新生仔猪大肠杆菌病的防治

为了更好地防治新生仔猪大肠杆菌病,本试验将已确诊为新生仔猪大肠杆菌病猪场的母猪随机分成疫苗免疫组、疫苗免疫联合药物防治组、药物防治组和对照组共4个组,进行新生仔猪大肠杆菌病防治试验,分别统计各组母猪的平均产仔数以及仔猪黄痢的发病率和死亡率。结果显示,药物防治组、疫苗免疫组和疫苗免疫联合药物防治组的母猪平均产仔数分别为11.7头、11.5头和11.4头,与对照组(11.4头)无明显差别;仔猪发病率分别为12.57%、7.51%和3.51%,死亡率分别为5.14%、2.31%和1.17%,与对照组相比均有较大程度的降低。结果表明,试验猪场除了加强饲养管理外,采用疫苗免疫和药物防治相结合的方法,可有效降低新生仔猪大肠杆菌病的发生。

鸡滑液囊支原体病的诊断及防控技术研究进展

滑液囊支原体病是一种由滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae)引起的鸡(Gallus gallus f. domestic)的急性或慢性传染病,可导致雏鸡死亡、呼吸困难、跛行、产蛋下降等,给家禽养殖业造成较大经济损失。概述了滑液囊支原体病主要诊断技术和防控技术的研究进展,并针对其研究进展分析其优缺点,以期为防治滑液囊支原体病提供参考。

湖北省2个规模化蛋鸡养殖场环境细菌监测分析

为了解蛋鸡养殖场环境中病原菌流行情况,试验采集湖北省不同地区2个规模化蛋鸡养殖场不同位置的空气、水线和饲料样品进行病原菌检测,并采用16S rDNA测序分析样品中的优势病原菌。结果显示:饲料样品中细菌总数符合《GB 13078—2017饲料卫生标准》,而鸡舍风机附近空气及水线中细菌总数均较高;空气中优势病原菌是芽孢杆菌和葡萄球菌,饲料和水线优势菌为芽孢杆菌。结果表明,规模化蛋鸡养殖场饲料中的芽孢杆菌易污染水线和空气,风机附近是细菌污染重点区域,应定期消毒。

A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析

【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组织接种DF-1细胞进行病毒分离,通过PCR、ELISA及间接免疫荧光试验(IFA)等方法进行亚群鉴定,进一步对分离株gp85基因的相似性和变异情况进行分析。【结果】剖检结果可见病死鸡肾脏、脾脏肿大,肺脏出血,表面可见灰白色肿瘤结节;组织匀浆接种DF-1细胞后,ELISA检测发现细胞上清P27抗原呈阳性;IFA检测发现,感染细胞里有特异性绿色荧光;PCR鉴定能同时扩增出A(692 bp)、B(847 bp)和J(545 bp)亚群的特异性条带。鉴定结果表明,从该病死鸡中分离到A、B和J亚群ALV毒株,分别命名为HBYC2022-A、HBYC2022-B和HBYC2022-J。分离株gp85基因核苷酸相似性分析显示,HBYC2022-A与江苏株JS-A1201相似性最高,为99.6%;HBYC2022-B与江苏株JS-B1204相似性最高,为99.7%;而HBYC2022-J与黑龙江株PK19FA01、广西株GX20YL12 J及安徽株AHaq02相似性均为100%。此外,分离株gp85基因高突变区域(hr1、hr2)氨基酸序列并未出现特殊点突变。【结论】鸡群存在A、B和J不同亚群ALV的混合感染情况,提示国内养禽场需提高警惕并加强针对ALV各亚群的流行病学调查。

