山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。

一株多重耐药产肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及生物学特性的研究

湖北省某猪场新生仔猪发生以剧烈腹泻、排出黄色粪便并迅速脱水死亡为主要症状的疾病,对送检病料,通过细菌培养、革兰氏染色、PCR等方法进行鉴定,确定新生仔猪病是由产肠毒素大肠杆菌感染引起。药敏试验结果表明,该分离菌株对喹诺酮类、氨基糖苷类、头孢类等药物敏感;对青霉素类、四环素类、氯霉素类、磺胺类等药物耐药,主要是阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、四环素、多西环素、磺胺异恶唑等。

一株多重耐药猪链球菌的分离鉴定与生物学特性研究

从湖北省某猪场分离到一株猪链球菌,通过细菌培养、革兰氏染色镜检、16S rRNA序列比对、荚膜多糖抗原血清分型等方法鉴定分离菌株为猪链球菌2型,命名为SS2-XY202021。分离菌株的毒力基因型为mrp-epf-sly+orf2+fbps+gapdh+89k+。药敏试验结果表明,分离菌株对利福平敏感;对氟苯尼考、头孢噻肟中度敏感;对氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、四环素、多西环素、青霉素G、红霉素、万古霉素、克林霉素、磺胺甲恶唑和利奈唑胺12种药物耐药。通过PCR扩增耐药基因,结果表明,分离菌株携带四环素类抗性基因tetO与大环内酯类抗性基因ermB、ermTR。

链球菌的危害及天然化合物抗链球菌作用的研究进展

链球菌种类众多,对人类危害严重的三种链球菌为肺炎链球菌、变异链球菌与猪链球菌。目前,肺炎链球菌是导致儿童、老人死亡的重要病原菌,变异链球菌是龋齿的主要病因,而猪链球菌是人畜共患病原菌,上述三种链球菌对畜牧业和人类健康造成重大危害。然而,随着抗生素的不合理使用,这三种链球菌的耐药性逐年升高。天然化合物有毒副作用较小、不易产生耐药性的特点,是开发抗链球菌药物的重要资源宝库。文章综述了不同种类天然化合物(茶多酚类、生物碱类、黄酮类、抗菌肽类、精油类等)抗链球菌的作用(结合溶血素、作用于ATP酶、抑制拓扑异构酶、影响细菌生长分裂等),以期为研发抗链球菌的天然化合物提供参考。

鸡滑液囊支原体病的诊断及防控技术研究进展

滑液囊支原体病是一种由滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae)引起的鸡(Gallus gallus f. domestic)的急性或慢性传染病,可导致雏鸡死亡、呼吸困难、跛行、产蛋下降等,给家禽养殖业造成较大经济损失。概述了滑液囊支原体病主要诊断技术和防控技术的研究进展,并针对其研究进展分析其优缺点,以期为防治滑液囊支原体病提供参考。

鸡滑液囊支原体的分离鉴定及药敏试验

为弄清湖北省某蛋鸡场180日龄鸡群出现呼吸道症状和产蛋率下降的病原,采集病料进行病原的分离鉴定与药敏试验,用形态学观察方法和分子生物学方法对分离株进行了形态学观察和16S rRNA基因鉴定,并用鸡胚感染试验对分离株进行致病性试验。结果显示,病原分离鉴定结果仅滑液囊支原体阳性,镜检观察到典型的“煎蛋样”菌落;16S rRNA序列与已报道的滑液囊支原体的具有高度同源性;鸡胚感染试验显示,分离株导致鸡胚发育迟缓,胚体弱小,从弱小胚体内可再次分离出滑液囊支原体;药敏试验结果显示滑液囊支原体分离株对泰妙菌素、四环素和盐酸克林霉素敏感。结果表明,从产蛋下降的鸡群中成功分离到1株滑液囊支原体,为临床该病的防治提供了科学依据。

