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冻融后2-细胞胚胎发育至囊胚建立人胚胎干细胞系
1
作者
杨华
刘锋
+5 位作者
王钦
邓志华
邹彦
史秋雯
丘映
李东升
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第23期2568-2570,共3页
目的用解冻后废弃胚胎及部分患者捐献的冷冻胚胎建立胚胎干细胞系。方法用程序解冻法解冻2001-2007年来我生殖中心就诊的患者剩余冷冻胚胎,培养至囊胚,Pronase酶去除透明带后,全囊胚置于小鼠饲养层(MEF)中培养获得原代细胞,机械法结合...
目的用解冻后废弃胚胎及部分患者捐献的冷冻胚胎建立胚胎干细胞系。方法用程序解冻法解冻2001-2007年来我生殖中心就诊的患者剩余冷冻胚胎,培养至囊胚,Pronase酶去除透明带后,全囊胚置于小鼠饲养层(MEF)中培养获得原代细胞,机械法结合Ⅳ型胶原酶消化法传代,并利用细胞形态观察、免疫荧光染色、核型分析、畸胎瘤切片胚层分析方法对所建胚胎干细胞系进行鉴定。结果序贯培养23枚废弃胚胎,有4枚培养到囊胚阶段;去除透明带后有2枚在MEF上贴壁生长,但只有1株成功扩增稳定传代至第80代;细胞集落呈典型的鸟巢状,有稳定的46XY核型;细胞系表达SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81抗原,RT-PCR检测有Nanog、Oct-4、Sox2等基因表达;同时在体外能分化为内、中、外3个胚层。结论解冻后2~3细胞Ⅲ~Ⅳ级的废弃胚胎仍具有发育形成囊胚的潜能,并利用所得囊胚采用酶去透明带全胚培养法能建立稳定增殖的hESC细胞系。
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关键词
人胚胎干细胞系
废弃胚胎
2-细胞
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职称材料
题名
冻融后2-细胞胚胎发育至囊胚建立人胚胎干细胞系
1
作者
杨华
刘锋
王钦
邓志华
邹彦
史秋雯
丘映
李东升
机构
广西壮族自治区南宁市第二人民
医院
生殖医疗中心
湖北省太和医院郧阳医学院胚胎干细胞重点实验室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第23期2568-2570,共3页
基金
南宁市科学与技术开发计划项目(200801024C)
文摘
目的用解冻后废弃胚胎及部分患者捐献的冷冻胚胎建立胚胎干细胞系。方法用程序解冻法解冻2001-2007年来我生殖中心就诊的患者剩余冷冻胚胎,培养至囊胚,Pronase酶去除透明带后,全囊胚置于小鼠饲养层(MEF)中培养获得原代细胞,机械法结合Ⅳ型胶原酶消化法传代,并利用细胞形态观察、免疫荧光染色、核型分析、畸胎瘤切片胚层分析方法对所建胚胎干细胞系进行鉴定。结果序贯培养23枚废弃胚胎,有4枚培养到囊胚阶段;去除透明带后有2枚在MEF上贴壁生长,但只有1株成功扩增稳定传代至第80代;细胞集落呈典型的鸟巢状,有稳定的46XY核型;细胞系表达SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81抗原,RT-PCR检测有Nanog、Oct-4、Sox2等基因表达;同时在体外能分化为内、中、外3个胚层。结论解冻后2~3细胞Ⅲ~Ⅳ级的废弃胚胎仍具有发育形成囊胚的潜能,并利用所得囊胚采用酶去透明带全胚培养法能建立稳定增殖的hESC细胞系。
关键词
人胚胎干细胞系
废弃胚胎
2-细胞
分类号
R329.21 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
冻融后2-细胞胚胎发育至囊胚建立人胚胎干细胞系
杨华
刘锋
王钦
邓志华
邹彦
史秋雯
丘映
李东升
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
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