鸡胚免疫新城疫疫苗后宿主法氏囊转录组学分析

【目的】通过转录组学分析鸡胚免疫新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)TS09-C株后宿主法氏囊内免疫关键基因及信号通路分子转录差异,探究免疫后宿主法氏囊内免疫相关分子的调控反应。【方法】将60只18胚龄SPF鸡胚随机分为免疫组和对照组,30枚/组,免疫组将NDV TS09-C株通过羊膜腔接种鸡胚,剂量为103.0 EID 50/枚,注射体积为0.1 mL,对照组以同样的方法接种等体积PBS。检测免疫后不同时间点肺脏、胸腺、脾脏和法氏囊组织的病毒载量。选取病毒载量最高的法氏囊组织进行转录组学测序后,筛选免疫相关差异表达基因并分析其参与的主要功能及通路。【结果】免疫后1 d法氏囊组织中即可监测到病毒,免疫后3 d病毒载量达到最高。将免疫后3 d的法氏囊进行转录组学分析,与对照组相比,免疫组有453个基因上调、98个基因下调,其中免疫相关基因有36个上调、10个下调。免疫相关差异表达基因主要富集于自噬和细胞因子-细胞因子受体相互作用的免疫相关通路。差异表达基因蛋白互作分析显示,自噬通路中富集的BCL2与其他免疫相关基因有较多互作关系,且在B细胞活化、分化、免疫系统发育等功能注释中均有参与。【结论】本研究结果揭示了鸡胚免疫NDV TS09-C株后法氏囊内调控B细胞活化、分化的潜在靶向基因及通路,为进一步研究该毒株鸡胚免疫后B淋巴细胞调控的分子机制提供新的信息。

鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。

湖北地方鸡种鸡场弱毒疫苗ALV的分离与鉴定

为探明湖北省地方鸡种鸡场禽白血病净化后出现反弹的原因,通过病毒分离、PCR扩增、基因测序及分子生物学分析,有针对性地检测了种鸡场活疫苗ALV污染情况。结果表明,从活疫苗中分离出一株ALV是外源性ALV-J亚群病毒。

湖北地区商品油菜籽品质分析

研究收集检测湖北油菜主产区商品籽的品质,旨在为优质油菜籽的生产和利用提供参考。采集湖北油菜籽主要种植区夏收油菜籽,分别按照国标法检测油菜籽硫甙、芥酸、粗脂肪、粗蛋白质等化学成分含量以及脂肪酸组成,并采用两步消化法检测油菜籽能量、粗脂肪和粗蛋白的动物消化利用率。结果显示:①湖北地区商品油菜籽芥酸和硫甙达标率分别为64.71%和94.12%;②粗脂肪、粗蛋白含量分别为33.10%~45.34%和16.07%~26.93%;③饱和脂肪酸含量为4.9%~6.7%,油酸含量为32.3%~65.1%,亚油酸含量为13.2%~20.2%,亚麻酸含量为8.4%~9.7%;④油菜籽粗脂肪和粗蛋白的消化率分别为62.69%~67.11%和76.53%~81.09%。

间接免疫荧光法测定新城疫病毒滴度的研究

为快速确定新城疫病毒含量,以鸡抗新城疫病毒多克隆抗体为一抗、FITC标记的兔抗鸡IgG为二抗,通过对反应条件优化,建立了检测新城疫病毒含量的间接免疫荧光法(IFA)。结果显示:IFA最佳时间是病毒感染后4 d,一抗最佳稀释度为1∶100,二抗最佳稀释度为1∶200。利用该方法对新城疫病毒不同毒力毒株进行滴度测定,并与常规的致细胞病变(CPE)观察法相比,表明IFA方法在测定弱毒株含量时优势明显,其敏感性高于CPE方法,且结果可靠,易判定,有望应用于新城疫活疫苗的生产。

乙型脑炎疫苗研发及应用研究进展

乙型脑炎是由日本脑炎病毒引起的一种人兽共患的蚊媒传染病,它对人类危害巨大,并且给养猪业造成了严重的经济损失,目前临床上还无有效的药物用于治疗该病,而接种乙型脑炎疫苗能有效预防该疫病的流行。自乙型脑炎病毒疫苗应用以来,乙型脑炎的发病率大大下降。论文介绍了乙型脑炎疫苗的发展过程及生产工艺技术,总结了灭活疫苗、减毒活疫苗以及嵌合减毒活疫苗的免疫效果、优势和不足,最后探讨了当前乙型脑炎疫苗可能存在的安全问题以及新型乙型脑炎疫苗的发展方向,以期为新型乙型脑炎疫苗的研发提供参考,为乙型脑炎的防控提供新的思路与科学依据。

tRNA修饰酶GidA家族蛋白研究进展

葡萄糖抑制的分裂蛋白A(GidA)是一种tRNA修饰酶,在原核生物和真核生物中都非常保守,参与对tRNA的摇摆碱基尿嘧啶进行修饰,然后解码以腺嘌呤或鸟嘌呤结尾的密码子。GidA的这种修饰作用对蛋白质的精确解码和高效翻译至关重要。近年来,对GidA在细胞中的功能研究较多,发现GidA不仅调控细胞的形态还与致病性密切相关,而该蛋白在人类中的同源蛋白MTO1的突变与心肌病变、呼吸障碍、癫痫等多种疾病相关。作者查阅了相关资料,对GidA功能与结构的研究进行综述,以期为了解病原菌的致病机制与人类相关疾病的发病机理提供参考。

