其危害 沙门菌病自19世纪以来即广泛见于世界各国的不同品种、不同日龄的鸡。该病多以种鸡受沙门菌污染或在孵化过程中鸡胚受到污染为主。鸡群间的相互传播及污染的饲料、饮水、器具、粪便及其它禽类也可造成污染致病，

猪分级卵母细胞体外成熟时间规律的研究

试验根据猪卵丘-卵母细胞复合体（COCs）的颗粒细胞层数,把COCs分成A、B、C和D级,A、B级用于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,C级用于体外分别培养24、32、38、44、48、54和60 h,观察它们不同时间排出极体数,然后将排出极体的卵母细胞孤雌激活。结果发现,A和B级COCs培养48 h时成熟率最高（83.2%和78.0%）,明显高于同级水平培养24、32和38 h的成熟率;不同级别COCs体外培养相同时间,A与B级成熟率差异不显著（P〉0.05）,但二者与C级的成熟率差异显著（P〈0.05）;体外培养48 h COCs卵裂率最高（81.7%）,与培养38 h前的卵裂率差异显著（P〈0.05）。结果表明,A、B级卵母细胞更适于体外培养,能获得高的成熟率和卵裂率,COCs周围颗粒细胞对卵母细胞的成熟有显著影响;COCs培养38 h之前,部分虽能看到极体,但激活后卵裂率极低,说明卵母细胞并未真正成熟,通常通过排出极体判断卵母细胞成熟是不够准确的,COCs体外培养44~48 h是成熟的最佳时期,能为体细胞核移植提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。

猪卵母细胞极体排出的规律

试验把猪卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complexes,COCs)于体外分别培养24、32、38、44、48和54 h,观察它们在不同时间排出的极体数,以研究体外卵母细胞排出极体的规律。结果表明,A级和B级的COCs培养48 h的极体排出率最高(83.2%和65.7%),明显高于同级水平培养24、32和38 h的;不同级别COCs体外培养相同时间后,A级与B级的极体排出率差异不显著(P﹥0.05),但两者与C级的差异显著(P﹤0.05)。由此可见,A级、B级COCs能获得高的极体排出率,培养48 h的极体排出达到高峰,排出过程呈现前期上升快、后期下降慢的变化趋势。

猪去核无透明带卵母细胞电融合参数的探讨

试验通过采用不同场强、电场时程和脉冲次数对去核的猪体外成熟卵母细胞电融合参数进行比较研究,观察细胞融合情况。结果表明,在电场时程30μs、1次直流脉冲(DC)的情况下,电场强度0.8kV/cm时卵母细胞的融合率为94.7%,显著高于其他各组(P<0.05);当电场强度为0.8kV/cm、1次直流脉冲的情况下,电场时程60和90μs时,卵母细胞融合率为86.5%和83.8%,差异不显著(P>0.05),但显著低于30μs时的电融合效率(P<0.05);在电场强度为0.8kV/cm,电场时程为30μs的情况下,1次电脉冲激活卵母细胞的融合率(94.7%)和2次电脉冲的融合率(95.6%)无显著差异(P>0.05),但两者显著高于3次电脉冲的融合率(81.7%)(P<0.05)。通过对各组进行比较,在电场强度为0.8kV/cm、电场时程为30μs、1次直流脉冲的电刺激可以对体外成熟的猪卵母细胞取得较好的融合效果。