一例猪圆环病毒3型与猪圆环病毒2型混合感染的实验室诊断

2016年美国报道了一种新型病毒猪圆环病毒3型(Porcine Circovirus 3,PCV3)。随后,包括中国在内的许多国家报道了该病的流行。2018年4月,湖北省襄阳市某猪场送样品至本实验室检测。本实验室利用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、一步法逆转录PCR(One Step Reverse Transcription PCR,One Step RT-PCR)及多重PCR方法分别检测了猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)、PCV2及PCV3。结果CSFV、PRRSV均为阴性。PCV2、PCV3为阳性且存在混合感染现象。经采取综合防控措施后,本次疫情得到控制。

湖北省某规模化种猪场主要疫病免疫效果分析

为了评估湖北省武汉市某规模化种猪场猪群主要疫病的免疫水平,对采集的228份血清样品进行了猪瘟等主要疫病的病原体抗体检测,结果发现:猪瘟病毒抗体、猪伪狂犬病毒gB抗体、猪伪狂犬病毒gE抗体(野毒株检测)、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体、猪O型口蹄疫病毒抗体、猪O型口蹄疫病毒3ABC抗体(野毒株检测)的阳性率分别为89.91%、85.09%、9.21%、81.14%、51.32%和0。提示该种猪场应完善免疫程序,强化免疫,制订监测计划;同时应完善生物安全体系的建设,加强饲养管理等,以期达到有效控制和逐步净化疫病的目的。

湖北省羊衣原体流行病学调查

利用间接血凝(IHA)和酶联免疫吸附测定(ELISA),对湖北省羊养殖场进行了衣原体流行病学调查。结果表明,羊衣原体在湖北省平均阳性率为10.7%,湖北省羊衣原体感染率保持稳定。

湖北省一例猪链球菌的分离与鉴定

从湖北省武汉市江夏区某猪场具有严重呼吸道症状的疑似病例中,通过临床解剖采集猪的脑组织、肺组织、扁桃体组织、关节液等病料进行细菌的分离培养、革兰氏染色、菌落形态观察、PCR鉴定及药敏试验。结果表明,分离到的一株细菌为猪链球菌,经PCR分型鉴定结果为2型猪链球菌,药敏试验显示,该菌对阿莫西林、氨苄西林高度敏感,为猪场用药提供了参考依据。

乳胶凝集试验快速检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的研究

通过将羧化聚苯乙烯乳胶与大肠杆菌O157:H7 Intimin蛋白单克隆抗体进行偶联,对最佳偶联抗体IgG量、最佳偶联时间等条件进行优化,建立了快速检测大肠杆菌O157:H7的乳胶凝集试验方法。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异、简便等优点,适于临床应用,为大肠杆菌O157:H7的快速诊断提供了技术支撑。

羊口疮病毒湖北株B2L基因的克隆与遗传进化分析

为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)B2L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-B2L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株B2L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示,B2L基因PCR扩增产物大小为1 137 bp,编码379个氨基酸,系统进化树显示HB-YX株与Gen Bank参考毒株的核苷酸序列同源性为97.0%~99.0%,与福建FJ-GS株同源性高达99%亲缘关系最近,属于同一分支。

乳胶凝集试验快速检测鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

将鸭疫里默氏杆菌重组蛋白OmpA致敏羧化聚苯乙烯乳胶试剂,建立一种可快速检测鸭疫里默氏杆菌抗体的检测方法。结果表明,该检测方法快速、敏感、特异,操作简单,适合临床现场快速筛查,对该病的流行病学调查及防控有重要意义。

家禽养殖舍微生物气溶胶研究进展

微生物气溶胶在病原的传播中扮演重要的角色,家禽养殖舍是微生物气溶胶的高污染区,从微生物气溶胶的种类、危害及国内外污染现状等进行综述,以期为中国家禽养殖舍微生物气溶胶的研究与控制提供依据。

转录组测序技术在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)能导致母猪繁殖障碍及仔猪呼吸困难等症状,严重威胁全球养猪业的健康发展。目前,PRRSV的致病机制及其与宿主的互作机理并不完全清楚。近年来,随着高通量测序技术的快速发展,转录组测序技术已被广泛应用于PRRSV的研究中,为深入解析PRRSV的致病机理及其与宿主的互作机制提供了一种全新的研究工具。作者从感染应答、蛋白功能、毒株、疫苗、抗病品种5个方面对近年来转录组测序技术在PRRSV研究中的应用进行了综述分析,对其筛选的差异表达基因(DEGs)和通路进行总结,以期为未来PRRSV转录组学研究提供参考。