一株多重耐药产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性的研究

湖北省某猪场新生仔猪发生以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,对送检病料,通过细菌培养、革兰氏染色、PCR等方法进行鉴定,确定新生仔猪病是由产肠毒素大肠杆菌感染引起。药敏试验结果表明,该分离菌株对喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢类等药物敏感;对青霉素类、四环素类、氯霉素类、磺胺类等药物耐药,主要是阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、四环素、多西环素、磺胺异恶唑等。

一株多重耐药猪链球菌的分离鉴定与生物学特性研究

从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试验结果表明,分离菌株对利福平敏感;对氟苯尼考、头孢噻肟中度敏感;对氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、多西环素、青霉素G、红霉素、万古霉素、克林霉素、磺胺甲恶唑和利奈唑胺12种药物耐药。通过PCR扩增耐药基因,结果表明,分离菌株携带四环素类抗性基因tetO与大环内酯类抗性基因ermB、ermTR。

山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。

水禽细小病毒选择压力与基因重组分析

通过对临床水禽细小病毒进行PCR检测、基因组测序和进化分析,确定分离毒株的基因型。进一步通过Paml、RDP软件对分离株的基因组进行选择压力和基因重组分析,确定分离株的演化趋势。结果表明,分离的3株水禽细小病毒均属于新型鹅细小病毒,分别命名为YiCH株、AnQ株和XiY株,基因组长度分别为5 056、5 056、5 068 bp。3个分离株与新型鹅细小病毒M15株亲源关系最近,其中XiY株两端ITR区域191~196位、4 878~4 883位均有6个碱基插入。对分离株进行选择压力分析,分离株VP蛋白检测出3个正选择位点,分别为116Q、261A、485S。重组分析显示,分离株YiCH株和AnQ株都存在重组现象,以XiY株为主要亲本株、GPV 06-0329株为次要亲本株重组而成。

一株猪圆环病毒2d基因型毒株的全基因组序列及其衣壳蛋白的小鼠免疫原性分析

旨在确定引起湖北省某规模化猪场断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要病原。本研究采集该猪场具有PMWS典型临床症状的仔猪组织样品,经PCR检测,发现其存在猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)感染。对阳性样品中PCV2全基因组进行扩增和测序后,与国内外流行毒株进行全基因组和ORF2基因的比对,分析其核苷酸同源性。通过猪肾上皮细胞系PK-15对病毒进行分离培养和鉴定,对其核衣壳蛋白Cap的抗原表位和小鼠免疫原性进行分析和评估。病毒分离鉴定结果表明,成功分离到1株PCV2毒株(名称:XY2022;GenBank登录号:OM249965.1),全基因组长度为1767 nt,在PK-15细胞上的毒价为10~(5.70)TCID_(50)·mL^(-1);序列分析结果显示,XY2022属于PCV2d,与参考毒株的全基因组核苷酸相似性为94.3%~99.8%,ORF2核苷酸相似性为89.2%~99.6%;Cap的免疫原性分析和测定结果显示,相比于其他基因型毒株的Cap,XY2022 Cap的线性免疫优势区、线性中和表位和构象中和表位均存在差异位点,PCV2d(XY2022)Cap和PCV2b(WH)Cap均可诱导小鼠机体产生抗PCV2的中和抗体,但2d Cap诱导的中和抗体水平更稳定。本研究为湖北省PCV2的流行病学研究和变异毒株的防控提供了参考,可为研究PCV2致病机制和开发新型疫苗提供材料。

新城疫病毒Mukteswar株反向遗传平台的建立

为了建立新城疫疫苗株Mukteswar株的反向遗传操作系统,根据Mukteswar株的基因序列设计了9对引物,扩增获得基因组片段,通过Overlap PCR和In-Fusion无缝克隆的技术,将9个片段拼接和插入至pACNR-T7中,获得了Mukteswar株全长cDNA克隆质粒pAC-Mukteswar。将其和3个辅助质粒(pVAX-NP、pVAX-P和pcDNA-L)共转染至预先感染了痘病毒vTF7-3的BHK-21细胞,成功拯救出重组病毒rMukteswar。对rMukteswar的生长曲线、最小致死剂量的平均致死时间(MDT)等生物学特性进行测定,结果显示rMukteswar具有和野生株相似的增殖特性和毒力。成功建立了新城疫疫苗株Mukteswar的反向遗传操作系统,为研发高效率表达外源病原体蛋白的新城疫载体疫苗奠定了基础。