杨梅素和二氢杨梅素抑菌效果评估及其在杨树花中含量的测定

为了研究杨树花中潜在的抑菌活性成分杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的作用机制及其在杨树花中的含量,试验采用微量稀释法测定杨树花中杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC);采用菌落计数法测定两种成分对鸡白痢沙门氏菌的杀菌曲线;利用结晶紫染色法测定两种成分对鸡白痢沙门氏菌生物被膜形成的抑制率;建立用高效液相色谱测定杨树花中杨梅素和二氢杨梅素含量的方法。结果表明:杨梅素和二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌的MIC分别为312.5μg/mL和625μg/mL,MBC分别为625μg/mL和1 250μg/mL。两种药物在1/2MIC浓度以上均对鸡白痢沙门氏菌有明显的杀灭效果;2MIC浓度时,杨梅素组细菌在10小时时被杀灭,二氢杨梅素组在8小时时被杀灭。同时1/2MIC杨梅素对生物被膜形成的抑制率达到64.6%(P<0.01)。建立的液相色谱方法线性关系、精密度、重复性良好,杨树花中杨梅素的含量为185.26μg/g、二氢杨梅素的含量为485.94μg/g。说明杨梅素及二氢杨梅素对鸡白痢沙门氏菌均有较好的体外杀菌效果且在杨树花中含量较高,其可能是杨树花发挥抑菌作用的重要活性成分。

C型产气荚膜梭菌生产用菌种种子批的建立与鉴定

为建立C型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)生产用菌种种子批,以C型产气荚膜梭菌C59-2株第2代基础种子作为原始种子,对原始种子通过接种改良厌气肉肝汤和肉肝胃酶消化汤连续传代至第13代,分别对基础种子1代(F1)、第5代(F5)、第10代(F10)和第13代(F13)基础种子进行纯粹检验、培养特性鉴定、生化特性鉴定、产毒素能力的测定、血清型鉴定、免疫原性鉴定。结果表明,各项指标均合格,可作为仔猪大肠杆菌病、C型产气荚膜梭菌病二联灭活疫苗的生产用菌种用于疫苗的生产,基础种子批定为F1~F10代。

GidA调控猪链球菌氨基酸代谢谱的分析

为比较猪链球菌中gidA缺失菌株与野生菌株氨基酸代谢之间的差异,揭示GidA调控氨基酸代谢的规律,为猪链球菌致病性的解析以及防控提供理论依据,分别收集gidA缺失菌株、野生菌株菌体,采用高效液相色谱法(HPLC)、质谱仪在正离子模式下进行质谱分析,检测样本中30种氨基酸及其衍生物的含量,比较gidA缺失菌株、野生菌株菌体中氨基酸代谢谱的差异。结果表明,2种菌株中精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、丙氨酸、缬氨酸、色氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、肌酸酐及鸟氨酸具有显著差异(P<0.05,倍数差异>1.2),其中精氨酸上调约4倍,天冬酰胺下调约17倍。说明tRNA修饰酶GidA缺失引起猪链球菌氨基酸代谢异常,尤其是精氨酸与天冬酰胺,其机制可能与猪链球菌致病性下降相关。

C 型产气荚膜梭菌抗原含量与免疫攻毒保护的关系

采用不同含量的C型产气荚膜梭菌毒素抗原制备3种灭活疫苗,分别免疫怀孕母猪,同时设立不免疫对照组。母猪分娩后,对免疫组和对照组母猪所产并采食初乳24 h内仔猪分组后攻毒,静脉注射最小致死量的C型产气荚膜梭菌毒素,另设不免疫对照组母猪所产仔猪为正常对照,攻毒后连续观察7 d,统计各试验组仔猪的发病和保护情况。结果表明,C型产气荚膜梭菌灭活疫苗抗原含量与攻毒保护率具有良好的平行关系,当疫苗中毒素含量不低于3000 MLD/mL时,免疫组攻毒保护率均不低于80%。确定了使仔猪获得保护的产气荚膜梭菌毒素最低抗原含量为3000 MLD/mL。

基于鸡白痢沙门菌LPS的D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立

通过热酚水法提取并纯化鸡白痢沙门菌的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),以LPS作为包被抗原,建立D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法。结果显示,通过方阵滴定法等确定抗原包被质量浓度为2.233 mg/L;血清最佳稀释度为1∶200,最佳作用时间为60 min;最适封闭条件为5%脱脂乳封闭60 min;酶标二抗最适工作质量浓度为1∶8000,作用60 min;底物显色时间为15 min;阴阳性判定标准为S/P值≥0.5。特异性、敏感性和重复性验证表明,该方法可特异性检测鸡白痢沙门菌等D群沙门菌的阳性血清,与鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌等家禽病原菌的阳性血清无交叉反应,其检测灵敏度是鸡白痢平板凝集的400倍,批间重复和批内重复变异系数均小于10%。对临床血清的检测结果表明,该方法与Biochek公司的D群抗体检测试剂盒的阳性符合率为94.67%,阴性符合率为98.11%,总符合率为98.59%。结果表明,该检测方法可用于临床鸡白痢沙门菌等D群沙门菌感染的抗体检测。