我国猪群中多杀性巴氏杆菌的基因型分析

本研究旨在了解我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌(Pm)的主要基因型。利用荚膜基因分型、脂多糖(LPS)基因分型、多位点序列分型(MLST)对2013年12月—2017年12月4年间来源于我国各地区规模化猪场患有疑似呼吸系统疾病的病死猪肺、鼻拭子、气管、肝等样品中分离鉴定的Pm进行基因型分析,并对23种主要毒力基因进行检测。结果表明,当前在我国猪群中流行的Pm的荚膜基因型为A(48.85%)、D(42.75%)、F(2.67%),优势基因型为A和D;LPS基因型为L3(25.00%)和L6(75.00%)型,优势基因型为L6;MLST基因型为ST3(21.25%)、ST10(27.50%)、ST11(42.50%)、ST12(2.50%)、ST16(2.50%)、ST74(1.25%)及ST75(2.50%),优势基因型为ST3、ST10和ST11。如果将荚膜基因型、LPS基因型和MLST基因型组合起来看,当前在我国猪群中流行的Pm的主要基因型为荚膜:脂多糖:MLST基因型A:L3:ST3(20.00%)、A:L6:ST10(26.25%)及D:L6:ST11(42.50%)。毒力基因检测的结果发现部分毒力基因的分布表现出一定的"基因型偏好性"。结果提示,D:L6:ST11是我国猪群中流行的多杀性巴氏杆菌的主要基因型,可能与我国猪群中由多杀性巴氏杆菌导致的呼吸道疾病密切相关。

猪瘟疫苗免疫抗体检测与分析

为评估湖北洪湖某猪场猪瘟疫苗的免疫效果,研究采用猪瘟ELISA抗体检测试剂盒,对该猪场种猪及不同日龄商品猪的猪瘟疫苗免疫抗体水平进行了检测与分析,结果显示种猪的抗体阳性率均达到97%以上,猪瘟疫苗首免前哺乳仔猪的母源抗体阳性率为67%,疫苗首免后21 d免疫抗体阳性率为54%,二免后21 d免疫抗体阳性率为93%。表明该猪场哺乳仔猪在猪瘟疫苗首免时,母源抗体水平较高,导致首免后猪瘟抗体水平提高缓慢,免疫抗体效价较低,整齐度较差,应及时调整和优化免疫程序。

耐氟喹诺酮类药物禽源大肠埃希菌gyrA基因的检测分析

探讨不同禽源大肠埃希菌中喹诺酮类药物的耐药情况及耐药基因gyrA的分布和突变特征。采用K-B药敏纸片法、gyrA基因的PCR扩增,对9株大肠埃希菌进行喹诺酮类药物试验,并将gyrA基因的PCR产物测序,对测序结果采用DNA MAN、DNA Star、MEGA6等软件分析。药敏试验结果表明,C1、C2、C3菌株对左氧沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星敏感,D1、D2、D3、B1、B2和B3菌株对左氧沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星均表现为耐药和中介;gyrA基因的测序结果表明,除B1菌株有1处核苷酸突变位点和B2菌株有14处核苷酸突变位点;B2菌株gyrA基因的氨基酸突变发生在87位Ile→Val替代、101位Leu→Met替代、102位Ala→Ser替代、129位Lys→Gln替代。9株禽源大肠埃希菌的同源性和进化树分析表明,不同禽源耐氟喹诺酮类药物的大肠埃希菌菌株中B2菌株gyrA基因与其他9株菌株相比,同源性在90%左右,进化树不在一个分支上,研究中的B2菌株将为大肠埃希菌的氟喹诺酮类耐药机制的研究提供候选菌株。

生物膜、毒力基因和耐药基因对APEC的致病性作用

禽致病性大肠杆菌病(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)是危害养禽业发展的主要细菌性病原之一,给养禽业的发展带来了严重危害。为研究APEC的致病性与耐药性之间的关系,从毒力基因的分布、生物膜的形成能力、耐药基因的分布等三个方面探讨了生物膜的形成能力与毒力基因、耐药基因在致病性中的作用,为后期研究禽大肠杆菌的致病机理及耐药机制等提供理论基础,并为开展禽大肠杆菌病的流行病学调查及监测、防控禽大肠杆菌病的流行提供理论数据。