二甲酸钾预防沙门菌感染小鼠的效果评价及对肠道菌群的影响

二甲酸钾(potassium diformate,KDF)为酸化剂的代表之一,在2001年被欧盟批准可作为饲料添加剂使用,在2005年被我国批准作为饲料添加剂。目前已有较多的研究表明KDF可以显著提高动物的生长性能,然而关于KDF对传染病预防作用的直接证据的研究还比较少。本研究旨在通过体外抑菌试验及小鼠感染模型,在体外和体内评价KDF对致病菌的预防效果,并检测KDF对小鼠肠道菌群的影响,以探讨KDF的作用机理。在体外检测KDF对养殖场中常见病原菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)后,选取3~4周龄,体重12~15 g的C57/BL6雌鼠,分组饲喂一周后感染鼠伤寒沙门菌,记录KDF饲喂组、KDF饮水组和对照组小鼠感染后的体重变化(n=6),并在感染后第6天将小鼠安乐死检测其盲肠组织载菌量(n=6)、血清炎性细胞因子水平(n=6)和盲肠病理变化(n=3)。另外选取两组3~4周龄,体重12~15 g的C57/BL6雌鼠(n=5),饲喂含有KDF的饲料两周后采集其粪便,利用16S rRNA测序技术分析饲喂KDF对小鼠盲肠菌群的影响。结果表明,KDF对沙门菌、大肠杆菌等病原菌的MIC为3.125 mg·mL^(-1),对金黄色葡萄球菌和巴氏杆菌等的MIC为6.25 mg·mL^(-1)。在体内,KDF预处理显著降低了小鼠感染沙门菌后血液和盲肠的载菌量(P<0.05),显著降低了感染小鼠的血液中炎性细胞因子IL-6、IL-12和TNF-α的水平(P<0.05),并缓解了小鼠盲肠的病理变化。同时,KDF显著降低了小鼠盲肠菌群的多样性(P<0.01),表示与对照组相比存在差异物种。此外,KDF组小鼠的盲肠物种丰富度下降,在门水平,KDF组中变形菌门的相对丰度显著升高(P<0.001);在科水平,KDF组中多杆菌科的相对丰度显著下降(P<0.05);在属水平,阿克曼菌属、布劳特氏菌属、乳酸杆菌属、真杆菌属等相对丰度升高。综上表明,KDF在体外对常见病原菌具有显著的抑制效果,在小鼠体内具有预防肠道致病菌沙门菌感染的效果。使用KDF后小鼠的肠道菌群发生了显著变化,阿克曼菌、布劳特菌、乳酸杆菌、真杆菌等有益菌属丰度的升高可能对动物的肠道健康起到积极作用。

鸭疫里默氏杆菌病病原分离鉴定与血清抗体检测

湖北某鸭场10日龄雏鸭发生疑似鸭疫里默氏杆菌病,观察其临床具有神经症状,剖检具有心包炎、肝周炎和气囊炎等典型病变。无菌采集发病鸭脑组织进行细菌分离,并取血清进行抗体检测。分离菌经过菌落形态、染色形态、PCR以及血清学鉴定为Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌,血清OmpA-ELISA抗体反应呈阳性。15种抗生素的药敏试验结果显示分离菌对萘啶酸等喹诺酮类药物耐药,对头孢曲松等头孢类药物高度敏感,结果为鸭疫里默氏杆菌病防控提供依据。

鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

为了查明监利县某鸭场产蛋鸭突然死亡的病因,对样品进行细菌分离、生化鉴定、PCR扩增鉴定、致病性试验及药敏试验。结果表明,分离菌与多杀性巴氏杆菌同源性达99.88%,分离菌的荚膜抗原血清型特异性基因PCR产物与荚膜血清A型基因同源性达99.90%,确定病原菌为荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌;该菌株对大观霉素高度敏感,对阿米卡星、新霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、克林霉素、阿奇霉素等中度敏感,对头孢曲松、链霉素、复方新诺明、磺胺异恶唑、氟苯尼考、四环素、呋喃妥因、洁霉素等具有耐药性。