微小RNA-497通过靶向调控B细胞淋巴瘤／白血病-2基因对胃癌细胞增殖及凋亡的作用及机制

目的观察微小RNA（miRNA，miR）-497靶向调控B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）基因对胃癌细胞增殖及凋亡的调控作用。方法选取胃癌组织及相应癌旁组织，分别采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot检测组织中miR-497及bcl-2蛋白表达；选取胃癌细胞株SGC-7901，分别转染miR-497模拟物及对照寡核苷酸，采用RT-PCR检测细胞中miR-497表达，采用Westernblot检测bcl·2蛋白表达，采用噻唑蓝（MTr）法检测细胞增殖，采用流式细胞仪检测细胞凋亡；分别将野生型bcl-2 3’端非编码区域（3’-UTR）质粒（bcl-2-wt）和突变型bcl-2 3’．UTR质粒（bcl-2-Mut）与miR-497模拟物或对照寡核苷酸共转染至胃癌细胞株SGC-7901，采用双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。结果（1）与癌旁组织比较，胃癌组织中miR-497表达明显降低（4．5±1．6比21．5±4．3，P〈0．05），bcl-2蛋白表达明显增高（389．0±61．2比75．5±27．1，P〈0．05）。（2）与转染对照寡核苷酸比较，转染miR-497模拟物可使胃癌细胞SGC．7901中miR497表达增高（15．7-4-2．3比3．84-1_1，P〈0．05），bcl-2蛋白表达降低（58．3±15．2比257．4±41．6，P〈0．05）。（3）与转染对照寡核苷酸比较，转染miR497模拟物可使胃癌细胞SGC-7901增殖活性显著降低（P〈0．05）。（4）与转染对照寡核苷酸比较，转染miR-497模拟物可使胃癌细胞SGC-7901总凋亡比例显著增高（P〈0．05）。（5）与转染对照寡核苷酸比较，共转染miR-497模拟物与bcl-2-wt可使胃癌细胞SGC-7901荧光素酶活性降低（0．39±0．09比0．98±0．11，P〈0．05），而共转染miR-497模拟物与bcl-2-Mut则胃癌细胞SGC-7901荧光素酶活性无显著变化（1．11±0．15比0．97±0．12，P〉0．05）。结论miR-497可通过靶向bcl-2抑制胃癌细胞增殖、同时促进细胞凋亡。