某规模化猪场伪狂犬病抗体检测与分析

为了掌握湖北省黄冈市某规模化猪场猪伪狂犬病病毒(PRV)免疫抗体水平和野毒感染情况,试验应用猪PRV-gB和PRV-gE抗体ELISA检测试剂盒,对采集的622份血清样品,进行了PRV-gB和PRV-gE抗体的监测,并对3次检测结果进行了统计分析,结果表明:母猪群PRV-gE抗体从20.2%降至7.0%,仔猪及育成猪群PRV-gE抗体从21.8%降至5.0%;母猪群、仔猪和育成猪群PRV-gB抗体阳性率则分别从70.8%、57.3%升至93.0%、96.0%。

灰雁黏质沙雷菌的鉴定及其耐药性分析

为研究2016年武汉地区灰雁粪便中所产红色色素的未知菌的类别及其耐药性,经细菌分离、生化鉴定、细菌16SrDNA通用引物等鉴定,确定1株病原菌为黏质沙雷菌。经药敏试验发现黏质沙雷菌对萘啶酸、头孢噻肟、环丙沙星、阿米卡星、复方新诺明、庆大霉素、甲氧嘧啶等敏感,对头孢他啶、氨曲南、氨苄西林等中介,对头孢曲松、四环素、呋喃妥因、链霉素、磺胺异恶唑耐药。了解黏质灰雁沙雷菌的耐药情况,对环境中食源性肠道菌进行监测,为今后禽源沙雷菌抗生素替代药物的开发提供潜在的候选菌株。

鸭IFN-β启动子及其NF-κB结合位点荧光素酶报告质粒的构建与活性检测

通过PCR方法,扩增得到鸭I型干扰素β(IFN-β)基因启动子功能区域的DNA片段和其4个重复NF-κB结合位点的DNA片段,亚克隆到含萤火虫荧光素酶报告基因pGL4.2-basic载体上,构建了包含鸭IFN-β启动子及其NF-κB结合位点的荧光素酶报告质粒pduIFN-β-luc和4×NF-κB-luc;分别将构建的两个报告质粒与海肾荧光素酶内参质粒pRL-TK用JetPEITM转染试剂共转染至鸭胚成纤维细胞系DEF,在转染24 h后,用poly(I∶C)刺激转染细胞,结果表明,与未刺激组相比,刺激组的荧光素酶活性均显著增加。为进一步研究鸭天然免疫信号通路提供了重要的研究工具。

武汉周边地区部分鸡场新城疫抗体水平检测与分析

对武汉周边8个养鸡场474份血清进行新城疫抗体检测。结果表明,新城疫平均抗体水平在5.96log2～8.23log2,7/8养鸡场新城疫抗体水平比较一致,抗体水平在6log2～10log2,比较理想;1/8养鸡场新城疫整体抗体水平不均匀,部分鸡的抗体水平过低,不具有保护力,鸡群整体存在发病风险。该结果可为养殖场新城疫防控提供参考。

猪乙型脑炎疫苗免疫试验

乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）又称日本乙型脑炎、流行性乙型脑炎,俗称乙脑,是由流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）引起的一种人畜共患传染病[1],也是导致猪繁殖障碍的主要疾病之一。蚊虫是该病的传播媒介,呈明显的季节性流行。猪是该病的扩散宿主,乙型脑炎病毒可通过蚊虫叮咬传染给人。

番鸭核转录因子亚基基因的克隆与分析

细胞核因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)普遍存在于真核细胞内,在天然免疫、炎症、代谢等方面起着重要作用。为获得番鸭NF-κB的nf-kb1和nf-kb2亚基序列,试验设计引物对这两个亚基进行了克隆、序列鉴定及进化分析。

体外诱导禽巴氏杆菌链霉素耐药株及耐药机制的初步分析

为了研究多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)对链霉素(Streptomycin,Str)药物敏感性变化及其耐药机制,采用体外诱导法对禽源Pm亲本敏感株(C48-1)进行诱导后成功获得Str耐药株,并对Str耐药株的最小抑菌浓度(MIC)、生化特性、生长曲线、耐药稳定性、耐药基因点突变以及耐药逆转性进行了研究。结果表明,与亲本株相比,Str耐药株生化特性与生长曲线无显著差异,MIC值由8μg/m L上升至1 024μg/m L;发现耐药基因Str A、Str B,且核糖体基因rps L编码的氨基酸发生了Lys43→Thr突变;耐药逆转性试验中羰基氰氯苯腙(CCCP)将Str耐药株MIC值降为16μg/m L。逐步递增药物浓度可以诱导禽源Pm对氨基糖苷类药物的耐药性,其耐药机理为磷酸转移酶类对氨基糖苷类抗生素结构的修饰作用,核糖体靶位点突变和外排泵的过量表达。